健脾安胎颗粒的制备工艺的制作方法
1.本发明属于药物制剂制备技术领域，具体涉及一种健脾安胎颗粒的制备工艺。
背景技术：
2.健脾安胎处方来自多年临床经验，是由何氏安胎饮改良而来。由苎麻根、黄芩、酒白芍、枸杞子、桑寄生、白术、菟丝子、墨旱莲、党参、生地黄(炭)、熟地黄(炭)、紫苏梗、甘草(炒)、黄芪(炒)、续断、阿胶珠16味中药组成，目前在临床上原以多剂量包装的合剂为用。为改进临床使用便利性等方面的不足，对健脾安胎方进行二次开发，在剂型和工艺路线的选择上，充分保留了临床上合剂的使用经验，在保证药效、安全性的基础上，开发出健脾安胎颗粒，易于保存、便于携带，更符合当今患者的需求，方便临床使用。
技术实现要素：
3.克服现有技术的不足，本发明提供了健脾安胎颗粒的制备工艺，通过优选制备工艺及中试研究对健脾安胎颗粒制备工艺路线中的提取、浓缩、纯化、成型等方法与参数进行优化，为产品质量提高提供可靠保障。
4.具体而言，本发明的技术方案如下：
5.本发明提供了一种健脾安胎颗粒的制备工艺，包括以下步骤：
6.(1)提取：苎麻根、黄芩、酒白芍、枸杞子、桑寄生、白术、菟丝子、墨旱莲、党参、生地黄(炭)、熟地黄(炭)、紫苏梗、甘草(炒)、黄芪(炒)、续断，十五味药加水煎煮两次，药液滤过，得到滤液；
7.(2)纯化浓缩：药液浓缩至相对密度1.05-1.10，静置，取上清液；
8.(3)阿胶珠处理：阿胶珠粉碎，加适量黄酒，浸泡过夜，隔水加热溶化，趁热过滤，取清膏，加入步骤(2)的上清液，浓缩至相对密度1.20～1.25；
9.(4)制粒：加入赋形剂和矫味剂适量，制粒，干燥，即得。
10.进一步的，所述步骤(1)为：取苎麻根、黄芩、酒白芍、枸杞子、桑寄生、白术、菟丝子、墨旱莲、党参、生地黄(炭)、熟地黄(炭)、紫苏梗、甘草(炒)、黄芪(炒)、续断至圆底烧瓶，饮片加水10倍量，煎煮30-60分钟，滤过，药渣再加柠檬籽水6-8倍量，煎煮30-60分钟，滤过，合并滤液。
11.进一步的，所述步骤(3)为：将阿胶珠粉碎过40目筛，加5倍量黄酒浸泡12小时，隔水加热使之溶化，趁热用100目筛过滤，取清膏，加入步骤(2)的上清液，浓缩至相对密度1.20～1.25。
12.进一步的，所述步骤(4)为：采用流化床喷雾制粒，赋形剂的用量约为0.7～0.8倍浸膏固形物量，并添加颗粒总量0.25％的矫味剂。
13.其中，所述步骤(2)、(3)中浓缩相对密度是在60℃～70℃时测量。
14.优选的，所述健脾安胎颗粒的制备工艺包括以下步骤：
15.(1)提取：取苎麻根、黄芩、酒白芍、枸杞子、桑寄生、白术、菟丝子、墨旱莲、党参、生
地黄(炭)、熟地黄(炭)、紫苏梗、甘草(炒)、黄芪(炒)、续断至圆底烧瓶，饮片加水6-10倍量，煎煮30-60分钟，滤过，药渣再加柠檬籽水6-8倍量，煎煮30-60分钟，滤过，合并滤液；
16.(2)纯化浓缩：药液浓缩至60℃～70℃下相对密度为1.05-1.10，静置，取上清液；
17.(3)阿胶珠处理：将阿胶珠粉碎过40目筛，加5倍量黄酒浸泡12小时，隔水加热使之溶化，趁热用100目筛过滤，取清膏，加入步骤(2)的上清液，浓缩至60℃～70℃下相对密度为1.20～1.25；
18.(4)制粒：加入赋形剂糊精的用量约为0.7～0.8倍浸膏固形物量，并添加颗粒总量0.25％的三氯蔗糖作为矫味剂，采用流化床喷雾制粒，干燥，即得。
19.进一步的，所述步骤(1)中柠檬籽水为：取饮片总重1/5-1/10倍的柠檬籽，加柠檬籽20倍量的水浸泡18-24小时，过滤。
20.进一步的，所述柠檬籽水ph＝5.0-6.0。
21.进一步的，所述各味药材以重量比计算为：苎麻根150-200份、黄芩90-130份、酒白芍100-150份、枸杞子100-150份、桑寄生150-200份、白术90-130份、菟丝子100-150份、墨旱莲100-150份、党参150-200份、生地黄(炭)100-150份、熟地黄(炭)100-150份、紫苏梗50-100份、甘草(炒)30-75份、黄芪(炒)160-210份、续断110-140份、阿胶珠85-140份。
