一种预防或便秘的中药组合物及其制备方法和应用
1.本发明属于中药处方技术领域，涉及一种中药组合物及其制备方法和应用，具体涉及一种预防或便秘的中药组合物及其制备方法和应用。
背景技术：
2.功能性便秘(functionalconstipation，fc)是临床上常见的消化系统疾病之一，fc不但会严重降低患者的生活质量水平，并且可引发急性心脑血管疾病的发生，还增加了发生结肠癌的风险。目前，fc的确切病理生理学机制尚未明了，可能与结肠传输和肠道分泌异常，以及肛门直肠盆底肌肉运动失调有关。
3.fc是由多种病因引起的一种慢性疾病，主要分为慢传输型便秘(slowtransitconstipation，stc)、功能性出口梗阻型便秘(outletobstructiveconstipation，ooc)和混合型便秘(mixedconstipation，mc)三种类型。西医fc的主要措施有：膳食纤维补充剂、渗透性泻药、刺激性泻药、促动力药、促分泌药、润滑性泻剂、微生态制剂和生物反馈等，其中以药物为主。但长期服用刺激性泻药可以引起结肠黑变病，损伤肠肌间神经而加重便秘，服用渗透性泻药可以引起电解质紊乱，服用莫沙必利可有引起q-t延长、甚至尖端扭转型室性心律失常等风险。
4.结肠慢传输性便秘(slow transit constipation，stc)是功能性便秘中最常见的一种类型，系指由于结肠动力障碍，使肠道内容物滞留于结肠或结肠通过缓慢的便秘，是目前中老年人的常见病之一，给人们的生活带来了很大的影响。国内外对于stc的包括一般疗法、西药、生物反馈疗法、骶神经刺激、粪菌移植、外科手术等，诸多疗法均具有局限性，难以从根本上解决问题。现有结肠慢传输型便秘西药毒副作用大，长期使用则产生依赖性，且使病情逐渐加重，愈加顽固。手术患者损伤大，术后并发症多，巨大的创伤及术后并发症带来的痛苦常常让患者望而却步。
5.中医学便秘已有几千年的历史，便秘应以辩证论治为纲，中药在数千年的便秘历史中已显示出一定的优势：多靶点、多途径、疗效确切、毒副作用较小、无依赖性且资源丰富，但现有技术关于有效便秘尤其是结肠慢传输性便秘的中药策略还很鲜少。
技术实现要素：
6.针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种中药组合物及其制备方法和应用，具体提供一种预防或便秘的中药组合物及其制备方法和应用。
7.为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
8.第一方面，本发明提供一种预防或便秘的中药组合物，所述预防或便秘的中药组合物的制备原料包括生黄芪、生地、枳实、生白术、火麻仁、瓜蒌、肉苁蓉、威灵仙、皂角刺。
9.本发明所涉及的中药组合物中生黄芪性温味甘，可补益肺脾之气，生地性寒味甘
苦，功效清热生津，润肠通便，两者共为君药，合用共奏益气养阴，润肠通便之效；其中枳实性温味酸苦，功效行气消积除痞，生白术性温，味酸苦，功效健脾除湿通便，全瓜蒌味甘微苦性寒，能润燥滑肠，泻下通便，火麻仁性平，味甘，有润燥滑肠之效，以上四药合用为臣，共奏健脾行气，攻下滑肠之效；其中威灵仙性温，味辛，功效理气除湿，皂角刺性温，味辛，功效祛湿化浊，肉苁蓉性温，味甘，功效补肾益精，润肠通便，三药佐以理气化浊，补肾润肠。诸药同用共奏益气养阴，清热除湿，润肠通便之功，便秘疗效可观。本发明所涉及的中药组合物具有益气养阴，清热除湿，润肠通便的作用，尤其适合气阴两虚，湿热气滞的便秘患者。
10.本发明所涉及的中药组合物中各中药组分科学配伍，在预防或便秘主要是功能性便秘尤其是结肠慢传输性便秘上的功效非常显著。通过试验可知：该中药组合物能够调整与便秘相关的蛋白水平，使之恢复正常水平；能够使粪便含水率和数量恢复正常水平；能够改善便秘患者的小肠推进率；能够改善便秘患者的结肠固有肌层厚度和结肠组织结构完整性。此外还具有中药药味较少、有效剂量较小的优点。
