谷氨酰胺酶GLS1抑制剂及其制备方法与应用与流程
谷氨酰胺酶gls1抑制剂及其制备方法与应用
技术领域
1.本发明是关于一种谷氨酰胺酶gls1抑制剂及其可药用的盐、异构体、制备方法及用途。
背景技术：
2.肿瘤细胞为了满足快速生长和增殖的需求，通常会重新编程能量代谢。肿瘤细胞中代谢途径的改变以及如何利用这些改变获得益处已成为药物研发的焦点之一。谷氨酰胺是癌细胞必不可少的营养素，它通过谷氨酰胺水解酶(gls)水解为谷氨酸和氨，为癌细胞的增殖供能。在许多癌症中普遍观察到“谷氨酰胺成瘾”的现象。谷氨酰胺酶(gls)是谷氨酰胺代谢中催化谷氨酰胺转化为谷氨酸的第一个关键酶，已成为开发抗癌药物的潜在靶标。哺乳动物细胞含有2个编码谷氨酰胺酶的基因：肾脏型谷氨酰胺酶(gls1)和肝脏型谷氨酰胺酶(lga，gls2)。其中，肾脏型谷氨酰胺酶广泛分布在整个肝外组织中，而肝脏型谷氨酰胺酶主要存在于成年肝脏中。研究表明，gls1的活性与肿瘤的生长成正比，高度依赖谷氨酰胺的肿瘤明显易受gls1抑制。
3.作为一种有效的新型癌症方法，gls1抑制剂的发现引起了广泛的关注。图1显示了几种代表性gls1抑制剂的结构。其中，活性位点抑制剂6-重氮基5-氧代-l-正亮氨酸(don，i-1)显示出良好的体内抗癌活性，但毒性很高，这可能是由于缺乏对其他氨基酸转运蛋白和转谷氨酰胺酶的选择性所致。通过筛选活化rho gtpases转化能力的小分子抑制剂，化合物968(二苯并菲啶，i-2)被鉴定为gls抑制剂，但它对gls1和gls2均有抑制活性，可能会存在严重肝脏毒性。近来，相关研究集中在发现选择性的变构gls1抑制剂上。在报道的选择性小分子gls1抑制剂中，双-2-(5-苯基乙酰胺基-1,2,4-噻二唑-2-基)乙基硫醚(bptes，i-3)及其类似物cb-839(i-4)是两种公认的变构抑制剂。罗宾逊(robinson)报告的化合物i-3是第一种特异性gls1变构抑制剂，ic50为3.3μm。但是，由于类药性质较差，对i-3的研究已在临床前阶段终止。化合物i-4目前处于ii期临床试验。然而，其理化和pk特性仍存在一定缺陷，溶解度差，可能会限制体内裸鼠异种移植肿瘤模型(例如200mg，每天两次)和临床应用(po 600
–
800mg，每天两次)的抗肿瘤作用。
4.因此，特异性高、pk性质好的gls1抑制剂仍是十分急需的。
技术实现要素：
5.本发明的一个目的在于提供一种新的化合物，以作为gls1抑制剂，具有良好的活性和代谢性质。
6.本发明的另一目的在于提供所述化合物的制备方法。
7.本发明的另一目的在于提供所述化合物的应用。
8.一方面，本发明提供了一种式i的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，
[0009][0010]
其中：
[0011]
a是苯环或者吡啶环；
[0012]
b是含n个杂原子的5-6元芳杂环，n选自1-3的整数，杂原子选自o、n、s中的一种或多种(当含有多个杂原子时，多个杂原子可相同或不同)；
[0013]
c是含p个杂原子的8-12元稠芳环，p选自1-7的整数，杂原子选自o、n、s中的一种或多种；
[0014]
l1选择自
[0015]
l2选择自选择自其中x选自ch或n，y、z各自独立地选自键、ch2、nh或o，m、h各自独立地选自0-3的整数，k选自1-3的整数；
[0016]
r1和r2各自独立地选自氢、氰基、卤素、氰基、c
1-5
烷氧基、c
3-5
环烷基氧基或c
1-5
烷基，所述c
1-5
烷氧基、c
3-5
环烷基氧基、c
1-5
烷基可任意地被1-3个卤素所取代；
[0017]
r3和r4各自独立地选自缺失、氢、卤素、氰基、胺基、c
1-5
烷基或c
3-5
环烷基，所述c
1-5
烷基、c
3-5
环烷基可任意地被1-3个卤素所取代，所述胺基可任意地被1-2个c
1-5
烷基所取代；
[0018]
l3选自键、其中q选自1-4的整数；
[0019]
r6选自氢或c
1-5
烷基；
[0020]
r7和r8各自独立地选自氢、胺基、c
1-5
烷氧基或c
1-5
烷基，所述胺基可任意地被1-2个c
1-5
烷基所取代；
[0021]
当x是ch时，y、z不全选自键和ch2；
[0022]
l2不选自k选自1-3的整数。
[0023]
本发明的一些方案中，提供了具有式ⅱ所示结构的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，
[0024][0025]
其中：
[0026]
b选自其中b1选自s或o，b2、b3、b4、b5各自独立地选自ch或n，且b4、b5不同时为ch；
[0027]
c选自其中c5选自o、nh或s，c1、c2、c3、c4、c6、c7各自独立地选自ch或n；
[0028]
l2选择自选择自其中x选自ch或n，y、z各自独立地选自键、ch2或nh，m、h选自0-3的整数，k选自1-3的整数；
[0029]
r1和r2各自独立地选自氢、氰基、卤素、c
1-5
烷氧基、c
3-5
环烷基氧基或c
1-5
烷基，所述c
1-5
烷氧基、c
3-5
环烷基氧基、c
1-5
烷基可任意地被1-3个卤素所取代；
[0030]
r3和r4各自独立地选自缺失、氢、卤素、氰基、胺基、c
1-5
烷基或c
3-5
环烷基，所述c
1-5
烷基、c
3-5
环烷基可任意地被1-3个卤素所取代，所述胺基可任意地被1-2个c
1-5
烷基所取代；
[0031]
l3选自键、
[0032]
r6选自氢或c
1-5
烷基；
[0033]
r7和r8各自独立地选自氢、胺基、c
1-5
烷氧基或c
1-5
烷基，所述胺基可任意地被1或2个c
1-5
烷基所取代；
[0034]
当x是ch时，y、z不同时选自键和/或ch2；
[0035]
l2不选自k选自1-3的整数。
[0036]
本发明的一些方案中，上述化合物中的b选自
[0037]
本发明的一些方案中，上述化合物中的c选自本发明的一些方案中，上述化合物中的c选自
[0038]
本发明的一些方案中，上述化合物中的l3选自键、ch2、
[0039]
本发明的一些方案中，上述化合物中的l2选自选自
[0040]
本发明的一些方案中，上述化合物中的r1和r2各自独立地选自氢、氰基、f、cl、cf3、
[0041]
本发明的一些方案中，上述化合物中的r3和r4各自独立地选自缺失、氢、f、ch3、cf3、氰基、
[0042]
本发明的一些方案中所述的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，其中所述化合物包含但不限于式iii至式ix任一所示结构：
[0043][0044]
其中，
[0045]
c选自
[0046]
r1和r2各自独立地选自氢、氰基、f、cl、cf3、
[0047]
r3和r4各自独立地选自缺失、氢、f、ch3、cf3、氰基、
[0048]
l3选自键、ch2、
[0049]
r6选自氢或ch3。
[0050]
本发明的一些方案中所述的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，其中所述化合物包含但不限于式x所示结构：
[0051][0052]
本发明还提供了下式所示化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，其中，所述化合物选自：
[0053]
[0054]
[0055]
[0056][0057]
本发明还提供了所述的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐作为谷氨酰胺酶gls1抑制剂的应用。本发明的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐作为谷氨酰胺酶
gls1抑制剂具体应用时，可以是非目的的(如体外实验研究目的等)，也可以是目的的。
[0058]
本发明还提供了上述化合物、其异构体或其药学上可接受的盐在制备用于gls1介导的疾病的药物中的应用。本发明的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐在作为药物活性成分用于gls1介导的疾病时，包括向有需要的受试者给予所述化合物、异构体或其盐的步骤。
[0059]
本发明提供的所述应用中，其中所述gls1介导的疾病包括癌症、免疫性障碍和/或神经性障碍。
[0060]
本发明的一些方案中，所述gls1介导的疾病包括癌症。
[0061]
本发明的一些方案中，其中所述癌症包括实体瘤结直肠癌、肾癌、乳腺癌、三阴乳腺癌、肺癌、黑素瘤、卵巢癌、胰腺导管腺癌、前列腺癌、血液瘤白血病、淋巴癌或多发性骨髓瘤。
[0062]
根据本发明的一些方案，本发明提供的所述应用中，本发明所述的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐单独和/或与其他药物制剂合用，其中，所述其他药物包括放疗、化疗药物、免疫检查点抑制剂等中的一种或多种。更具体地，所述其他药物可包括化疗药物(如紫杉醇、卡培他滨、伊利替康、阿扎胞苷)、mtor/pi3k/akt通路抑制剂(如依维莫司)、parp抑制剂(如尼拉帕尼、卢卡帕利)、cdk4/6抑制剂(如帕博西尼)、蛋白酶体抑制剂(如泊马度胺)、pd-1/pd-l1单抗(如纳武单抗、阿特丽珠单抗、度伐利尤单抗)等中的一种或多种。
[0063]
另一方面，本发明还提供了所述的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐的制备方法，该方法包括但不限于：按照制备实施例1-制备实施例64中任一合成路线制备得到式i的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐。其中，所制备得到的化合物的各取代基并不限于制备实施例1-制备实施例64中具体化合物的范围，各取代基的定义可参照前述式i的化合物的各取代基的定义范围。
[0064]
另一方面，本发明还提供了一种中间体及其制备方法。所述的中间体包括但不限于：上述制备所述的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐的合成路线中的任一中间体。优选地，所述中间体具有与式i的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐相同的基本结构单元(基本相同的基本核心部分或者基本的环)，或者中间体的基本结构单元包含在了式i的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐的化学结构中。
[0065]
定义和说明
[0066]
除非另有说明，本文所用的下列术语和短语旨在具有下列含义。一个特定的术语或短语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照普通的含义去理解。当本文中出现商品名时，意在指代其对应的商品或其活性成分。
[0067]
术语“药学上可接受的”是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用千与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。
[0068]