22.优选的，所述各味药材以重量比计算为：苎麻根187.5份、黄芩112.5份、酒白芍125份、枸杞子125份、桑寄生187.5份、白术112.5份、菟丝子125份、墨旱莲125份、党参187.5份、生地黄(炭)125份、熟地黄(炭)125份、紫苏梗75份、甘草(炒)50份、黄芪(炒)187.5份、续断125份、阿胶珠112.5份。
23.与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
24.(1)根据出膏率大小和日服用饮片量的需要，对健脾安胎颗粒制备工艺进行严格控制，优化阿胶珠的前处理方法，将阿胶珠用黄酒溶化后加入，有效提高了l-羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、l-脯氨酸的含量以及驴源多肽a1、驴源多肽a2的含量，提升健脾安胎颗粒的质量品质；
25.(2)本发明优化水提取工艺，对十五味药材进行两次水提，且第二次水提采用柠檬籽水进行煎煮，提高了固形物提取率、黄芪甲苷总量，进一步对健脾安胎颗粒的质量进行提升。
附图说明
26.图1：阿胶珠薄层鉴别谱图
27.其中，1、2-不同洗脱量的阴性样品，3、4-不同洗脱量的样品，点样量均为20μl
28.5-甘氨酸，6-l-羟脯氨酸，7-丙氨酸，8-脯氨酸，点样量均为1μl
29.展开剂：苯酚-4％硼砂(4∶1)显剂：1％茚三酮乙醇溶液
30.图2：酒白芍薄层鉴别谱图
31.其中，1、2-不同提取方法的阴性样品，3、4-不同提取方法的样品
32.5-芍药苷，点样量均为10μl
33.展开剂：-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)显剂：5％香草醛硫酸溶液
34.图3：续断薄层鉴别谱图
35.其中，1、2-阴性样品，3、4-样品，点样量分别为2、5、2、5μl5-川续断皂苷vi，点样量为10μl
36.展开剂：二氯甲烷-甲醇-水(14∶7∶2)的下层溶液显剂：10％硫酸乙醇溶液
37.图4：黄芩薄层鉴别谱图
38.其中，1-阴性样品，点样量为8μl，2、3、4-样品，点样量分别为2、5、8μl
39.5、6-黄芩苷，点样量为5、8μl
40.展开剂：乙酸乙酯-丙酮-二甲基甲酰胺-冰醋酸酸-水(5∶2∶0.2∶0.3∶1)
41.显剂：2％三氯化铁乙醇溶液。
42.图5-8：黄芪甲苷作为健脾安胎颗粒的含量测定指标的部分谱图
43.图5：黄芪甲苷对照品溶液
44.图6：空白溶剂
45.图7：缺黄芪阴性溶液
46.图8：健脾安胎颗粒供试品溶液(乙腈-水30∶70)
47.图9：健脾安胎颗粒成品
具体实施方式
48.为了使本发明的目的、技术方案更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明做进一步的说明，但是本发明的保护范围并不限于这些实施例，实施例仅用于解释本发明。本领域技术人员应该理解的是，凡是不背离本发明构思的改变或等同替代均包括在本发明的保护范围之内。一、健脾安胎颗粒的制备工艺探究
49.1.方中阿胶珠的处理工艺
50.阿胶珠为阿胶用蛤粉烫制而成，根据阿胶传统服用方法，对影响阿胶珠溶化的主要因素包括阿胶珠的粉碎粒度、浸泡溶剂及用量等进行研究。
51.1.1浸泡溶剂选择
52.称取阿胶珠3份，每份100g，粉碎过40目筛，按表2安排进行试验，分别采用纯化水或黄酒浸泡12小时，隔水加热使之溶化。
53.观察不同浸泡溶剂中的阿胶珠溶化情况以及对氨基酸(l-羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、l-脯氨酸)、驴源多肽(驴源多肽a1、驴源多肽a2)有效成分含量的考察，试验结果见表1。
54.表1溶剂选择对阿胶珠溶化以及对l-羟脯氨酸、驴源多肽有效成分含量的考察结果
55.[0056][0057]
结果表明：阿胶珠用黄酒作为浸泡溶剂，其溶化效果更好，并且能够提高了l-羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、l-脯氨酸的含量以及驴源多肽a1、驴源多肽a2的含量，提升健脾安胎颗粒的质量品质。