11.本发明所涉及的各中药均可从一般中药店购得，其规格符合中国药典标准。
12.优选地，所述预防或便秘的中药组合物的制备原料以重量份数计包括生黄芪10-20份、生地10-20份、枳实5-15份、生白术5-15份、火麻仁5-15份、瓜蒌5-15份、肉苁蓉5-15份、威灵仙5-15份、皂角刺1-10份。
13.当本发明所涉及的中药组合物中各成分以上述特定的质量配比进行组合时，其在预防和便秘方面具有更加显著的功效。
14.所述生黄芪的重量份数可以选择10份、11份、12份、13份、14份、15份、16份、17份、18份、19份、20份等。
15.所述生地的重量份数可以选择10份、11份、12份、13份、14份、15份、16份、17份、18份、19份、20份等。
16.所述枳实的重量份数可以选择5份、6份、7份、8份、9份、10份、11份、12份、13份、14份、15份等。
17.所述生白术的重量份数可以选择5份、6份、7份、8份、9份、10份、11份、12份、13份、14份、15份等。
18.所述火麻仁的重量份数可以选择5份、6份、7份、8份、9份、10份、11份、12份、13份、14份、15份等。
19.所述瓜蒌的重量份数可以选择5份、6份、7份、8份、9份、10份、11份、12份、13份、14份、15份等。
20.所述肉苁蓉的重量份数可以选择5份、6份、7份、8份、9份、10份、11份、12份、13份、14份、15份等。
21.所述威灵仙的重量份数可以选择5份、6份、7份、8份、9份、10份、11份、12份、13份、14份、15份等。
22.所述皂角刺的重量份数可以选择1份、2份、3份、4份、5份、6份、7份、8份、9份、10份等。
23.上述各项数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
24.进一步优选地，所述预防或便秘的中药组合物的制备原料以重量份数计包括生黄芪13-17份、生地13-17份、枳实7-11份、生白术7-11份、火麻仁8-12份、瓜蒌8-12份、肉
苁蓉7-11份、威灵仙7-11份、皂角刺4-8份。
25.本发明所涉及的中药组合物的形式包括由各中药配方颗粒复配而成的颗粒剂、各中药配方颗粒复配并溶于水而成的溶液剂、将各中药饮片进行煎煮熬制而成的煎煮液或者煎煮液进一步浓缩而成的中药浸膏。
26.示例性地，所述中药组合物可以由如下方法制得。
27.第二方面，本发明提供一种根据第一方面所述的预防或便秘的中药组合物的制备方法，所述制备方法包括：将各中药制备原料与水混合，先大火煮沸，再文火煎煮，得煎煮液，此过程进行1-3次(1次、2次或3次)，合并煎煮液，即得。
28.优选地，所述水的质量为中药制备原料总质量的5-15倍，例如5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、11倍、12倍、13倍、14倍、15倍等，该数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
29.优选地，所述文火煎煮的时间为20-40min，例如20min、22min、25min、28min、30min、32min、35min、37min、40min等，该数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
30.优选地，将各中药制备原料与其总质量5-15倍的水混合，先大火煮沸，再文火煎煮20-40min，倒出汤药；再重新与其总质量5-15倍的水混合，先大火煮沸，再文火煎煮20-40min，合并煎煮液，即得。
31.优选地，所述合并煎煮液后还进行浓缩处理。
32.第三方面，本发明提供一种根据第一方面所述的预防或便秘的中药组合物在制备预防或便秘的药物中的应用。
33.优选地，所述便秘包括功能性便秘，进一步优选结肠慢传输性便秘。