术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的盐，由本发明发现的具有特定取代基的化合物与相对无毒的酸或碱制备。当本发明的化合物中含有相对酸性的功能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的碱与这类化合物的中性形式接触的方式获得碱加成盐。药学上可接受的碱加成盐包括钠、钾、钙、铵、有机氨或镁盐或类似的盐。
当本发明的化合物中含有相对碱性的官能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的酸与这类化合物的中性形式接触的方式获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐的实例包括无机酸盐，所述无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸，碳酸氢根，磷酸、磷酸－氢根、磷酸二氢根、硫酸、硫酸氢根、氢碘酸、亚磷酸等；以及有机酸盐，所述有机酸包括如乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸和甲磺酸等类似的酸；还包括氨基酸(如精氨酸等)的盐，以及如葡萄糖醛酸等有机酸的盐。本发明的某些特定的化合物含有碱性和酸性的官能团，从而可以被转换成任一碱或酸加成盐。
[0069]
本发明的药学上可接受的盐可由含有酸根或碱基的母体化合物通过常规化学方法合成。一般情况下，这样的盐的制备方法是：在水或有机溶剂或两者的混合物中，经由游离酸或碱形式的这些化合物与化学计量的适当的碱或酸反应来制备。
[0070]
术语“异构体”是指本发明的化合物可以存在特定的几何或立体异构体形式。本发明设想所有的这类化合物，包括顺式和反式异构体、(-)-和(+)-对对映体、(r)-和(s)-对映体、非对映异构体、(d)-异构体、(l)-异构体，及其外消旋混合物和其他混合物，例如对映异构体或非对映体富集的混合物，所有这些混合物都属于本发明的范围之内。烷基等取代基中可存在另外的不对称碳原子。所有这些异构体以及它们的混合物，均包括在本发明的范围之内。
[0071]
除非另有说明，术语“对映异构体”或者“旋光异构体”是指互为镜像关系的立体异构体。
[0072]
除非另有说明，术语“顺反异构体”或者“几何异构体”系由因双键或者成环碳原子单键不能自由旋转而引起。
[0073]
除非另有说明，术语“非对映异构体”是指分子具有两个或多个手性中心，并且分子间为非镜像的关系的立体异构体。
[0074]
除非另有说明，“(d)”或者“(+)”表示右旋，“(l)”或者“(-)”表示左旋，“(dl)”或者“(士)”表示外消旋。
[0075]
除非另有说明，用楔形实线键和楔形虚线键表示一个立体中心的绝对构型，用直形实线键和直形虚线键表示立体中心的相对构型，用波浪线表示楔形实线键或楔形虚线键或用波浪线表示直形实线键和直形虚线键
[0076]“任选”或“任选地”指的是随后描述的事件或状况可能但不是必需出现的，并且该描述包括其中所述事件或状况发生的情况以及所述事件或状况不发生的情况。
[0077]
术语“被取代的”是指特定原子上的任意一个或多个氢原子被取代基取代，可以包括重氢和氢的变体，只要特定原子的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。当取代基为氧(即＝0)时，意味着两个氢原子被取代。氧取代不会发生在芳香基上。术语“任选被取代的”是指可以被取代，也可以不被取代，除非另有规定，取代基的种类和数目在化学上可以实现的基础上可以是任意的。
[0078]
当任何变量(例如r)在化合物的组成或结构中出现一次以上时，其在每一种情况下的定义都是独立的。因此，例如，如果一个基团被0-2个r所取代，则所述基团可以任选地
至多被两个r所取代，并且每种情况下的r都有独立的选项。此外，取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
[0079]
当其中一个变量选自键时，表示其连接的两个基团直接相连，比如a-l-z中l代表键时表示该结构实际上是a-z。
[0080]
当其中一个变量选自缺失时，表示其不存在，比如c-r3中r3选自缺失时表示该结构实际上是c。
[0081]
当所列举的取代基中没有指明其通过哪一个原子连接到被取代的基团上时，这种取代基可以通过其任何原子相键合，例如，苯基作为取代基可以通过苯环上任意一个碳原子连接到被取代的基团上。
[0082]
除非另有规定，数字范围表示包含范围两端数字在内的所有整数。除非另有规定，0-3的整数表示0、1、2、3；1-3的整数表示1、2、3；1-4的整数表示1、2、3、4；1-2个表示1个、2个；1-3个表示1、2、3个；5-6元表示5元、6元；8-12元表示8、9、10、11、12元，以此类推。
[0083]
除非另有规定，术语“烷基”用于表示直链或支链的饱和烃基，可以是单取代(如－ch2f)或多取代的(如-cf3)，可以是一价(如甲基)、二价(如亚甲基)或者多价(如次甲基)。烷基的例子包括甲基(me)，乙基(et)，丙基(如，n-丙基和异丙基)，丁基(如，n-丁基，异丁基，s-丁基，t-丁基)，戊基(如，n-戊基，异戊基，新戊基)等。
[0084]
除非另有规定，环烷基包括任何稳定的环状或多环烃基，任何碳原子都是饱和的，可以是单取代或多取代的，可以是一价、二价或者多价。这些环烷基的实例包括，但不限于，环丙基、降冰片烷基、[2.2.2]二环辛烷、[4.4.0]二环癸烷等。
[0085]
除非另有规定，术语“卤素”本身或作为另一取代基的一部分表示氟(f)、氯(cl)、溴(br)或碘(i)原子。
[0086]
除非另有规定，术语“烷氧基”表示烷基基团通过氧原子与分子其余部分相连，其中烷基基团具有如本发明所述的含义。除非另有规定，c
1-5
烷氧基包括c1、c2、c3、c4和c5的烷氧基。烷氧基的例子包括但不限于：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基和s-戊氧基。所述烷氧基基团可以任选地被一个或多个本发明描述的取代基所取代。
[0087]
除非另有规定，术语“环烷基氧基”表示通过氧桥连接的具有特定数目碳原子的上述环烷基，除非另有规定，c
3-5
环烷基氧基包括c3、c4和c5的环烷基氧基。环烷基氧基的例子包括但不限于：环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基。
[0088]
除非另有规定，术语“胺基”是指是-nh2、-nh(烷基)或者-n(烷基)(烷基)。
[0089]
除非另有规定，术语“芳环”表示多不饱和的芳香族烷烃单环，可以是单取代或多取代的。
[0090]
除非另有规定，术语“芳杂环”表示含有一至四个杂原子的芳环，杂原子选自n、o和s。
[0091]
除非另有规定，术语“稠芳环”表示含有两个以上芳香性的稠环。
[0092]
像本发明所描述的，取代基画一个键连接到中心的环上形成的环体系(如
所示)代表取代基在该环体系上所有可取代的位置择一取代。
[0093]
本发明中，当所列举的基团为二价(例如b、l1、l2)且没有指明二个连接键连接至化合物的具体位置时，这种二价基团的两个连接键在化合物中的连接位置可以互换，例如，l2选自可以是胺基的n与环a连接，也可以是吡咯环上的n与环a连接。
[0094]
本发明化合物具有良好的glsi酶抑制活性，有显著的抑制谷氨酸代谢作用和抑瘤作用，在与细胞增殖相关的疾病中具有潜在应用价值。此外，本发明化合物具有良好的溶解性和渗透性，体内代谢稳定性好，体内暴露量高且生物利用度高，是潜在的成药化合物。
附图说明
[0095]
图1为几种代表性gls1抑制剂的结构示意图。
具体实施方式
[0096]
下面通过实施例对本发明进行详细描述，但并不意味着对本发明任何不利限制。本文已经详细地描述了本发明，其中也公开了其具体实施例方式，对本领域的技术人员而言，在不脱离本发明精神和范围的情况下针对本发明具体实施方式进行各种变化和改进将是显而易见的。
[0097]
实施例中，未注明具体条件的实验方法为所属领域熟知的常规方法和常规条件，或按照仪器制造商所建议的条件操作。
[0098]
各实施例主要涉及的化合物编号参见表1。
[0099]
表1
[0100]
[0101]
[0102]
[0103]
[0104]
[0105]
[0106]
[0107]
[0108]
[0109][0110]
制备实施例1
[0111][0112]
步骤1.合成6-氯-4-((三甲基硅基)乙炔基)哒嗪-3-胺(1b)
[0113][0114]
分别称取化合物1a(3.0g，14.39mmol)，三甲基乙炔基硅(1.56g，15.83mmol)，三乙胺(3.64g,71.96mmol),碘化亚铜(548mg，2.88mmol)，pd(pph3)2cl2(2.02g，2.88mmol)加入到甲苯(200ml)中，氮气保护下25℃搅拌过夜。反应结束后加水淬灭(50ml)，然后乙酸乙酯(50ml
×
3)萃取,加入无水硫酸钠干燥后浓缩,残余物经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1:1)纯化得到化合物1b，收率。esi-ms：m/z＝226[m+h]
+
[0115]
步骤2.合成6-氯-4-(2,2-二甲氧基乙基)哒嗪-3-胺(1c)
[0116][0117]
称取化合物1b(1.1g，4.87mmol)溶于(40ml)的甲醇溶液中，然后加入碳酸钾(108mg，0.78mmol)，在60℃下搅拌回流3h。冷却至室温后过滤后并将滤液浓缩得化合物1c。esi-ms:m/z＝218[m+h]
+
[0118]
步骤3.合成3-氯-7h-吡咯并[2,3-c]哒嗪(1d)
[0119][0120]
称取化合物1c(1.06g，4.87mmol)溶于20ml的乙醇溶液中，然后向其中滴加7ml浓度为1n的稀盐酸，60℃搅拌2小时。冷却至室温后，滤液过滤后浓缩后经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝1:1)纯化得化合物1d。esi-ms:m/z＝154[m+h]
+
[0121]
步骤4.合成(r)-3-((5-氨基-1,3,4-噻二唑-2-基)氨基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(2b)
[0122][0123]
称取化合物2a(2.13g,11.43mmol)溶于50ml乙腈中，然后加入2-氨基-5-溴-1,3,4-噻二唑(2.05g，11.38mmol),三乙胺(2.5g，24.75mmol),90℃下加热回流反应6h后冷却至室温。加水淬灭反应，加入30ml乙酸乙酯析出固体，继续搅拌0.5h后过滤得到灰白粉末，置于在室温下烘干，得到化合物2b，产率74％。esi-ms:m/z＝286[m+h]
+
[0124]
步骤5.合成叔丁基(r)-3-((5-((r)-2-甲氧基-2-苯基乙酰胺)-1,3,4-噻二唑-2-基)氨基)吡咯烷-1-羧酸盐(2c)
[0125][0126]