[0058]
1.2粉碎粒度选择
[0059]
称取阿胶珠6份，每份100g，按表1安排进行试验，分别将不同粉碎程度的阿胶珠用黄酒浸泡一定时间后，隔水加热使之溶化。
[0060]
观察不同粉碎粒度的阿胶珠溶化情况，试验结果见表2。
[0061]
表2粉碎工艺对阿胶珠溶化考察
[0062][0063]
结果表明：将阿胶珠经粉碎后采用黄酒浸泡并隔水加热，其溶化的效果更好。
[0064]
1.3溶剂用量考察
[0065]
称取阿胶珠4份，每份100g，粉碎过40目筛，按表3安排进行试验，用黄酒浸泡12小时后，隔水加热使之溶化，并趁热用100目筛网过滤。
[0066]
观察阿胶珠的溶化及清膏的滤过情况，试验结果见表3。
[0067]
表3溶剂用量对阿胶珠溶化考察结果
[0068][0069][0070]
结果表明：阿胶珠粉碎后，选择用5倍量黄酒作为浸泡溶剂，不仅溶化效果好，且有利于后续滤过工艺。
[0071]
综合上述试验结果，确定方中阿胶珠的前处理工艺为：将阿胶珠粉碎过40目筛，加5倍量黄酒浸泡12小时，隔水加热使之溶化，趁热用100目筛过滤，备用。
[0072]
2.加水提取工艺研究
[0073]
2.1不同煎煮容器对提取效果的影响
[0074]
试验方法：称取批号为20211224的饮片，苎麻根15g、黄芩9g、酒白芍10g、枸杞子10g、桑寄生15g、白术9g、菟丝子10g、墨旱莲10g、党参15g、生地黄(炭)10g、熟地黄(炭)10g、紫苏梗6g、甘草(炒)4g、黄芪(炒)15g、续断10g各6份，置不同的煎煮容器中，按照“加10倍量水加热煎煮60min分钟，滤过，药渣再加10倍量水煎煮60分钟，滤过，合并滤液，浓缩至适量”的方法分别进行提取和浓缩。
[0075]
分别测定各试验号样品中的固形物，计算平均固形物提取率，以固形物提取率为指标，考察使用不同煎煮容器对药材提取的影响。结果见表4。
[0076]
表4提取方式考察结果
[0077][0078]
结果表明：不同的煎煮容器，对固形物提取率有较大的影响。
[0079]
采用煎药罐进行煎煮，因其罐体的密闭性问题，在提取时会有水分蒸发，而水分蒸发量的大小则直接影响固形物提取率。
[0080]
采用圆底烧瓶热回流提取时，水分几乎不会损失，提取效率相对更高，且与实际生产时的多功能提取罐比较，两者的提取原理一致。
[0081]
因此，在进行加水提取工艺研究时，采用密闭性好的圆底烧瓶更为适合。
[0082]
2.2加水提取工艺参数的考察
[0083]
根据预试验结果，发现本方的出膏率较大。参考《医疗机构中药煎药室管理规范》要求，并结合该方在原临床应用时提取次数均为2次的现状，将提取次数固定为2次，在工艺考察时重点对水溶剂、提取时间和加水量进行考察。
[0084]
采用单因素试验法，称取批号为20211224的饮片，苎麻根30g、黄芩18g、酒白芍20g、枸杞子20g、桑寄生30g、白术18g、菟丝子20g、墨旱莲20g、党参30g、生地黄(炭)20g、熟地黄(炭)20g、紫苏梗12g、甘草(炒)8g、黄芪(炒)30g、续断20g，按规定的提取方法进行试验。每个试验号平行2份。
[0085]
以固形物提取率、黄芪甲苷总量为指标，按照1∶1的权重进行综合评分，优选最佳提取工艺。试验结果见表5。
[0086]
表5提取工艺参数考察结果(n＝2)
[0087]
[0088][0089]
结果表明：试验号2的综合评分最高(797.76)。
[0090]
从实际生产省时节能角度综合考虑，将加水提取工艺确定为：饮片加水6-10倍量，煎煮30-60分钟，滤过，药渣再加柠檬籽水(ph＝5.0-6.0)6-8倍量，煎煮30-60分钟，滤过，合并滤液。
[0091]
2.3工艺验证试验
[0092]
分别称取批号为20211224的饮片，苎麻根30g、黄芩18g、酒白芍20g、枸杞子20g、桑寄生30g、白术18g、菟丝子20g、墨旱莲20g、党参30g、生地黄(炭)20g、熟地黄(炭)20g、紫苏梗12g、甘草(炒)8g、黄芪(炒)30g、续断20g，按上述试验号2优选的提取工艺方法进行三批验证试验。
[0093]