34.第四方面，本发明提供一种根据第一方面所述的预防或便秘的中药组合物在制备肠道wnt-3a蛋白合成抑制剂、肠道β-连环蛋白合成抑制剂、肠道水通道蛋白3合成抑制剂、肠道囊性纤维化跨膜转导调节因子合成抑制剂或肠道5-羟胺合成抑制剂中的应用。
35.第五方面，本发明提供一种以非为目的的第一方面所述的预防或便秘的中药组合物在制备肠道wnt-3a蛋白合成抑制剂、肠道β-连环蛋白合成抑制剂、肠道水通道蛋白3合成抑制剂、肠道囊性纤维化跨膜转导调节因子合成抑制剂或肠道5-羟胺合成抑制剂中的应用。
36.本发明所涉及的中药组合物还可以用于肠道wnt-3a蛋白、肠道β-连环蛋白、肠道水通道蛋白3、肠道囊性纤维化跨膜转导调节因子或肠道5-羟胺的相关行为的基础研究中。
37.第六方面，本发明提供一种根据第一方面所述的预防或便秘的中药组合物在制备肠道闭合蛋白合成促进剂中的应用。
38.第七方面，本发明提供一种以非为目的的第一方面所述的预防或便秘的中药组合物在制备肠道闭合蛋白合成促进剂中的应用。
39.本发明所涉及的中药组合物还可以用于肠道闭合蛋白的相关行为的基础研究中。
40.相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
41.本发明所涉及的中药组合物中各中药组分科学配伍，在预防或便秘主要是功能性便秘尤其是结肠慢传输性便秘上的功效非常显著。通过试验可知：该中药组合物能够
sample prep kit(illumina，美国)，热循环pcr系统(applied biosystems geneamp 9700，thermo fisher scientific，美国)，quantustmfluorometer(promega，美国)，illumina miseq平台(illumina，美国)。
54.下述内容涉及的试验用药包括盐酸洛哌丁胺(hy-b0418a，medchemexpress，中国)。下述内容涉及的中药均为中药饮片。乳果糖(l812332-5g，上海麦克林生化科技有限公司，中国)。
55.制备例1
56.本制备例提供一种中药组合物(下述称之为芪地通便方)，由中药生黄芪15g，生地15g，枳实9g，生白术9g，火麻仁10g，瓜蒌10g，肉苁蓉9g，威灵仙9g，皂角刺6g组成。
57.其制备方法为：将所有中药原料与1000g水混合，先大火煮沸，再文火煎煮30min，倒出汤药；药渣再与500g的水混合，先大火煮沸，再文火煎煮30min，合并煎煮液，浓缩水煎液至200ml，即得。
58.对比制备例1
59.本制备例提供一种中药组合物，由中药生黄芪15g，生地15g，生白术12g，火麻仁13g，瓜蒌13g，肉苁蓉9g，威灵仙9g，皂角刺6g组成。其制备方法参照制备例1。
60.对比制备例2
61.本制备例提供一种中药组合物，由中药生黄芪15g，生地15g，枳实12g，火麻仁13g，瓜蒌13g，肉苁蓉9g，威灵仙9g，皂角刺6g组成。其制备方法参照制备例1。
62.对比制备例3
63.本制备例提供一种中药组合物，由中药生黄芪15g，生地15g，枳实12g，生白术12g，瓜蒌14g，肉苁蓉9g，威灵仙9g，皂角刺6g组成。其制备方法参照制备例1。
64.对比制备例4
65.本制备例提供一种中药组合物，由中药生黄芪15g，生地15g，枳实12g，生白术12g，火麻仁14g，肉苁蓉9g，威灵仙9g，皂角刺6g组成。其制备方法参照制备例1。
66.对比制备例5
67.本制备例提供一种中药组合物，由中药生黄芪15g，生地15g，枳实9g，生白术9g，火麻仁10g，瓜蒌10g，威灵仙14.5g，皂角刺9.5g组成。其制备方法参照制备例1。
68.对比制备例6
69.本制备例提供一种中药组合物，由中药生黄芪15g，生地15g，枳实9g，生白术9g，火麻仁10g，瓜蒌10g，肉苁蓉14.5g，皂角刺9.5g组成。其制备方法参照制备例1。
70.对比制备例7