称取化合物(r)-(-)-α-甲氧基(166mg,1mmol)溶于2ml dmf中,将整个体系置于0℃下，然后依次加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(edci)(229mg,1.2mmol)、1-羟基苯并三唑(hobt)(162mg,1.2mmol)、n,n-二异丙基乙胺(dipea)(387mg,3mmol)，搅拌5min后，加入化合物2b(285mg，1mmol)后置于室温下反应过夜。反应完毕后加入10ml水进行淬灭，然后加入乙酸乙酯(ea)(20ml
×
3)萃取，得到的有机相加入无水硫酸钠干燥后经柱层析柱纯化(dcm/ch3oh)＝30:1得到化合物2c，产率81.5％。esi-ms:m/z＝434[m+h]
+
[0127]
步骤6.合成(r)-2-甲氧基-2-苯基-n-(5-(((r)-吡咯烷-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)乙酰胺(2d)
[0128]
[0129]
称取化合物2c(150mg，0.346mmol)溶于3ml二氯甲烷中,然后加入3ml的三氟乙酸(tfa)，在室温下搅拌2h后将反应液浓缩，加入二氯甲烷减压蒸馏除去未反应的tfa，得到化合物2d，产率98％。esi-ms:m/z＝334[m+h]
+
[0130]
步骤7.合成(r)-n-(5-((r)-1-(7h吡咯[2,3-c]吡啶-3-基)吡咯-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-2-甲氧基-2-苯基乙酰胺
[0131][0132]
称取化合物2d(183.7mg，0.66mmol)溶于二甲基亚砜(dmso)中，然后向其中加入dipea(193.5mg 1.5mmol)、1d(76mg，0.5mmol)，室温下搅拌6h。反应完毕后加入10ml水淬灭反应，然后加入乙酸乙酯(ea)(30ml
×
3)萃取，得到的有机相加入无水硫酸钠干燥后经柱层析柱纯化(dcm/ch3oh)＝30:1得到化合物compound 1，产率77％。esi-ms:m/z＝451[m+h]
+
[0133]
制备实施例2
[0134][0135]
步骤1.合成叔丁基(r)-3-((6-氨基吡啶嗪-3-基)氨基)吡咯烷-1-羧酸盐(3b)
[0136][0137]
称取化合物3a(221mg，1mmol)置于15ml体积的闷罐中，加入3.5ml1，4-二氧六环，然后加入化合物2a(280mg，1.5mmol)，将整个体系置于160℃下反应8h。反应结束后，反应液冷却至室温后，加入20ml水淬灭反应，然后加入乙酸乙酯(ea)(10ml
×
3)萃取得到的有机相加入无水硫酸钠干燥后经柱层析柱纯化(dcm/ch3oh)＝10:1得到化合物3b，产率65％。esi-ms:m/z＝280[m+h]+
[0138]
步骤2.合成(r)-3-((6-((r)-2-甲氧基-2-苯基乙酰胺)哒嗪-3-基)氨基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(3c)
[0139]
[0140]
称取化合物(r)-(-)-α-甲氧基(166mg,1mmol)溶于2mldmf中,将整个体系置于0℃下，然后依次加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(edci)(229mg,1.2mmol)、1-羟基苯并三唑(hobt)(162mg,1.2mmol)、n,n-二异丙基乙胺(dipea)(387mg,3mmol)，搅拌5min后，加入化合物3b(279mg，1mmol)后置于室温下反应过夜。反应完毕后加入10ml水进行淬灭，然后加入乙酸乙酯(ea)(20
×
3)萃取，得到的有机相加入无水硫酸钠干燥后经柱层析柱纯化(dcm/ch3oh)＝30:1得到中间体化合物3c，产率75％。esi-ms:m/z＝428[m+h]
+
[0141]
步骤3.合成(r)-2-甲氧基-2-苯基-n-(6-(((r)-吡咯烷-3-基)氨基)哒嗪-3-基)乙酰胺
[0142][0143]
称取化合物3c(120mg，0.281mmol)溶于3ml二氯甲烷中,然后加入3ml的三氟乙酸(tfa)，在室温下搅拌2h后将反应液浓缩，加入二氯甲烷减压蒸馏除去未反应的tfa，得到化合物3d，产率105％。esi-ms:m/z＝328[m+h]
+
[0144]
步骤4.合成(r)-n-(6-(((r)-1-(7h-吡咯并[2,3-c]哒嗪-3-基)吡咯烷-3-基)氨基)哒嗪-3-基)-2-甲氧基-2-苯乙酰胺
[0145][0146]
称取化合物3d(80mg，0.24mmol)溶于二甲基亚砜(dmso)中，然后向其中加入dipea(93.0mg 0.72mmol)、1d(37mg，0.24mmol)，室温下搅拌6h。反应完毕后加入10ml水淬灭反应，然后加入乙酸乙酯(ea)(30
×
3)萃取，得到的有机相加入无水硫酸钠干燥后经柱层析柱纯化(dcm/ch3oh)＝30:1得到化合物3e，产率79％。esi-ms:m/z＝445[m+h]
+
[0147]
步骤5.合成(r)-2-甲氧基-n-(6-(((r)-1-(7-甲基-7h-吡咯并[2,3-c]哒嗪-3-基)吡咯烷-3-基)氨基)哒嗪-3-基)-2-苯乙酰胺
[0148][0149]
在0℃下，向化合物3e(50mg 0.9mmol)的四氢呋喃(thf)的溶液中缓慢添加氢化钠(40mg,1mmol)且，然后将混合物搅拌30分钟。滴加(142mg，1mmol)后继续将混合物搅拌2小时。混合物用水淬灭且用ea(20ml
×
2)萃取。合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。粗残余物通过硅胶谱(dcm:ch3oh＝25:1)纯化，得到compound 3，产率为48％，esi-ms:m/z＝458[m+h]
+
[0150]
制备实施例3
[0151][0152]
称取化合物2d(80mg，0.24mmol)溶于dmso中，然后向其中加入dipea(93.0mg0.72mmol)、6-氟-7h-吡咯并[2,3-c]哒嗪(41mg，0.24mmol)，室温下搅拌6h。反应完毕后加入10ml水淬灭反应，然后加入ea(30
×
3)萃取，得到的有机相加入无水硫酸钠干燥后经柱层析柱纯化(dcm/ch3oh)＝30:1得到compound 2，产率66％。esi-ms:m/z＝468[m+h]
+
[0153]
制备实施例4
[0154][0155]
步骤1.合成(r)-3-((6-((r)-2-乙氧基-2-苯基乙酰胺)哒嗪-3-基)氨基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(4c)
[0156][0157]
称取化合物(r)-(-)-α-乙氧基(180mg,1mmol)溶于2ml dmf中,将整个体系置于0℃下，然后依次加入edci(229mg,1.2mmol)、hobt(162mg,1.2mmol)、dipea(387mg,3mmol)，搅拌5min后，加入化合物3b(279mg，1mmol)后置于室温下反应过夜。反应完毕后加入10ml水进行淬灭，然后加入ea(20
×
3)萃取，得到的有机相加入无水硫酸钠干燥后经柱层析柱纯化(dcm/ch3oh)＝30:1得到化合物4c，产率67％。esi-ms:m/z＝442[m+h]+
[0158]
步骤2.合成(r)2-乙氧基-2-苯基-n-(6-(((r)-吡咯烷-3-基)氨基)哒嗪-3-基)乙酰胺(4d)
[0159][0160]
称取化合物4c(120mg，0.271mmol)溶于3ml二氯甲烷中,然后加入3ml的三氟乙酸
(三氟甲氧基)苯基)乙酰胺(5d)
[0170][0171]
称取化合物5c(110mg，0.215mmol)溶于3ml二氯甲烷中,然后加入3ml的三氟乙酸(tfa)，在室温下搅拌2h后将反应液浓缩，加入二氯甲烷减压蒸馏除去未反应的tfa，得到化合物5d，产率97％。esi-ms:m/z＝412[m+h]
+
[0172]
步骤3.合成(r)-n-(6-((r)-1-(7h吡咯[2,3-c]吡啶-3-基)吡咯-3-基)氨基)吡啶-3-基)-2-甲氧基-2-(3-(三氟甲氧基)苯基)乙酰胺(5e)
[0173][0174]
称取化合物5d(93mg，0.23mmol)溶于二甲基亚砜(dmso)中，然后向其中加入dipea(89mg 0.69mmol)、1d(37mg，0.24mmol)，室温下搅拌6h。反应完毕后加入10ml水淬灭反应，然后加入ea(30ml
×
3)萃取，得到的有机相加入无水硫酸钠干燥后经柱层析柱纯化(dcm/ch3oh)＝30:1得到化合物5e，产率59％。esi-ms:m/z＝529[m+h]
+
[0175]
步骤4.合成(r)-2-甲氧基-n-(6-(((r)-1-(7-甲基-7h-吡咯并[2,3-c]哒嗪-3-基)吡咯烷-3-基)氨基)哒嗪-3-基)-2-(3-(三氟甲氧基)苯基)乙酰胺
[0176][0177]
在0℃下，向化合物5e(53mg 0.1mmol)的四氢呋喃(thf)的溶液中缓慢添加氢化钠(40mg,1mmol)且，然后将混合物搅拌30分钟。滴加(142mg，1mmol)后继续将混合物搅拌2小时。混合物用水淬灭且用ea(20ml
×
2)萃取。合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。粗残余物通过硅胶谱(dcm:ch3oh＝25:1)纯化，得到compound 6，产率为52％，esi-ms:m/z＝543[m+h]
+
[0178]
制备实施例6
[0179]
合成(r)-n-(6-(((r)-1-(6-氰基-7h-吡咯并[2,3-c]哒嗪-3-基)吡咯烷-3-基)氨基)哒嗪-3-基)-2-甲氧基-2-(3-(三氟甲氧基)苯基)乙酰胺
[0180][0181]
称取化合物5d(93mg，0.23mmol)溶于dmso中，然后向其中加入dipea(89mg 0.69mmol)、3-氯-7h-吡咯并[2,3-c]哒嗪-6-碳腈(36mg，0.21mmol)，室温下搅拌6h。反应完
毕后加入10ml水淬灭反应，然后加入ea(30ml
×
3)萃取，得到的有机相加入无水硫酸钠干燥后经柱层析柱纯化(dcm/ch3oh)＝30:1得到化合物compound 7，产率71％。esi-ms:m/z＝529[m+h]
+
[0182]
制备实施例7
[0183]
合成(r)-n-(5-((1-(噻唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-2-(4-(三氟甲氧基)苯基)乙酰胺
[0184][0185]
合成方法参照例1步骤5，将4-三氟甲氧基替换成(r)-(-)-α-甲氧基和化合物2b反应，然后参照例1步骤6与三氟乙酸反应后与2-氯噻唑[4,5-b]吡啶反应得到化合物compound 16，产率为66％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ12.31(s,1h),8.31(dd,j＝4.8,1.6hz,1h),8.19(dd,j＝7.8,1.7hz,1h),7.80(d,j＝5.7hz,1h),7.47
–
7.42(m,2h),7.34(d,j＝8.3hz,2h),7.03(dd,j＝7.8,4.9hz,1h),3.86(s,1h),3.80(s,2h),3.68(s,2h),2.40(dt,j＝14.2,7.3hz,1h).esi-ms:m/z＝522[m+h]