分别测定各试验号样品中的固形物提取率、黄芪甲苷总量，试验结果见表6。
[0094]
表6提取工艺验证试验考察结果
[0095][0096]
结果表明：三批验证试验样品的各项考察指标测定结果基本平行，说明优选出的提取工艺方法可行。
[0097]
3.纯化浓缩工艺研究
[0098]
3.1纯化工艺研究
[0099]
为保证健脾安胎颗粒的物质基础与原临床方剂应用基本一致，采用静置除杂的方式对纯化工艺进行研究。
[0100]
试验方法：将提取液分别浓缩至一定相对密度静置适宜时间，取上清液，弃去底部的沉淀而达到除杂目的。影响静置除杂的主要因素为浓缩后药液的相对密度和静置时间。考虑实际生产时间安排，提取浓缩后的药液静置时长一般均为静置过夜(约18小时左右)，故主要对对药液相对密度进行考察。
[0101]
分别称取批号为20211224的饮片，苎麻根45g、黄芩27g、酒白芍30g、枸杞子30g、桑寄生45g、白术27g、菟丝子30g、墨旱莲30g、党参45g、生地黄(炭)30g、熟地黄(炭)30g、紫苏梗18g、甘草(炒)12g黄芪(炒)45g、续断30g，按优选的提取工艺方法进行提取，并将药液浓缩至不同的相对密度范围，静置18小时。
[0102]
分别测定各试验号样品中的固形物提取率、黄芪甲苷总量，计算黄芪甲苷转移率，试验结果见表7。
[0103]
表7药液相对密度考察结果
[0104][0105]
结果表明：将药液浓缩至一定密度后静置过夜弃去沉淀后，可有效降低其固形物含量，除杂效果较好。
[0106]
综合考虑固形物提取率和黄芪甲苷转移率，确定纯化工艺为：药液浓缩至相对密度为1.05-1.10(60℃测)，静置过夜(约18小时)。
[0107]
3.2.浓缩工艺研究
[0108]
在目前的实际生产中，药液浓缩一般采用减压浓缩，浓缩设备基本为单效或多效浓缩器。
[0109]
由于本处方中各药味的主要成分均不属于挥发性或热敏性成分，因此浓缩时温度可控制在60℃～70℃范围内进行减压浓缩。
[0110]
在小试研究时，主要考察了60℃和70℃条件下减压浓缩后，浓缩液中指标成分的差异，结果见表8。
[0111]
表8浓缩温度考察结果
[0112][0113]
结果表明：浓缩温度在60℃～70℃时，对药液中指标成分的含量影响不大。
[0114]
4.制剂成型工艺研究
[0115]
4.1颗粒剂制粒方法的选择
[0116]
常用的中药制粒方法主要有湿法制粒、干法制粒、流化床喷雾制粒等。其中，流化床喷雾制粒是将物料混合、制粒、干燥操作在流化床设备中一步完成，是目前普遍应用的制粒成型技术。
[0117]
采用流化床喷雾制粒可大大减少辅料量，并且浸膏在最终成品颗粒中的含量可达到50～70％，制出的颗粒大小均匀、外形圆整、流动性好、生产效率高，便于自动控制。同时由于制粒过程在密闭的制粒机内完成，生产过程不易被污染，成品质量得到保证。
[0118]
因此，本品在制剂成型时选择流化床喷雾制粒作为制粒方法。
[0119]
4.2流化床喷雾制粒时药液相对密度的控制
[0120]
本工艺采用流化床喷雾制粒法直接得到颗粒，故制粒时药液的相对密度控制十分关键，若药液太稀，则颗粒的干燥时间延长；若药液太稠，则易堵塞喷头。
[0121]
经实验摸索及生产经验，取静置过夜后的药液上清液，加入经前处理的阿胶珠清膏，继续将其浓缩至相对密度1.20～1.25(60℃测)的清膏，加入赋形剂，可顺利制粒，得到符合质量要求的颗粒。
[0122]
4.3辅料品种、用量的选择及颗粒制备
[0123]
在成型工艺研究时，选用了糊精、三氯蔗糖作为辅料，并根据表9中的颗粒成型处方中的辅料配比进行流化床制粒，考察各个配方的制粒可行性。
[0124]
表9颗粒剂成型处方
[0125][0126]
对上述所制得颗粒样品分别进行性状、成型性、流动性、吸湿性等指标的比较，从而筛选出最佳辅料配比。
[0127]
5.制粒成型工艺可行性
[0128]
经试验发现，因4号成型处方的辅料总量仅为0.6倍清膏固形物量，导致颗粒制备过程中浸膏无法全部喷完；1号、2号、3号成型处方的辅料加入总量分别为1倍、0.8倍、0.7倍的清膏固形物量，均可顺利制得颗粒。