71.本制备例提供一种中药组合物，由中药生黄芪15g，生地15g，枳实9g，生白术9g，火麻仁10g，瓜蒌10g，肉苁蓉12g，威灵仙12g组成。其制备方法参照制备例1。
72.对比制备例8
73.本制备例提供一种中药组合物，其组成与制备例1的区别仅在于将生白术等量替换为炒白术，其他组分及含量保持不变。其制备方法参照制备例1。
74.对比制备例9
75.本制备例提供一种中药组合物，其组成与制备例1的区别仅在于将生黄芪等量替换为炙黄芪，其他组分及含量保持不变。其制备方法参照制备例1。
76.实施例1
77.(1)试验分组：
78.雄性balb/c小鼠适应性喂养7天后，随机分为空白组(control)、模型组(model)、芪地通便方组、对照组1-9(对比制备例1-9)和阳性对照组(positive)，共13组，每组6只。
79.(2)模型建立及药物干预：
80.盐酸洛哌丁胺(10mg/kg/d)与生理盐水配置成0.2ml溶液给予除空白组外的小鼠灌胃，空白组则给予0.2ml的无菌水灌胃，1次/d，共14d。从造模第15天起，继续给造模药的同时开始药物干预。芪地通便方组和对照组1-9均分别给药18.906g/kg(其中18.906g为对应使用的中药组合物的中药饮片原料的总量)，体积0.2ml，相当于临床患者的标准用量；阳性对照组予乳果糖(3g/kg，0.2ml)灌胃给药，空白组和模型组用0.2ml的无菌水灌胃，1次/天，连续给药14天。第29天以二氧化碳安乐死小鼠取材。
81.(3)下述所有试验数据均采用spss 23.0(spss inc.，chicago，ibm,usa)统计分析，正态分布的计量资料采用均数加减标准差进行描述，多组间比较采用单因素方差分析，两两比较，方差齐采用lsd检验，方差不齐采用tamhane’s t2检验。非正态分布的计量资料采用中位数和四分位数间距median(p25,p75)进行描述，多组间比较采用kruskal-wallis非参数检验。p值《0.05被认为是统计学意义。采取graphpad prism 8.0.1(美国加利福尼亚州拉霍亚)进行作图。
82.(4)小鼠一般状况：
83.记录每只小鼠的体重(g)，每组小鼠的粪便情况、精神状态、活动度、毛发光泽。
84.造模期间，各组体重增长趋势如表1所示(以平均值呈现)：
85.表1
[0086][0087]
由表1数据可知：在造模期间，各组体重增长趋势小于空白组，给药14天后，模型组体重增加小于空白组，芪地通便方组、对照组1-9与阳性对照组体重增加大于模型组，且芪地通便方组的体重增长稍大于对照组1-9。
[0088]
第29天肉眼观察各组小鼠粪便情况，如图1所示(其中a为空白组、b为模型组、c为阳性对照组、d为芪地通便方组、e为对比组1、f为对比组5)：与空白组比，模型组粪便稍干硬、颗粒小；与模型组比，芪地通便方组、对照组与阳性对照组粪便较软润、颗粒大，且芪地通便方组与阳性对照组的粪便状态更优。
[0089]
(5)粪便含水率与粪便数量：
[0090]
实验最后一天收集每只小鼠5粒粪便，收集完成后称重取得粪便湿重，然后置于60℃烘干箱内干燥12小时，烘干后立即进行称重取得粪便干重。用下列公式计算平均粪便含水率。
[0091]
粪便含水率＝(湿重-干重)/湿重
×
100％
[0092]
实验最后一天收集3个小时内小鼠的粪便进行计数。
[0093]
结果如表2所示：
[0094]
表2
[0095][0096][0097]
由表2数据可知：模型组小鼠粪便含水率小于空白组，与模型组相比，芪地通便方组、对照组1-9与阳性对照组粪便含水率大于模型组，且芪地通便方组的粪便含水率显著高于对照组1-9。模型组小鼠粪便数量低于空白组，与模型组相比，芪地通便方组、对照组1-9与阳性对照组粪便数量大于模型组，且芪地通便方组的粪便数量显著大于对照组1-9。上述结果说明，在改善粪便含水率与数量方面，芪地通便方组疗效不差于乳果糖。
[0098]
(6)小肠炭末推进率：
[0099]