+
[0186]
制备实施例8
[0187]
合成(r)-2-(4-氟苯基)-n-(5-((1-(噻唑基[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)乙酰胺
[0188][0189]
合成方法参照例1步骤5，将4-氟甲基替换成(r)-(-)-α-甲氧基和化合物2b反应，然后参照例1步骤6与三氟乙酸反应后与2-氯噻唑[4,5-b]吡啶反应得到化合物compound 15，产率为67％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ12.30(s,1h),8.31(dd,j＝4.9,1.7hz,1h),8.20(dd,j＝7.8,1.7hz,1h),7.85(d,j＝5.7hz,1h),7.40
–
7.32(m,2h),7.23
–
7.14(m,2h),7.04(dd,j＝7.8,4.9hz,1h),4.44(q,j＝4.9hz,1h),2.43
–
2.35(m,1h),2.17(m,j＝11.7,5.1hz,1h)。esi-ms:m/z＝456[m+h]
+
[0190]
制备实施例9
[0191]
合成(r)n-(5-(((r)-1-(苯并噻唑-2-基)吡咯烷-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-2-甲氧基-2-苯乙酰胺
[0192][0193]
合成方法参照例1步骤7，将2-氯苯并噻唑代替1d制备compound 9，收率87％。1hnmr(400mhz,methanol-d4)δ7.65(d,j＝7.9hz,1h),7.47(dd,j＝8.0,3.8hz,4h),7.38(d,j＝7.8hz,3h),7.29(t,j＝7.7hz,1h),7.07(t,j＝7.6hz,1h),4.53
–
4.46(m,1h),3.91(dd,
j＝10.8,5.6hz,1h),3.83
–
3.56(m,4h),3.42(d,j＝1.7hz,3h),2.45(dd,j＝16.9,9.3hz,1h),2.21(d,j＝13.7hz,1h).esi-ms:m/z＝467[m+h]
+
[0194]
制备实施例10
[0195]
合成(r)-2-甲氧基-2-苯基-n-(5-(((r)-1-(噻唑基[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)乙酰胺
[0196][0197]
合成方法参照例1步骤7，将2-氯噻唑[4,5-d]吡啶代替1d制备compound 10，收率84％。1h nmr(400mhz,chloroform-d)δ8.30(s,1h),7.75(d,j＝7.7hz,1h),7.45
–
7.30(m,5h),6.90(dd,j＝7.7,5.0hz,1h),4.85(d,j＝5.5hz,1h),4.57(s,1h),3.43(d,j＝2.3hz,5h),2.30(s,2h).esi-ms:m/z＝468[m+h]
+
[0198]
制备实施例11
[0199]
合成(r)-n-(6-(((r)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)吡咯烷-3-基)氨基)哒嗪-3-基)-2-甲氧基-2-苯基乙酰胺
[0200][0201]
合成方法参照例1步骤7，将2-氯苯并[d]噻唑代替1d，然后和化合物3d反应制备compound 11，收率82％。esi-ms:m/z＝462[m+h]
+
[0202]
制备实施例12
[0203]
合成(r)n-(5-(((r)-1-(6-(二甲氨基)噻唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-2-甲氧基-2-苯乙酰胺
[0204][0205]
合成方法参照例1步骤7，将2-氯-n，n-二甲基噻唑并[4,5-b]吡啶-6-胺代替1d，然后和化合物3d反应制备compound 52，收率74％。esi-ms:m/z＝511[m+h]
+
[0206]
制备实施例13
[0207]
合成(r)-2-甲氧基-2-苯基-n-(5-(((r)-1-(6-(三氟甲基)噻唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)乙酰胺
[0208]
[0209]
合成方法参照例1步骤7，将2-氯-6-(三氟甲基)噻唑[4,5-b]吡啶代替1d，然后和化合物3d反应制备compound 13，收率67％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ12.34(s,1h),8.66(q,j＝2.2hz,2h),7.92(s,1h),7.57
–
7.25(m,5h),5.03(s,1h),4.46(s,1h),3.61(d,j＝10.3hz,2h),3.39(s,3h),2.49
–
2.29(m,1h),2.19(s,1h).esi-ms:m/z＝536[m+h]
+
[0210]
制备实施例14
[0211][0212]
合成方法参照例1步骤5，用4-三氟甲基替换(r)-(-)-α-甲氧基和2b反应，然后参照例1步骤6与三氟乙酸反应后与2-氯噻唑[4,5-b]吡啶反应得到化合物compound 14，产率为72％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ12.36(s,1h),8.31(dd,j＝4.9,1.7hz,1h),8.20(dd,j＝7.7,1.7hz,1h),7.79(d,j＝5.8hz,1h),7.73(d,j＝8.0hz,2h),7.56(d,j＝8.0hz,2h),7.04(dd,j＝7.7,4.9hz,1h),4.50
–
4.38(m,1h),3.89(s,2h),2.44
–
2.33(m,1h),2.17(m,j＝15.3,8.2hz,1h).esi-ms:m/z＝506[m+h]
+
[0213]
制备实施例15
[0214]
合成(r)-n-(5-((1-(噻唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-4-(三氟甲基)苯甲酰胺
[0215][0216]
合成方法参照例1步骤5，将4-三氟甲基苯甲酸替换成(r)-(-)-α-甲氧基和化合物2b反应，然后参照例1步骤6与三氟乙酸反应后与2-氯噻唑[4,5-b]吡啶反应得到化合物compound 20，产率为73％。1h nmr(400 mhz,dmso-d6)δ12.90(s,0h),8.32(dd,j＝4.9,1.6 hz,1h),8.27(d,j＝8.1 hz,2h),8.20(dd,j＝7.7,1.6 hz,1h),7.92(t,j＝6.8 hz,3h),7.04(dd,j＝7.8,4.9 hz,1h),4.59
–
4.39(m,1h),3.90(s,1h),3.70(s,3h),2.48
–
2.31(m,1h),2.26
–
2.12(m,1h).esi-ms:m/z＝492[m+h]
+
[0217]
制备实施例16
[0218]
合成(s)-2-甲氧基-2-苯基-n-(5-(((r)-1-(噻唑基[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)乙酰胺
[0219][0220]
合成方法参照例1步骤5，用(s)-2-甲氧基-2-替换(r)-(-)-α-甲氧基和化合物2b反应，然后参照例1步骤6与三氟乙酸反应后与2-氯噻唑[4,5-b]吡啶反应得到化合物compound 17，产率为65％。1h nmr(400 mhz,chloroform-d)δ8.25(dd,j＝5.0,1.6 hz,1h),7.78
–
7.67(m,1h),7.39(dd,j＝7.5,1.8 hz,2h),7.31(m,j＝10.3,7.5,3.4 hz,3h),6.85(dd,j＝7.7,4.9 hz,1h),4.84(d,j＝3.4 hz,1h),3.68(d,j＝101.1 hz,3h),3.38(s,3h),2.90(s,1h),2.82(s,1h),2.32
–
2.21(m,2h).esi-ms:m/z＝468[m+h]
+
[0221]
制备实施例17
[0222]
合成(s)-2-甲氧基-2-苯基-n-(5-(((s)-1-(噻唑基[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)乙酰胺
[0223][0224]
合成方法参照例1步骤4和步骤5，用(r)-3-氨基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯替换2a,(s)-2-甲氧基-2-替换(r)-(-)-α-甲氧基，然后参照例1步骤6与三氟乙酸反应后与2-氯噻唑[4,5-b]吡啶反应得到化合物compound 18，产率为71％。esi-ms:m/z＝468[m+h]
+
[0225]
制备实施例18
[0226]
合成(r)-2-甲氧基-2-苯基-n-(6-(((r)-1-(噻唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)氨基)哒嗪-3-基)乙酰胺
[0227][0228]
合成方法参照例1步骤7，将2-氯噻唑[4,5-d]吡啶代替1d，然后和化合物3d反应制备compound 12，收率79％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ10.56(s,1h),8.31(dd,j＝4.9,1.7hz,1h),8.19(dd,j＝7.7,1.7hz,1h),7.89(d,j＝9.5hz,1h),7.56
–
7.49(m,2h),7.46
–
7.33(m,3h),7.24(d,j＝6.0hz,1h),7.03(dd,j＝7.7,4.9hz,1h),6.92(d,j＝9.5hz,1h),5.01(s,1h),4.64(m,j＝5.2hz,1h),3.93(s,1h),3.82
–
3.45(m,3h),3.37(s,3h),2.42(m,j＝13.0,6.7hz,1h),2.14(m,j＝11.5,6.2hz,1h).esi-ms:m/z＝462[m+h]
+
[0229]
制备实施例19
[0230]
合成(s)-2-苯基-n-(5-(((r)-1-(噻唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)丙胺
[0231][0232]
合成方法参照例1步骤5，将(s)-2-苯基丙酸替换成(r)-(-)-α-甲氧基和化合物2b反应，然后参照例1步骤6与三氟乙酸反应后与2-氯噻唑[4,5-b]吡啶反应得到化合物compound 19，产率为69％。esi-ms:m/z＝452[m+h]
+
[0233]
制备实施例20
[0234]
合成(r)-4-氟-n-(5-((1-(噻唑基[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)苯甲酰胺
[0235][0236]