[0129]
5.1颗粒成型难易度及颗粒得率考察
[0130]
1号、2号、3号成型处方的制粒难易度及颗粒得率考察结果，见表10。
[0131]
表10不同成型处方的颗粒成型难易度及颗粒得率考察
[0132][0133]
5.2性状描述
[0134]
对采用1号、2号、3号成型处方所制得的颗粒进行外观、泽及口感等性状比较，结果见表11。
[0135]
表11性状描述
[0136][0137]
5.3溶化性测定
[0138]
取制成的颗粒10g，加热水200ml，搅拌5分钟，立即观察，应全部溶化或轻微浑浊。考察结果见表12。
[0139]
5.4成型性考察
[0140]
取三份颗粒样品各20g，依次通过1号筛与5号筛，收集能通过1号筛但不能通过5号筛的颗粒，称重，按下列公式计算，考察结果详见表12。
[0141]
成型率(％)＝过筛后颗粒重量/过筛前颗粒重量
×
100％
[0142]
5.5流动性考察
[0143]
通过用ft-104b休止角测定仪进行休止角测定的方式，比较颗粒的流动性。
[0144]
取颗粒适量，将其从一定高度(h)的漏斗中自然下落到水平板上，直至漏斗中不再有颗粒流出时，分别从两个方向读取水平板的半径刻度，得到所形成的圆锥底面的直径，求出直径的平均值(l)，再按下列公式计算出该颗粒的休止角(θ)。
[0145]
tanθ＝2h/l
[0146]
不同成型处方制得颗粒的流动性考察结果，见表12。
[0147]
5.6吸湿性考察
[0148]
在干燥至恒重的扁称量瓶底部放入厚约2mm的颗粒，精密称重后，将其置于温度25℃
±
1℃、湿度80％
±
2％条件下的恒温恒湿箱中，打开扁称量瓶盖，放置24小时，取出，迅速精密称重，再按下列公式计算引湿百分率，结果见表12。
[0149]
吸湿率(％)＝(吸湿后颗粒重量－吸湿前颗粒重量)/吸湿前颗粒重量
×
100％
[0150]
表12成型性、流动性、吸湿性考察结果
[0151][0152]
由表10、11和12的实验结果可知，采用1号、2号、3号成型处方所制得的颗粒均符合《中国药典》现行版制剂通则“颗粒剂”项下的要求。
[0153]
结合中试研究结果综合考虑，对健脾安胎颗粒采用流化床喷雾制粒，赋形剂糊精的用量约为0.7～0.8倍浸膏固形物量，并添加颗粒总量0.25％的三氯蔗糖作为矫味剂。
[0154]
6.经中试研究确定的健脾安胎颗粒制备工艺
[0155]
实验室研究筛选出的工艺，经中试放大研究及样品试制，结果表明：本工艺适合实际生产。
[0156]
6.1处方
[0157]
[0158][0159]
6.2制法
[0160]
(1)提取：取苎麻根、黄芩、酒白芍、枸杞子、桑寄生、白术、菟丝子、墨旱莲、党参、生地黄(炭)、熟地黄(炭)、紫苏梗、甘草(炒)、黄芪(炒)、续断至圆底烧瓶，饮片加水10倍量，煎煮30-60分钟，滤过，药渣再加柠檬籽水6-8倍量，煎煮30-60分钟，滤过，合并滤液；
[0161]
(2)纯化浓缩：药液浓缩至60℃～70℃下相对密度为1.05-1.10，静置，取上清液；
[0162]
(3)阿胶珠处理：将阿胶珠粉碎过40目筛，加5倍量黄酒浸泡12小时，隔水加热使之溶化，趁热用100目筛过滤，取清膏，加入步骤(2)的上清液，浓缩至60℃～70℃下相对密度为1.20～1.25；
[0163]
(4)制粒：加入赋形剂糊精的用量约为0.7～0.8倍浸膏固形物量，并添加颗粒总量0.25％的三氯蔗糖作为矫味剂，采用流化床喷雾制粒，干燥，制成1000g，即得。
[0164]
根据原临床方剂使用量(167g饮片/日)及提取出膏率的范围，确定本品的制剂规格为1g颗粒相当于2.09g饮片。
[0165]
二、健脾安胎颗粒的质量验证
[0166]
针对健脾安胎颗粒的质量控制方法研究，对本发明制备健脾安胎颗粒进行阿胶珠、酒白芍、黄芩、续断等各位药材的鉴别及含量测定。
[0167]
1.鉴别
[0168]
根据处方组成，对各药味的已知主要指标成分进行筛选，初步确定了以阿胶珠、酒白芍、黄芩、续断作为薄层鉴别指标。
[0169]
1.1阿胶珠的薄层鉴别研究
[0170]