末次给药结束后，对所有实验小鼠禁食不禁水，持续12小时。12小时后给各组小鼠灌胃由5％阿拉伯树胶(a889414，上海麦克林生化科技有限公司，中国)与10％活性炭
(a805338，上海麦克林生化科技有限公司，中国)配制成的炭末混悬液，0.2ml/只，30分钟后麻醉并处死所有小鼠，剖腹剥离出小鼠小肠，测量幽门至回盲部上端的小肠全长，以及炭末在小肠移动的距离，用下列公式计算平均小肠炭末推进率。
[0100]
小肠炭末推进率(％)＝炭末在小肠移动的距离/幽门至回盲部上端的小肠全长
×
100％
[0101]
结果如表3所示：
[0102]
表3
[0103]
组别小肠炭末推进率(％)空白组94.29模型组70.38阳性对照组91.74芪地通便方组90.92对照组183.88对照组285.69对照组388.01对照组483.19对照组587.74对照组684.15对照组784.97对照组887.76对照组988.28
[0104]
由表3数据可知：与空白组相比，模型组小鼠小肠炭末推进率更小(p《0.01)，与模型组相比，芪地通便方组、对照组1-9与阳性对照组小肠炭末推进率显著增大，且芪地通便方组的小肠炭末推进率大于对照组1-9。上述结果说明，洛哌丁胺所致的便秘小肠推进减慢，符合慢传输型便秘的特征，在改善小肠推进率方面，芪地通便方组疗效不差于乳果糖。
[0105]
各组小鼠的小肠炭末推进试验结果图如图2所示：与表3结果一致。
[0106]
(7)组织病理学：
[0107]
将小鼠结肠取材后立即保存于10％中性福尔马林固定液中，包埋于石蜡中，切成3um的切片。石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯ⅰ20min-二甲苯ⅱ20min-无水乙醇ⅰ5min-无水乙醇ⅱ5min-75％酒精5min，自来水洗。苏木素染：切片入苏木素染液染3-5min，自来水洗，分化液分化，自来水洗，返蓝液返蓝，流水冲洗。伊红染：切片依次入85％、95％的梯度酒精脱水各5min，入伊红染液中染5min。脱水封片：切片依次放入无水乙醇i5min-无水乙醇ii 5min-无水乙醇ⅲ5min-二甲苯ⅰ5min-二甲苯ⅱ5min透明，中性树胶封片。显微镜下观察。
[0108]
结果如图3(放大20倍)和图4(放大40倍)所示：he染结果显示，各组结肠组织结构完整，与空白组比，模型组固有肌层较薄；与模型组比，芪地通便方组与阳性对照组固有肌层明显增厚，见图3(黑线)。肉眼观察，与空白组比，模型组杯状细胞数量减少，分布不均；与模型组比，芪地通便方组与阳性对照组杯状细胞数量增多，分布均匀，见图4。上述结果说明，洛哌丁胺所致的便秘结肠无明显病理改变，符合功能性便秘的特征，在改善结肠固有肌
层厚度，芪地通便方组疗效优于乳果糖；在改善状细胞数量方面芪地通便方不差于乳果糖。
[0109]
(8)elisa检测对stc小鼠结肠wnt-3a、β-catenin、aqp3、occludin、cftr、5-ht表达的影响：
[0110]
按试剂盒说明制备工作液、结肠组织匀浆、蛋白定量和wnt-3a、β-catenin、aqp3、occludin、cftr、5-ht表达含量的测定。
[0111]
结果如表4所示：
[0112]
表4
[0113]
组别wnt-3aβ-cateninaqp3occludincftr5-ht空白组31.62123.0312.54.2201147162.6模型组54.49198.6602.92.1691844216.9阳性对照组40.07114.3418.13.2221153173.1芪地通便方组32.02137.0431.63.7631232175.9对照组143.23164.5467.13.1351525193.5对照组244.68168.3486.72.4511597188.3对照组339.46151.4529.93.2761689185.6对照组442.57178.6483.43.2281483194.3对照组538.83156.3535.52.4691704184.3对照组641.75170.8473.23.1481479189.8对照组740.34162.2480.63.2821517187.9对照组839.51152.4449.43.6721319183.7对照组937.83141.6452.73.7541192180.6