合成方法参照例1步骤5，将4-氟苯甲酸替换成(r)-(-)-α-甲氧基和化合物2b反应，然后参照例1步骤6与三氟乙酸反应后与2-氯噻唑[4,5-b]吡啶反应得到化合物compound21，产率为66％。esi-ms:m/z＝442[m+h]
+
[0237]
制备实施例21
[0238]
合成(r)-2-甲氧基-2-苯基-n-(5-((1-(噻唑基[4,5-b]吡啶-2-基)-4-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)乙酰胺
[0239][0240]
步骤1.合成中间体4-((5-氨基-1,3,4-噻二唑-2-基)氨基)-1-羧酸叔丁酯(6b)
[0241][0242]
称取化合物4-氨基-1-羧酸叔丁酯(730mg，3.65mmol)溶于50ml乙腈中，然后加入2-氨基-5-溴-1,3,4-噻二唑(630mg，3.51mmol),碳酸铯(1.3g，3.98mmol),在90℃下加热回流反应4h后冷却至室温。加水淬灭反应，加入少量的稀柠檬酸溶液洗去未反应的胺原料。加入ea(30ml
×
3)萃取，将得到的有机相加入无水硫酸钠干燥后经柱层析分离纯化(dcm:ch3oh＝40:1)得到化合物6b，产率85％。esi-ms:m/z＝300[m+h]
+
。
[0243]
步骤2.合成叔丁基(r)-4-((5-(2-甲氧基-2-苯基乙酰胺)-1,3,4-噻二唑-2-基)氨基)-1-羧酸酯(6c)
[0244][0245]
称取化合物(r)-(-)-α-甲氧基(166mg,1mmol)溶于2ml dmf中,将整个体系置于0℃下，然后依次加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(edci)(229mg,1.2mmol)、1-羟基苯并三唑(hobt)(162mg,1.2mmol)、n,n-二异丙基乙胺(dipea)(387mg,3mmol)，搅拌5min后，加入化合物6b(300mg，1mmol)后置于室温下反应过夜。反应完毕后加入10ml水进行淬灭，然后加入ea(20ml
×
3)萃取，得到的有机相加入无水硫酸钠干燥后经柱层析柱纯化(dcm/ch3oh)＝30:1得到化合物6c，产率78％。esi-ms:m/z＝448[m+h]
+
[0246]
步骤3.合成(r)-2-甲氧基-2-苯基-n-(5-(-4-基氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)乙酰胺(6d)
[0247][0248]
称取化合物6c(140mg，0.313mmol)溶于3ml二氯甲烷中,然后加入3ml的三氟乙酸(tfa)，在室温下搅拌2h后将反应液浓缩，加入二氯甲烷减压蒸馏除去未反应的tfa，得到化合物6d，产率99％。esi-ms:m/z＝348[m+h]
+
[0249]
步骤4.合成(r)-2-甲氧基-2-苯基-n-(5-((1-(噻唑基[4,5-b]吡啶-2-基)-4-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)乙酰胺
[0250][0251]
称取化合物6d(70mg，0.20mmol)溶于dmso中，然后向其中加入dipea(77.0mg0.60mmol)、2-氯噻唑[4,5-b]吡啶(35mg，0.24mmol)，室温下搅拌6h。反应完毕后加入10ml水淬灭反应，然后加入ea(30ml
×
3)萃取，得到的有机相加入无水硫酸钠干燥后经柱层析柱纯化(dcm/ch3oh)＝30:1得到compound 22，产率68％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.36(dd,j＝4.9,1.6hz,1h),8.25(dd,j＝7.7,1.7hz,1h),7.42(s,2h),7.30(t,j＝7.6hz,2h),7.16(d,j＝7.0hz,1h),7.10(dd,j＝7.8,4.9hz,1h),4.86(s,1h),4.19(d,j＝61.0hz,2h),3.26(s,3h),2.92(s,1h),2.76(s,1h),2.57(s,1h),2.14(s,2h),1.75(d,j＝12.3hz,2h).
[0252]
esi-ms:m/z＝482[m+h]
+
[0253]
制备实施例22
[0254][0255]
步骤1.合成叔丁基(r)-3-(噻唑[4,5-b]吡啶-5-氨基)吡咯烷-1-羧酸盐(7b)
[0256][0257]
称取化合物7a(372mg，2mmol)溶于4ml dmso中，然后加入化合物2-氯噻唑[4,5-b]吡啶(342mg，2mmol)，dipea(780mg，6mmol)于室温下搅拌过夜。加入10ml水淬灭反应后搅拌5min,混合液中加入ea(30ml
×
3)萃取，得到的有机相加入无水硫酸钠干燥后经柱层析柱纯化(dcm/ch3oh)＝50:1得到中间体7b，产率77％。esi-ms:m/z＝321[m+h]
+
[0258]
步骤2.合成(r)n-(吡咯烷-3-基)噻唑并[4,5-b]吡啶-5-胺(7c)
[0259][0260]
称取化合物7b(150mg，0.47mmol)溶于4ml二氯甲烷中,然后加入4ml的三氟乙酸，在室温下搅拌2h后将反应液浓缩，加入二氯甲烷减压蒸馏除去未反应的tfa，得到化合物7c，产率99％。esi-ms:m/z＝221[m+h]
+
[0261]
步骤3.合成(r)-n-(1-(5-氨基-1,3,4-噻二唑-2-基)吡咯烷-3-基)噻唑[4,5-b]吡啶-5-胺(7d)
[0262][0263]
称取化合物7c(102mg，0.46mmol)溶于2ml正丁醇中，然后加入2-氨基-5-溴-1,3,4-噻二唑(93mg，0.5mmol),dipea(193mg，1.5mmol)，50℃下加热反应6h后冷却至室温。加水淬灭反应，混合液中加入ea(30ml
×
3)萃取，得到的有机相加入无水硫酸钠干燥后经柱层析柱纯化(dcm/ch3oh)＝25:1得到中间体7d，产率58％。esi-ms:m/z＝320[m+h]
+
[0264]
步骤4.合成(r)-2-甲氧基-2-苯基-n-(5-((r)-3-(噻唑并[4,5-b]吡啶-2-基氨基)吡咯烷-1-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)乙酰胺
[0265]
[0266]
称取化合物(r)-(-)-α-甲氧基(21mg,0.125mmol)溶于2ml dmf中，将整个体系置于0℃下，然后依次加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(edci)(30mg，0.125mmol)、1-羟基苯并三唑(hobt)(21mg，0.125mmol)、n,n-二异丙基乙胺(dipea)(36mg，0.125mmol)，搅拌5min后，加入化合物7d(40mg，0.5mmol)后置于室温下反应过夜。反应完毕后加入5ml水进行淬灭，然后加入乙酸乙酯(ea)(10ml
×
3)萃取，得到的有机相加入无水硫酸钠干燥后经柱层析柱纯化(dcm/ch3oh)＝30:1得到化合物compound 23，产率84％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.80(d,j＝6.2hz,1h),8.29(dd,j＝4.9,1.7hz,1h),8.12(dd,j＝7.7,1.7hz,1h),7.51
–
7.48(m,2h),7.44
–
7.37(m,3h),7.04(dd,j＝7.7,4.9hz,1h),5.01(s,1h),4.62(s,1h),3.80(dd,j＝10.5,5.7hz,1h),3.62
–
3.46(m,5h),3.34(s,3h)。esi-ms:m/z＝468[m+h]
+
[0267]
制备实施例23
[0268]
合成(r)-2-甲氧基-2-苯基-n-(5-((s)-3-(噻唑并[4,5-b]吡啶-2-基氨基)吡咯烷-1-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)乙酰胺
[0269][0270]
合成步骤参考制备实施例22，将(s)-3-氨基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯代替7a合成化合物compound 24，收率54％，esi-ms:m/z＝468[m+h]
+
[0271]
制备实施例24
[0272]
合成(r)-2-甲氧基-2-苯基-n-(5-((s)-3-(噻唑并[4,5-b]吡啶-2-基氨基)吡咯烷-1-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)乙酰胺
[0273][0274]
合成步骤参考制备实施例23，用6-碘哒嗪-3-胺代替5-溴-1,3,4-噻二唑-2-胺，合成化合物compound 25，收率48％，esi-ms:m/z＝462[m+h]
+
[0275]
制备实施例25
[0276]
合成(r)-2-(3-(二氟甲氧基)苯基)-n-(5-((1-(噻唑基[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)乙酰胺
[0277][0278]
合成方法参照例1步骤5，将2-(3-(二氟甲氧基)苯基)乙酸替换成(r)-(-)-α-甲氧
基和化合物2b反应，然后参照例1步骤6与三氟乙酸反应后与2-氯噻唑[4,5-b]吡啶反应得到化合物compound 27，产率为63％。esi-ms:m/z＝504[m+h]
+
[0279]
制备实施例26
[0280]
合成(r)-n-(5-((1-(噻唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-2-(4-(三氟甲氧基)苯基)乙酰胺
[0281][0282]
合成方法参照例1步骤5，将4-三氟甲氧基替换成(r)-(-)-α-甲氧基和化合物2b反应，然后参照例1步骤6与三氟乙酸反应后与2-氯噻唑[4,5-b]吡啶反应得到化合物compound 28，产率为68％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ12.31(s,1h),8.31(dd,j＝4.8,1.6hz,1h),8.19(dd,j＝7.8,1.7hz,1h),7.80(d,j＝5.7hz,1h),7.47
–
7.42(m,2h),7.34(d,j＝8.3hz,2h),7.03(dd,j＝7.8,4.9hz,1h),3.86(s,1h),3.80(s,2h),3.68(s,2h),2.40(dt,j＝14.2,7.3hz,1h)。esi-ms:m/z＝522[m+h]
+
[0283]
制备实施例27
[0284]
合成(r)-2-(4-氰基苯基)-n-(5-((1-(噻唑基[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)乙酰胺
[0285][0286]
合成方法参照例1步骤5，将2-(3-氰基苯基)乙酸替换成(r)-(-)-α-甲氧基和化合物2b反应，然后参照例1步骤6与三氟乙酸反应后与2-氯噻唑[4,5-b]吡啶反应得到化合物compound 47，产率为67％。esi-ms:m/z＝463[m+h]