供试品溶液的制备取本品粉末8g，置100ml厌氧瓶中，加6mol/l盐酸30ml，搅拌均匀，密封，105℃加热6小时，取出，放冷，加水30ml搅拌均匀，滤过，并用水30ml荡洗残渣并入滤液，滤液中加氢氧化钠饱和溶液中和至ph为5～6，浓缩至5～10ml，加于732强酸苯乙烯阳离子交换树脂柱(柱长16cm，内径1.5cm，预处理为h型)，用水100ml洗脱，弃去洗脱液，再加3％氢氧化钠7ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加30％乙醇1ml使溶解。
[0171]
对照品溶液的制备取甘氨酸对照品，加30％乙醇制成每1ml含1mg的溶液。
[0172]
谱条件吸取供试品溶液20μl、对照品溶液1μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以苯酚-4％硼砂(4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％茚三酮乙醇溶液，加热至斑点显清晰。
[0173]
专属性试验取缺阿胶珠的阴性样品8g，同“供试品溶液的制备”项下方法制成缺阿胶珠阴性供试品溶液，展开后在与甘氨酸对照品谱对应的位置上无相应的斑点，说明缺阿胶珠的阴性样品对实验无干扰(见图1)，其中1、2-不同洗脱量的阴性样品，3、4-不同洗脱量的样品，点样量均为20μl，5-甘氨酸，6-l-羟脯氨酸，7-丙氨酸，8-脯氨酸，点样量均为1μl，展开剂：苯酚-4％硼砂(4∶1)显剂：1％茚三酮乙醇溶液。
[0174]
1.2酒白芍的薄层鉴别研究
[0175]
供试品溶液的制备取本品粉末5g，加乙醇2ml、乙酸乙酯20ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，加于中性氧化铝柱(3g，内径1.5cm)，用乙醇30ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解。
[0176]
对照品溶液的制备取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液。
[0177]
谱条件吸取供试品溶液及对照品溶液各10μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显清晰。
[0178]
专属性试验取缺酒白芍的阴性样品5g，同“供试品溶液的制备”项下方法制成缺酒白芍阴性供试品溶液，展开后在与芍药苷对照品谱对应的位置上无相应的斑点，说明缺酒白芍的阴性样品对实验无干扰(见图2)，其中：1、2-不同提取方法的阴性样品，3、4-不同提取方法的样品5-芍药苷，点样量均为10μl，展开剂：-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)显剂：5％香草醛硫酸溶液。
[0179]
1.3续断的薄层鉴别研究
[0180]
供试品溶液的制备取本品粉末5g，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用水饱和正丁醇50ml提取，取正丁醇液先用氨试液30ml洗涤，再用水30ml洗涤，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解。
[0181]
对照品溶液的制备取川续断皂苷vi对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液。
[0182]
谱条件吸取供试品溶液及对照品溶液各2、5μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以二氯甲烷-甲醇-水(14∶7∶2)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显清晰。
[0183]