[0114]
由表4数据可知：模型组小鼠wnt3a表达大于空白组(p《0.01)，与模型组相比，芪地通便方组wnt3a表达小于模型组(p《0.001)，阳性对照组wnt3a表达小于模型组(p《0.01)；
[0115]
模型组小鼠β-catenin表达大于空白组(p《0.01)，与模型组相比，芪地通便方组β-catenin表达小于模型组(p《0.01)，阳性对照组β-catenin表达小于模型组(p《0.001)；
[0116]
模型组小鼠aqp3表达大于空白组(p《0.001)，与模型组相比，芪地通便方组与阳性对照组aqp3表达小于模型组(p《0.01)；
[0117]
模型组小鼠occludin表达小于空白组(p《0.001)，与模型组相比，芪地通便方组occludin表达大于模型组(p《0.01)，阳性对照组occludin表达大于模型组(p《0.05)；
[0118]
模型组小鼠cftr表达大于空白组(p《0.05)，与模型组相比，阳性对照组cftr表达小于模型组(p《0.05)，芪地通便方组cftr表达小于模型组，但无统计学差异(p》0.05)；
[0119]
模型组小鼠5-ht表达大于正常组，但无统计学差异(p》0.05)，与模型组相比，芪地通便方组与阳性对照组5-ht表达小于模型组，但无统计学差异(p》0.05)。
[0120]
上述结果说明，在通过调节wnt-3a、β-catenin、aqp3、occludin、cftr、5-ht表达含量，改善肠道屏障、水盐平衡方面，从而达到比便秘的效果，芪地通便方组疗效优于对照组1-9，芪地通便方组疗效不差于乳果糖，甚至在wnt-3a、occludin两项指标优于乳果糖。
[0121]
实施例2
[0122]
(1)试验分组：
[0123]
雄性balb/c小鼠适应性喂养7天后，随机分为空白组(control)、模型组(model)、
芪地通便方组、阳性对照组(positive)，共4组，每组6只。
[0124]
(2)模型建立及药物干预：
[0125]
同实施例1。
[0126]
(3)肠道菌16s rdna测序：
[0127]
采用dna抽提试剂盒对样本的基因组dna进行提取，之后利用1％琼脂糖凝胶电泳与quantus
tm fluorometer检测dna浓度。以基因组dna为模板，按指定测序区域，合成带有barcode的特异引物。指定测序区域：16s rrna基因的v3-v4高变区，引物:338f/806r(5'-actcctacgggaggcagcag-3'/5'-ggactachvgggtwtctaat-3')。在热循环pcr系统上用transstart fastpfu dna polymerase进行pcr扩增。然后，使用2％琼脂糖凝胶检测pcr产物，使用axyprep dna凝胶提取试剂盒切胶回收pcr产物。采用truseqtm dna sample prep kit进行文库构建。在illumina miseq平台上进行测序。测序得到的原始序列用flash进行pair-end双端序列拼接及fastp进行质控和过滤后得到优化序列。
[0128]
(4)物种分类与注释：
[0129]