+
[0287]
制备实施例28
[0288]
合成(r)-2-甲氧基-2-苯基-n-(5-(((r)-1-(噻唑基[4,5-c]吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)乙酰胺
[0289][0290]
合成方法参照例1步骤7，将2-氯噻唑并[4,5-c]吡啶代替1d，然后和化合物3d反应制备compound53，收率76％。esi-ms:m/z＝468[m+h]
+
[0291]
制备实施例29
[0292]
合成(r)2-(二甲氨基)-2-苯基-n-(5-(((r)-1-(噻唑基[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯
烷-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)乙酰胺
[0293][0294]
步骤1.合成中间体(r)-2-(二甲氨基)-2-
[0295][0296]
称取d-苯基甘氨酸(200mg，1.32mmol)溶于2ml甲醇中，然后依次加入10％的钯碳(40mg，0.37mmol)、37％甲醛水溶液(0.66ml，0.814mmol)和0.6ml的1n hcl，将混合溶液脱气后置于35-40psi氢气下室温搅拌4h。反应液通过硅藻土过滤后在真空中减压浓缩，得到白固体化合物中间体，收率为97％，esi-ms:m/z＝180[m+h]
+
，不用进一步纯化即可使用。
[0297]
步骤2.合成(r)2-(二甲氨基)-2-苯基-n-(5-(((r)-1-(噻唑基[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)乙酰胺
[0298][0299]
合成方法参照例1步骤5，将上一步合成的中间体(r)-2-(二甲氨基)-2-代替(r)-(-)-α-甲氧基和化合物2b反应，然后参照例1步骤6与三氟乙酸反应后与2-氯噻唑[4,5-b]吡啶反应得到化合物compound 35，产率为71％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.32(dt,j＝4.8,2.0hz,1h),8.19(dt,j＝7.8,2.3hz,1h),7.82(d,j＝5.8hz,1h),7.52
–
7.46(m,2h),7.37(m,j＝15.7,9.4,4.4hz,3h),7.04(m,j＝7.7,4.9,2.2hz,1h),4.44(q,j＝4.8hz,1h),4.14(s,1h),3.87(s,1h),3.68(s,3h),2.45
–
2.32(m,1h),2.19(s,7h)。esi-ms:m/z＝481[m+h]
+
。
[0300]
制备实施例30
[0301]
合成(s)2-(二甲氨基)-2-苯基-n-(5-(((r)-1-(噻唑基[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)乙酰胺
[0302][0303]
合成步骤参考例29步骤1，将(s)-2-氨基-2-代替d-苯基甘氨酸，所有的步骤均和上述一致，得到白固态的中间体(s)-2-氨基-2-。接下来将得到的中间体参考例1步骤5，将其代替(r)-(-)-α-甲氧基和化合物2b反应，然后参照例1步骤6与三氟乙酸反应后与2-氯噻唑[4,5-b]吡啶反应得到化合物compound 36，产率为65％。1h nmr
(400mhz,dmso-d6)δ8.31(dt,j＝4.1,2.0hz,1h),8.19(dt,j＝7.8,2.2hz,1h),7.80(dd,j＝5.9,2.0hz,1h),7.52
–
7.45(m,2h),7.42
–
7.31(m,3h),7.03(m,j＝7.2,4.9,2.1hz,1h),4.48
–
4.39(m,1h),4.09(s,1h),3.86(s,1h),2.42
–
2.32(m,1h),2.16(d,j＝2.0hz,7h)。esi-ms:m/z＝481[m+h]
+
[0304]
制备实施例31
[0305]
合成(r)-1-苯基-n-(5-((1-(噻唑基[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)环丙烷-1-甲酰胺
[0306][0307]
合成方法参照例1步骤5，将1-(3-(三氟甲氧基)苯基)环丙烷-1-羧酸代替(r)-(-)-α-甲氧基和化合物2b反应，然后参照例1步骤6与三氟乙酸反应后与2-氯噻唑[4,5-b]吡啶反应得到化合物compound 49，产率为71％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.24(s,1h),8.31(dd,j＝4.9,1.7hz,1h),8.19(dd,j＝7.8,1.7hz,1h),7.75(d,j＝5.9hz,1h),7.42
–
7.30(m,5h),7.04(dd,j＝7.8,4.9hz,1h),4.47
–
4.37(m,1h),3.86(s,1h),2.47
–
2.29(m,1h),2.15(td,j＝9.5,7.1,4.0hz,1h),1.53(q,j＝4.2hz,2h),1.19(q,j＝4.4hz,2h)。esi-ms:m/z＝464[m+h]
+
[0308]
制备实施例32
[0309]
合成(r)-n-(5-((1-(噻唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-2-(3-(三氟甲氧基)苯基)乙酰胺
[0310][0311]
合成方法参照例1步骤5，将2-(3-(三氟甲氧基)苯基)乙酸代替(r)-(-)-α-甲氧基和化合物2b反应，然后参照例1步骤6与三氟乙酸反应后与2-氯噻唑[4,5-b]吡啶反应得到化合物compound 33，产率为77％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ12.31(s,1h),8.31(dd,j＝4.9,1.7hz,1h),8.21(dd,j＝7.7,1.7hz,1h),7.79(d,j＝5.8hz,1h),7.49(t,j＝8.0hz,1h),7.40
–
7.32(m,2h),7.29(dd,j＝8.0,2.2hz,1h),7.05(dd,j＝7.7,4.9hz,1h),4.44(m,j＝4.8hz,1h),3.87(s,1h),3.84(s,2h),3.74
–
3.57(m,3h),2.40(m,j＝11.0,8.2,4.1hz,1h),2.16(dd,j＝11.8,6.0hz,1h)。esi-ms:m/z＝522[m+h]
+
[0312]
制备实施例33
[0313]
合成(r)-2-(3,5-二氟苯基)-n-(5-((1-(噻唑基[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)乙酰胺
[0314][0315]
合成方法参照例1步骤5，将2-(3,5-二氟苯基)乙酸代替(r)-(-)-α-甲氧基和化合物2b反应，然后参照例1步骤6与三氟乙酸反应后与2-氯噻唑[4,5-b]吡啶反应得到化合物compound 34，产率为80％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ12.31(s,1h),8.33(dd,j＝4.9,1.7hz,1h),8.22(dd,j＝7.7,1.7hz,1h),7.81(d,j＝5.8hz,1h),7.18(m,j＝9.5,2.4hz,1h),7.07(td,j＝7.7,3.5hz,3h),4.46(q,j＝4.8hz,1h),3.84(s,2h),3.76
–
3.59(m,3h),2.42(m,j＝11.7,8.5,4.3hz,1h),2.18(dd,j＝11.9,5.9hz,1h)。esi-ms:m/z＝522[m+h]
+
[0316]
制备实施例34
[0317]
合成(r)-n-(5-((1-(噻唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-2-(2-(三氟甲氧基)苯基)乙酰胺
[0318][0319]
合成方法参照例1步骤5，将2-(2-(三氟甲氧基)苯基)乙酸代替(r)-(-)-α-甲氧基和化合物2b反应，然后参照例1步骤6与三氟乙酸反应后与2-氯噻唑[4,5-b]吡啶反应得到化合物compound 38，产率为67％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ12.34(s,1h),8.38
–
8.23(m,2h),7.81(d,j＝5.8hz,1h),7.50(dd,j＝7.4,1.9hz,1h),7.48
–
7.42(m,1h),7.42
–
7.35(m,2h),7.10(dd,j＝7.7,5.1hz,1h),4.46(q,j＝4.7hz,1h),3.90(s,3h),3.71(s,3h),2.48
–
2.31(m,1h),2.19(dt,j＝12.4,6.3hz,1h)。esi-ms:m/z＝522[m+h]
+
[0320]
制备实施例35
[0321]
合成(r)n-(5-(((r)-1-([1,2,5]噻二唑并[3,4-b]吡啶-5-基)吡咯烷-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-2-甲氧基-2-苯乙酰胺
[0322][0323]
步骤1.合成(r)-n-(5-((r)-1-(6-氨基-5-硝基吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-2-甲氧基-2-苯基乙酰胺
[0324][0325]
称取化合物2d(333mg，1mmol)溶于3ml乙腈中，随后加入6-氯-3-硝基吡啶-2-胺(200mg,1.1mmol),碳酸铯(420mg,1.5mmol)。将整个体系置于90℃下反应回流6h。反应完毕后混合溶液冷却至室温后加入5ml水进行淬灭，然后加入乙酸乙酯(ea)(20ml
×
3)萃取，得到的有机相加入无水硫酸钠干燥后经柱层析柱纯化(dcm/ch3oh)＝35:1得到微黄中间体化合物，产率78％。esi-ms:m/z＝471[m+h]
+
[0326]
步骤2.合成(r)-n-(5-(((r)-1-(5,6-二氨基吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-2-甲氧基-2-苯乙酰胺
[0327][0328]
称取上一步得到的中间体产物(r)-n-(5-((r)-1-(6-氨基-5-硝基吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-2-甲氧基-2-苯基乙酰胺(80mg,0.17mmol)溶于5ml甲醇中，然后加入10％的钯碳(10mg，0.1mmol)、，将混合溶液脱气后置于氢气下室温搅拌3h。反应结束后，将反应液过滤后浓缩，得到墨绿的化合物中间体，无需进行下一步纯化。产率95％。esi-ms:m/z＝441[m+h]
+
[0329]
步骤3.合成(r)n-(5-(((r)-1-([1,2,5]噻二唑并[3,4-b]吡啶-5-基)吡咯烷-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-2-甲氧基-2-苯乙酰胺