专属性试验取缺续断的阴性样品5g，同“供试品溶液的制备”项下方法制成缺续断阴性供试品溶液，展开后在与川续断皂苷vi对照品谱对应的位置上无相应的斑点，说明缺续断的阴性样品对实验无干扰(见图3)。其中：1、2-阴性样品，3、4-样品，点样量分别为2、5、2、5μl，5-川续断皂苷vi，点样量为10μl，展开剂：二氯甲烷-甲醇-水(14∶7∶2)的下层溶液显剂：10％硫酸乙醇溶液。
[0184]
1.4黄芩的薄层鉴别研究
[0185]
供试品溶液的制备取本品粉末5g，加乙酸乙酯-甲醇(3∶1)30ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解。
[0186]
对照品溶液的制备取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液。
[0187]
谱条件吸取供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以乙酸乙酯-丙酮-二甲基甲酰胺-冰醋酸酸-水(5∶2∶0.2∶0.3∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁乙醇溶液。
[0188]
专属性试验取缺黄芩的阴性样品5g，同“供试品溶液的制备”项下方法制成缺黄芩
阴性供试品溶液，展开后在与黄芩苷对照品谱对应的位置上无相应斑点，说明缺黄芩的阴性样品对实验无干扰(见图4)。其中：1-阴性样品，点样量为8μl，2、3、4-样品，点样量分别为2、5、8μl，5、6-黄芩苷，点样量为5、8μl，展开剂：乙酸乙酯-丙酮-二甲基甲酰胺-冰醋酸酸-水(5∶2∶0.2∶0.3∶1)，显剂：2％三氯化铁乙醇溶液。
[0189]
2.含量测定
[0190]
根据处方组成，以黄芪甲苷作为主要指标成分进行含量测定。黄芪甲苷的含量测定方法如下：
[0191]
谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(30∶70)为流动相，蒸发光散射检测器检测。理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于4000。
[0192]
对照品溶液的制备取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加80％甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，即得。
[0193]
供试品溶液的制备精密量取工艺研究用样品20ml，置圆底烧瓶中，精密加入氨水2ml，水28ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用溶剂补足减失的重量，摇匀，精密量取25ml，蒸干，残渣加水15ml使溶解，用水饱和的正丁醇溶液振摇萃取3次，每次25ml，合并正丁醇液蒸干，残渣用80％甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加80％甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0194]
测定法分别精密吸取对照品溶液2μl、5μl和供试品溶液20μl，注入液相谱仪，测定，以外标两点法对数方式计算，即得(图5-8)。
[0195]
三、健脾安胎颗粒的临床研究
[0196]
鉴于复发性流产的病因和病理机制尚未明确，对于本病的仍属临床难题。健脾安胎颗粒是将何氏安胎饮改良为颗粒剂型而来。在保障药效的基础上，健脾安胎颗粒易于保存、便于携带，更符合当今患者的需求。目前该制剂已运用数十年，在保胎患者中的使用覆盖率约95％，受益体近50万人次。前期临床研究表明“健脾安胎颗粒”胎动不安的保胎有效率为94.67％，远高于黄体酮针剂，且无不良安全事件发生。
技术特征：