采用uparse(version 7.0.1090http://drive5.com/uparse/)进行物种注释与评估。用usearch v11对优化序列提取非重复序列，去除没有重复的单序列。按照97％相似性对非重复序列(不含单序列)进行操作分类单元(operational taxonomic units，otu)聚类，在聚类过程中去除嵌合体，得到otu的代表序列。采用rdp classifier贝叶斯算法对97％相似水平的otu代表序列进行分类学分析，并分别在各个分类学水平：domain(域)，kingdom(界)，phylum(门)，class(纲)，order(目)，family(科)，genus(属)，species(种)统计各样本的落物种组成。比对如下数据库得到各样本的物种分类与注释信息数据库：
[0130]
16s细菌和古菌核糖体数据库：
[0131]
silva(release138 http://www.arb-silva.de)；
[0132]
rdp(release 11.5http://rdp.cme.msu.edu/)；
[0133]
greengene(release 13.5http://greengenes.secondgenome.com/)；
[0134]
its真菌：
[0135]
unite(release 8.0http://unite.ut.ee/index.php)的真菌数据库。
[0136]
功能基因：
[0137]
fgr，rdp整理来源于genebank的(release7.3http://fungene.cme.msu.edu/)的功能基因数据库。
[0138]
(5)肠道菌生物信息：
[0139]
实验最后一天无菌收集每只小鼠5粒粪便于冻存管，液氮中迅速冷冻后转移至-80℃冰箱保存，供后续菌测序。基于美吉生物云平台(https://cloud.majorbio.com)对菌进行生物学信息比较，包括以下内容：
[0140]
(5.1)rank-abundance曲线
[0141]
反应微生物落的丰富程度和均匀程度；曲线越平滑下降表明样本的物种多样性越高、均匀度越好，而曲线快速陡然下降表明样本中的优势菌所占比例很高，多样性较低、均匀度较差。
[0142]
结果如图5所示：4组曲线平滑下降，表明样本的物种多样性较高，与阳性对照组比，空白组、模型组和芪地通便方组均匀度较好。
[0143]
(5.2)alpha多样性
[0144]
alpha多样性反应微生物落的多样性。以多样性指数作稀释曲线，反应测序数据量不同的样本中物种的丰富度，也可以用来说明样本的测序数据量是否合理，当曲线趋向平坦时，说明测序数据量合理，更多的数据量只会产生少量新的物种，反之则表明继续测序还可能产生较多新的物种。
[0145]
在属水平上采用ace指数进行alpha多样性分析，并经wilcoxon秩和检验判断组间差异是否显著，如图6所示(此图展示所选两样本间的显著性差异情况，*p＜0.05)：与空白组比，模型组和芪地通便方组肠道菌多样性更高(p《0.05)，与模型组比，芪地通便方组肠道菌多样性更高(p《0.05)，阳性对照组更低(p《0.05)，说明便秘可能导致肠道菌丰富度增高，芪地通便方干预后可能使肠道菌丰富度进一步增高，而乳果糖干预则可能使肠道菌丰富度降低。在out水平上采取coverage指数作稀释曲线，如图7所示，coverage指数稀释曲线在末端趋向平坦，说明测序数据量充足合理，即使有更多的数据量也只会产生极少量新的物种。
[0146]
(5.3)beta多样性
[0147]
beta多样性分析通过对不同生境或微生物落间的物种多样性进行组间比较分析，探索不同分组样本间落组成的相似性或差异性。包括pca分析(principal component analysis)，即主成分分析，pcoa分析(principal co-ordinates analysis)，即主坐标分析，与pca分析类似，但pcoa则不受限于距离算法，nmds分析。不同颜或形状的点代表不同分组的样本，两样本点越接近，表明两样本物种组成越相似。
[0148]