[0330][0331]
称取苯胺(50mg，0.53mmol)溶于1ml干燥甲苯后将混合溶液置于0℃下，随后滴加0.5ml的氯化亚砜，滴加完毕后加入上述得到的中间体(r)-n-(5-(((r)-1-(5,6-二氨基吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-2-甲氧基-2-苯乙酰(50mg，0.11mmol)，之后待反应体系恢复室温后加热至回流，反应时间16h。反应完毕后，待反应冷却至室温，滴加饱和碳酸氢钠淬灭反应，随后加入乙酸乙酯(ea)(10ml
×
3)萃取，得到的有机相加入无水硫酸钠干燥后经柱层析柱纯化(dcm/ch3oh)＝25:1得到compound 30，收率31％。esi-ms:m/z＝469[m+h]
+
[0332]
制备实施例36
[0333]
合成(r)-n-(5-(((r)-1-(苯并[c][1,2,5]噻二唑-5-基)吡咯烷-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-2-甲氧基-2-苯乙酰胺
[0334]
[0335]
合成步骤参考实施例35，将5-氯-2-硝基苯胺代替6-氯-3-硝基吡啶-2-胺制备compound31，收率35％。esi-ms:m/z＝468[m+h]
+
[0336]
制备实施例37
[0337]
合成(r)-2-(3-(3,3-二氟环丁氧基)苯基)-n-(5-((1-(噻唑基[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)乙酰胺
[0338][0339]
合成方法参照例1步骤5，将2-(3-(3,3-二氟环丁氧基)苯基)乙酸代替(r)-(-)-α-甲氧基和化合物2b反应，然后参照例1步骤6与三氟乙酸反应后与2-氯噻唑[4,5-b]吡啶反应得到化合物compound 41，产率为66％。esi-ms:m/z＝544[m+h]
+
[0340]
制备实施例38
[0341]
合成(r)-n-(5-((1-(噻唑并[4,5-b]吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-2-(3-(三氟甲氧基)苯基)乙酰胺
[0342][0343]
步骤1.合成中间体噻唑[4,5-b]吡嗪-2(3h)-硫酮
[0344][0345]
称取3-氯吡嗪-2-胺(510mg，3.97mmol)溶解于1-甲基-2-吡咯烷酮(7ml)中，然后加入乙基黄原酸钾(953.9mg，5.95mmol)后将溶液加热到150℃过夜。然后将溶液冷却至室温，加入冰醋酸(1ml)并加入150ml水进行稀释，有灰白固体析出，继续搅拌0.5h。过滤所得沉淀物并用1:1水/乙醇溶液冲洗，滤饼放置在空气中自然风干。收率90％，esi-ms:m/z＝170[m+h]
+
[0346]
步骤2.合成中间体2-氯噻唑[4,5-b]吡嗪
[0347][0348]
称取上述得到中间体噻唑[4,5-b]吡嗪-2(3h)-硫酮(340mg，2mmol)溶于3ml干燥的二氯甲烷中，超声5min后，加入氯化亚砜(2ml，2.05mmol)后置于室温下搅拌过夜。反应混
合物在低温下加水淬灭后用乙酸乙酯萃取，得到的有机层配制1n naoh，饱和食盐水洗涤后加入na2so4干燥。浓缩得到该中间体化合物，收率为40％。
[0349]
步骤3.合成(r)-n-(5-((1-(噻唑并[4,5-b]吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-2-(3-(三氟甲氧基)苯基)乙酰胺
[0350][0351]
合成方法参照例32，将2-(3-(三氟甲氧基)苯基)乙酸和化合物2b反应，然后参照例1步骤6与三氟乙酸反应后与上述得到的中间体2-氯噻唑[4,5-b]吡嗪反应得到化合物compound 54，产率为74％。1h nmr(400mhz,chloroform-d)δ8.30(d,j＝2.9hz,1h),8.12(d,j＝2.8hz,1h),7.47(t,j＝7.9hz,1h),7.37(d,j＝7.8hz,1h),7.31(s,1h),7.24(d,j＝8.6hz,1h),4.60(d,j＝17.5hz,3h),4.20
–
3.92(m,4h),3.92
–
3.83(m,4h),3.71
–
3.51(m,0h),2.52(d,j＝7.6hz,0h),2.31(t,j＝7.4hz,0h。esi-ms:m/z＝523[m+h]
+
[0352]
制备实施例39
[0353]
合成(r)-n-(5-((1-(6-氟噻唑[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-2-(3-(三氟甲基氧基)苯基)乙酰胺
[0354][0355]
合成方法参照例38，以3-氯-5-氟吡啶-2-胺代替3-氯吡嗪-2-胺合成中间体化合物2-氯-6-氟噻唑[4,5-b]吡啶。参考例38中的合成方法，使用2-氯-6-氟噻唑[4,5-b]吡啶代替2-氯噻唑[4,5-b]吡嗪，制备合成compound 55，收率为64％。1h nmr(400mhz,methanol-d4)δ8.22(t,j＝2.2hz,1h),8.01(dd,j＝8.0,2.9hz,1h),7.51
–
7.42(m,1h),7.36(d,j＝7.8hz,1h),7.31(s,1h),7.23(d,j＝8.5hz,1h),4.58(d,j＝24.9hz,2h),3.96(s,1h),3.86(s,2h),3.79(s,2h),2.60
–
2.19(m,2h).esi-ms:m/z＝540[m+h]
+
[0356]
制备实施例40
[0357]
合成(r)-2-(3-氟-5-(三氟甲基)苯基)-n-(5-((1-(噻唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)乙酰胺
[0358][0359]
合成方法参照例1步骤5，将2-(3-氟-5-(三氟甲氧基)苯基)乙酸代替(r)-(-)-α-甲氧基和化合物2b反应，然后参照例1步骤6与三氟乙酸反应后与2-氯噻唑[4,5-b]吡啶反应得到化合物compound 40，产率为77％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ12.30(s,1h),8.31(dd,j＝4.9,1.7hz,1h),8.19(dd,j＝7.8,1.7hz,1h),7.77(d,j＝5.8hz,1h),7.65
–
7.57(m,2h),7.53(dt,j＝9.8,1.8hz,1h),7.04(dd,j＝7.7,4.9hz,1h),4.44(p,j＝5.2hz,1h),3.94(s,2h),3.88(dd,j＝10.5,5.5hz,1h),3.64(d,j＝32.3hz,3h),2.49
–
2.34(m,
1h),2.17(dt,j＝12.4,6.1hz,1h)。esi-ms:m/z＝540[m+h]
+
[0360]
制备实施例41
[0361]
合成(r)-2-(3,5-双(三氟甲基)苯基)-n-(5-((1-(噻唑基[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)乙酰胺
[0362][0363]
合成方法参照例1步骤5，将2-(3,5-双(三氟甲基)苯基)乙酸代替(r)-(-)-α-甲氧基和化合物2b反应，然后参照例1步骤6与三氟乙酸反应后与2-氯噻唑[4,5-b]吡啶反应得到化合物compound 56，收率为81％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ12.33(s,1h),8.31(dd,j＝4.9,1.7hz,1h),8.19(dd,j＝7.8,1.7hz,1h),8.06(d,j＝9.6hz,3h),7.78(d,j＝5.8hz,1h),7.04(dd,j＝7.8,4.9hz,1h),4.44(t,j＝5.0hz,1h),4.06(s,2h),3.93
–
3.84(m,1h),3.65(d,j＝30.3hz,3h),2.49
–
2.35(m,1h),2.17(dt,j＝11.8,6.0hz,1h)。esi-ms:m/z＝574[m+h]
+
[0364]
制备实施例42
[0365]
合成(r)-2-(3,4-二氟苯基)-n-(5-((1-(噻唑基[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)乙酰胺
[0366][0367]
制备合成步骤参考例1步骤5，将2-(3,4-二氟苯基)乙酸代替(r)-(-)-α-甲氧基和化合物2b反应，然后参照例1步骤6与三氟乙酸反应后与2-氯噻唑[4,5-b]吡啶反应得到compound 37，产率为74％。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ12.28(s,1h),8.31(dd,j＝4.9,1.7hz,1h),8.21(dd,j＝7.8,1.7hz,1h),7.78(d,j＝5.8hz,1h),7.46
–
7.35(m,2h),7.16(ddt,j＝6.6,4.4,2.0hz,1h),7.04(dd,j＝7.8,4.9hz,1h),4.50
–
4.36(m,1h),3.87(s,1h),3.78(s,2h),3.64(dtd,j＝13.1,6.6,3.9hz,3h),2.40(ddt,j＝11.3,8.4,4.3hz,1h),2.22
–
2.10(m,1h)。esi-ms:m/z＝474[m+h]
+
[0368]
制备实施例43
[0369]
合成(r)-2-(2,3-二氟苯基)-n-(5-((1-(噻唑基[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)乙酰胺
[0370][0371]
制备合成步骤参考例1步骤5，将2-(2,3-二氟苯基)乙酸代替(r)-(-)-α-甲氧基和化合物2b反应，然后参照例1步骤6与三氟乙酸反应后与2-氯噻唑[4,5-b]吡啶反应
噻二唑-2-甲酰胺
[0386][0387]
制备合成步骤参考例22，用(r)-吡咯烷-3-基氨基甲酸叔丁酯代替7a，5-氨基-1,3,4-噻二唑-2-羧酸代替2-氨基-5-溴-1,3,4-噻二唑，苯甲胺代替(r)-(-)-α-甲氧基，反应得到compound 45，产率为32％。esi-ms:m/z＝438[m+h]
+
[0388]
制备实施例48
[0389]
合成(r)-n-(5-((1-(3-(噻唑并[4,5-b]吡啶-2-基)丙基)吡咯烷-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-2-(3-(三氟甲氧基)苯基)乙酰胺
[0390][0391]
制备合成步骤参考例22，用(r)-吡咯烷-3-基氨基甲酸叔丁酯代替7a，2-(3-氯丙基)噻唑并[4,5-b]吡啶代替2-氯噻唑[4,5-b]吡啶，2-(3-(三氟甲氧基)苯基)乙酸代替(r)-(-)-α-甲氧基，反应得到compound 46，产率为49％。esi-ms:m/z＝564[m+h]