1.一种健脾安胎颗粒的制备工艺，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取：苎麻根、黄芩、酒白芍、枸杞子、桑寄生、白术、菟丝子、墨旱莲、党参、生地黄(炭)、熟地黄(炭)、紫苏梗、甘草(炒)、黄芪(炒)、续断，十五味药加水煎煮两次，药液滤过，得到滤液；(2)纯化浓缩：药液浓缩至相对密度1.05-1.10，静置，取上清液；(3)阿胶珠处理：阿胶珠粉碎，加适量黄酒，浸泡过夜，隔水加热溶化，趁热过滤，取清膏，加入步骤(2)的上清液，浓缩至相对密度1.20～1.25；(4)制粒：加入赋形剂和矫味剂适量，制粒，干燥，即得。2.根据权利要求1所述的制备工艺，其特征在于，所述步骤(1)为：取苎麻根、黄芩、酒白芍、枸杞子、桑寄生、白术、菟丝子、墨旱莲、党参、生地黄(炭)、熟地黄(炭)、紫苏梗、甘草(炒)、黄芪(炒)、续断至圆底烧瓶，饮片加水6-10倍量，煎煮30-60分钟，滤过，药渣再加柠檬籽水6-8倍量，煎煮30-60分钟，滤过，合并滤液。3.根据权利要求1所述的制备工艺，其特征在于，所述步骤(3)为：将阿胶珠粉碎过40目筛，加5倍量黄酒浸泡12小时，隔水加热使之溶化，趁热用100目筛过滤，取清膏，加入步骤(2)的上清液，浓缩至相对密度1.20～1.25。4.根据权利要求1所述的制备工艺，其特征在于，所述步骤(4)为：采用流化床喷雾制粒，赋形剂的用量约为0.7～0.8倍浸膏固形物量，并添加颗粒总量0.25％的矫味剂。5.根据权利要求1所述的制备工艺，其特征在于，所述步骤(2)、(3)中浓缩相对密度是在60℃～70℃下测量。6.根据权利要求1-5任意一项所述的制备工艺，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取：取苎麻根、黄芩、酒白芍、枸杞子、桑寄生、白术、菟丝子、墨旱莲、党参、生地黄(炭)、熟地黄(炭)、紫苏梗、甘草(炒)、黄芪(炒)、续断至圆底烧瓶，饮片加水6-10倍量，煎煮30-60分钟，滤过，药渣再加柠檬籽水6-8倍量，煎煮30-60分钟，滤过，合并滤液；(2)纯化浓缩：药液浓缩至60℃～70℃下相对密度为1.05-1.10，静置，取上清液；(3)阿胶珠处理：将阿胶珠粉碎过40目筛，加5倍量黄酒浸泡12小时，隔水加热使之溶化，趁热用100目筛过滤，取清膏，加入步骤(2)的上清液，浓缩至60℃～70℃下相对密度为1.20～1.25；(4)制粒：加入赋形剂糊精的用量约为0.7～0.8倍浸膏固形物量，并添加颗粒总量0.25％的三氯蔗糖作为矫味剂，采用流化床喷雾制粒，干燥，即得。7.根据权利要求2所述的制备工艺，其特征在于，所述步骤(1)中柠檬籽水为：取饮片总重1/5-1/10倍的柠檬籽，加柠檬籽20倍量的水浸泡18-24小时，过滤。8.根据权利要求2或7所述的制备工艺，其特征在于，所述柠檬籽水的ph＝5.0-6.0。9.根据权利要求1所述的制备工艺，其特征在于，所述各味药材以重量比计算为：苎麻根150-200份、黄芩90-130份、酒白芍100-150份、枸杞子100-150份、桑寄生150-200份、白术90-130份、菟丝子100-150份、墨旱莲100-150份、党参150-200份、生地黄(炭)100-150份、熟地黄(炭)100-150份、紫苏梗50-100份、甘草(炒)30-75份、黄芪(炒)160-210份、续断110-140份、阿胶珠85-140份。10.根据权利要求9所述的制备工艺，其特征在于，所述各味药材以重量比计算为：苎麻根187.5份、黄芩112.5份、酒白芍125份、枸杞子125份、桑寄生187.5份、白术112.5份、菟丝
子125份、墨旱莲125份、党参187.5份、生地黄(炭)125份、熟地黄(炭)125份、紫苏梗75份、甘草(炒)50份、黄芪(炒)187.5份、续断125份、阿胶珠112.5份。
技术总结
本发明属于药物制剂制备技术领域，具体涉及一种健脾安胎颗粒的制备工艺，包括以下步骤：(1)提取：十五味药加水煎煮两次，药液滤过，得到滤液；(2)纯化浓缩：药液浓缩至相对密度1.05-1.10，静置，取上清液；(3)阿胶珠处理加入：阿胶珠粉碎，加适量黄酒，浸泡过夜，隔水加热溶化，趁热过滤，取清膏，加入步骤(2)的上清液，浓缩至相对密度1.20～1.25；(4)制粒：加入赋形剂和矫味剂适量，制粒，干燥，即得。本发明对健脾安胎颗粒制备工艺进行严格控制，提升了健脾安胎颗粒的质量品质。健脾安胎颗粒的质量品质。健脾安胎颗粒的质量品质。