结果如图8所示(图中不同形态的点代表不同分组的样本，两样本点越接近，表明两样本物种组成越相似；横纵坐标表示相对距离，无实际意义，百分比表示主坐标轴对样本组成差异的解释度值)：pca图、pcoa图、nmds图4组肠道菌分离明显，表明4组肠道菌存在一定的组间多样性差异，空白组与模型组分离明显，表明便秘可能会导致产生与正常肠道菌不同的肠道菌，而无论是芪地通便方还是乳果糖干预后都表现出与模型组完全分离，表明芪地通便方或乳果糖便秘可能会使肠道菌发生与便秘肠道菌不同的变化。
[0149]
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的一种预防或便秘的中药组合物及其制备方法和应用，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
[0150]
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
[0151]
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。
技术特征：
1.一种预防或便秘的中药组合物，其特征在于，所述预防或便秘的中药组合物的制备原料包括生黄芪、生地、枳实、生白术、火麻仁、瓜蒌、肉苁蓉、威灵仙、皂角刺。2.根据权利要求1所述的预防或便秘的中药组合物，其特征在于，所述预防或便秘的中药组合物的制备原料以重量份数计包括生黄芪10-20份、生地10-20份、枳实5-15份、生白术5-15份、火麻仁5-15份、瓜蒌5-15份、肉苁蓉5-15份、威灵仙5-15份、皂角刺1-10份。3.根据权利要求2所述的预防或便秘的中药组合物，其特征在于，所述预防或便秘的中药组合物的制备原料以重量份数计包括生黄芪13-17份、生地13-17份、枳实7-11份、生白术7-11份、火麻仁8-12份、瓜蒌8-12份、肉苁蓉7-11份、威灵仙7-11份、皂角刺4-8份。4.根据权利要求1-3中任一项所述的预防或便秘的中药组合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：将各中药制备原料与水混合，先大火煮沸，再文火煎煮，得煎煮液，此过程进行1-3次，合并煎煮液，即得。5.根据权利要求4所述的预防或便秘的中药组合物的制备方法，其特征在于，所述水的质量为中药制备原料总质量的5-15倍。6.根据权利要求4或5所述的预防或便秘的中药组合物的制备方法，其特征在于，所述文火煎煮的时间为20-40min。7.根据权利要求4-6中任一项所述的预防或便秘的中药组合物的制备方法，其特征在于，将各中药制备原料与其总质量5-15倍的水混合，先大火煮沸，再文火煎煮20-40min，倒出汤药；再重新与其总质量5-15倍的水混合，先大火煮沸，再文火煎煮20-40min，合并煎煮液，即得；优选地，所述合并煎煮液后还进行浓缩处理。8.根据权利要求1-3中任一项所述的预防或便秘的中药组合物在制备预防或便秘的药物中的应用。9.根据权利要求1-3中任一项所述的预防或便秘的中药组合物在制备肠道wnt-3a蛋白合成抑制剂、肠道β-连环蛋白合成抑制剂、肠道水通道蛋白3合成抑制剂、肠道囊性纤维化跨膜转导调节因子合成抑制剂或肠道5-羟胺合成抑制剂中的应用。10.根据权利要求1-3中任一项所述的预防或便秘的中药组合物在制备肠道闭合蛋白合成促进剂中的应用。
技术总结
本发明涉及一种预防或便秘的中药组合物及其制备方法和应用，所述预防或便秘的中药组合物的制备原料包括生黄芪、生地、枳实、生白术、火麻仁、瓜蒌、肉苁蓉、威灵仙、皂角刺。本发明所涉及的中药组合物中各中药组分科学配伍，在预防或便秘主要是功能性便秘尤其是结肠慢传输性便秘上的功效非常显著。通过试验可知：该中药组合物能够调整与便秘相关的蛋白水平，使之恢复正常水平；能够使粪便含水率和数量恢复正常水平；能够改善便秘患者的小肠推进率；能够改善便秘患者的结肠固有肌层厚度和结肠组织结构完整性。此外还具有中药药味较少、有效剂量较小的优点。有效剂量较小的优点。有效剂量较小的优点。