+
[0392]
制备实施例49
[0393]
合成(r)-n-(5-((1-(噻唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-2-(间甲苯基)乙酰胺
[0394][0395]
制备合成步骤参考例22，用(r)-吡咯烷-3-基氨基甲酸叔丁酯代替7a，2-(间甲苯基)乙酸代替(r)-(-)-α-甲氧基，反应得到compound 48，产率为52％。esi-ms:m/z＝452[m+h]
+
[0396]
制备实施例50
[0397]
合成(r)-n-甲基-n-(5-((1-(噻唑基[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-2-(3-(三氟甲氧基)苯基)乙酰胺
[0398][0399]
制备合成步骤参考例22，用(r)-吡咯烷-3-基氨基甲酸叔丁酯代替7a，5-溴-n-甲基-1,3,4-噻二唑-2-胺代替2-氨基-5-溴-1,3,4-噻二唑，2-(3-(三氟甲氧基)苯基)乙酸代替(r)-(-)-α-甲氧基，反应得到compound 50，产率为52％。esi-ms:m/z＝536[m+h]
+
[0400]
制备实施例51
[0401]
合成2-氨基-n-(5-(((r)-1-(噻唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-yl)-2-(3-(三氟甲氧基)苯基)乙酰胺
[0402][0403]
制备合成步骤参考例22，用(r)-吡咯烷-3-基氨基甲酸叔丁酯代替7a，2-氨基-2-(3-(三氟甲氧基)苯基)乙酸代替(r)-(-)-α-甲氧基，反应得到compound 51，产率为57％。esi-ms:m/z＝537[m+h]
+
[0404]
制备实施例52
[0405]
合成(r)-2-(3-(三氟甲氧基)苯基)-n-(5-((1-(6-(三氟甲基)噻唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)乙酰胺
[0406][0407]
制备合成步骤参考例22，用(r)-吡咯烷-3-基氨基甲酸叔丁酯代替7a，2-氯-6-(三氟甲基)噻唑并[4,5-b]吡啶代替2-氯噻唑[4,5-b]吡啶，2-(3-(三氟甲氧基)苯基)乙酸代替(r)-(-)-α-甲氧基，反应得到compound 58，产率为52％。esi-ms:m/z＝590[m+h]
+
[0408]
制备实施例53
[0409]
合成(r)-2-(2,5-二氟苯基)-n-(5-((1-(噻唑基[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)乙酰胺
[0410]
[0411]
制备合成步骤参考例22，用(r)-吡咯烷-3-基氨基甲酸叔丁酯代替7a，2-(2,5-二氟苯基)乙酸代替(r)-(-)-α-甲氧基，反应得到compound 59，产率为71％。esi-ms:m/z＝474[m+h]
+
；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ12.44
–
12.15(m,1h),8.37
–
8.25(m,1h),8.20(d,j＝7.6hz,1h),7.77(d,j＝5.7hz,1h),7.25(ddt,j＝33.1,16.1,5.6hz,3h),7.11
–
6.96(m,1h),4.46(s,1h),3.86(s,3h),3.64(d,j＝38.6hz,4h),2.40(dd,j＝13.9,7.1hz,1h).
[0412]
制备实施例54
[0413]
合成(r)-2-(3-氟-5-(三氟甲基)苯基)-n-(5-((1-(噻唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)乙酰胺
[0414][0415]
制备合成步骤参考例22，用(r)-吡咯烷-3-基氨基甲酸叔丁酯代替7a，2-(3-氟-5-(三氟甲基)苯基)乙酸代替(r)-(-)-α-甲氧基，反应得到compound 60，产率为66％。esi-ms:m/z＝524[m+h]
+
；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ12.30(s,1h),8.31(dd,j＝4.9,1.7hz,1h),8.19(dd,j＝7.8,1.7hz,1h),7.77(d,j＝5.8hz,1h),7.65
–
7.57(m,2h),7.53(dt,j＝9.8,1.8hz,1h),7.04(dd,j＝7.7,4.9hz,1h),4.44(p,j＝5.2hz,1h),3.94(s,2h),3.88(dd,j＝10.5,5.5hz,1h),3.64(d,j＝32.3hz,3h),2.49
–
2.34(m,1h),2.17(dt,j＝12.4,6.1hz,1h).
[0416]
制备实施例55
[0417]
合成(r)-2-(4-氯-3-(三氟甲氧基)苯基)-n-(5-((1-(噻唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)乙酰胺
[0418][0419]
制备合成步骤参考例22，用(r)-吡咯烷-3-基氨基甲酸叔丁酯代替7a，2-(4-氯-3-(三氟甲氧基)苯基)乙酸代替(r)-(-)-α-甲氧基，反应得到compound 61，产率为65％。esi-ms:m/z＝[m+h]
+
[0420]
制备实施例56
[0421]
合成(r)-2-(2,6-二氟苯基)-n-(5-((1-(噻唑基[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)乙酰胺
[0422][0423]
制备合成步骤参考例22，用(r)-吡咯烷-3-基氨基甲酸叔丁酯代替7a，2-(2,6-二氟苯基)乙酸代替(r)-(-)-α-甲氧基，反应得到compound 62，产率为67％。esi-ms:m/z＝474[m+h]
+
；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ12.37(s,1h),8.31(dd,j＝4.9,1.7hz,1h),
8.19(dd,j＝7.7,1.7hz,1h),7.79(d,j＝5.8hz,1h),7.42(tt,j＝8.3,6.7hz,1h),7.13(t,j＝7.8hz,2h),7.03(dd,j＝7.7,4.9hz,1h),4.45(q,j＝4.8hz,1h),3.87(s,3h),2.40(ddd,j＝13.1,9.0,5.7hz,1h),2.16(dq,j＝11.6,5.2hz,1h).
[0424]
制备实施例57
[0425]
合成(r)-n-(5-((1-(噻唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)乙酰胺
[0426][0427]
制备合成步骤参考例22，用(r)-吡咯烷-3-基氨基甲酸叔丁酯代替7a，2-(3-(三氟甲基)苯基)乙酸代替(r)-(-)-α-甲氧基，反应得到compound 63，产率为64％。esi-ms:m/z＝506[m+h]
+
[0428]
制备实施例58
[0429]
合成(r)-n-(6-(((r)-1-(6-(3,3-二氟环丁基)-7h-吡咯并[2,3-c]哒嗪-3-基)吡咯烷-3-基)氨基)哒嗪-3-基)-2-甲氧基-2-(3-(三氟甲氧基)苯基)乙酰胺
[0430][0431]
称取化合物5d(93mg，0.23mmol)溶于dmso中，然后向其中加入dipea(89mg 0.69mmol)、5-氯-2-(3,3-二氟环丁基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶(51mg，0.21mmol)，室温下搅拌6h。反应完毕后加入10ml水淬灭反应，然后加入ea(30ml
×
3)萃取，得到的有机相加入无水硫酸钠干燥后经柱层析柱纯化(dcm/ch3oh)＝30:1得到化合物compound 5，产率69％。esi-ms:m/z＝618[m+h]
+
[0432]
制备实施例59
[0433]
合成(r)-n-(6-(((r)-1-(6-(3,3-二氟环丁基)-7h-吡咯并[2,3-c]哒嗪-3-基)吡咯烷-3-基)氨基)哒嗪-3-基)-2-甲氧基-2-(3-(三氟甲氧基)苯基)乙酰胺
[0434][0435]
称取化合物5d(93mg，0.23mmol)溶于dmso中，然后向其中加入dipea(89mg 0.69mmol)、5-氯-2-环丙基-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶(40mg，0.21mmol)，室温下搅拌6h。反应完毕后加入10ml水淬灭反应，然后加入ea(30ml
×
3)萃取，得到的有机相加入无水硫酸钠干燥后经柱层析柱纯化(dcm/ch3oh)＝30:1得到化合物compound 8，产率56％。esi-ms:m/z＝568[m+h]
+
[0436]
制备实施例60
[0437]
合成(r)-n-(5-(3-(噻唑并[4,5-b]吡啶-2-基氨基)吡咯烷-1-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-2-(4-(三氟甲氧基)苯基)乙酰胺
[0438][0439]
合成步骤参考制备实施例22，用2-(4-(三氟甲氧基)苯基)乙酸代替(r)-(-)-α-甲氧基，合成化合物compound 26，收率54％，esi-ms:m/z＝522[m+h]
+
[0440]
制备实施例61
[0441]
合成(r)-n-(5-(((r)-1-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)吡咯烷-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-2-甲氧基-2-苯乙酰胺
[0442][0443]
合成方法参照例1步骤7，将1d替换成6-氯咪唑并[1,2-b]哒嗪，反应得到compound 29，产率为57％。esi-ms:m/z＝451[m+h]
+
[0444]
制备实施例62
[0445]
合成(r)-2-甲氧基-2-苯基-n-(5-(((r)-1-(2-(三氟甲基)咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-基)吡咯烷-3-基))氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)乙酰胺
[0446][0447]
合成方法参照例1步骤7，将1d替换成6-氯-2-(三氟甲基)咪唑并[1,2-b]哒嗪，反应得到compound 32，产率为57％。esi-ms:m/z＝519[m+h]
+
[0448]
制备实施例63
[0449]
合成2-甲氧基-n-(5-(((r)-1-(噻唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-2-(3-(三氟甲氧基)苯基)乙酰胺
[0450][0451]
合成方法参照例1步骤5，用2-甲氧基-2-(3-(三氟甲氧基)苯基)乙酸替换(r)-(-)-α-甲氧基和化合物2b反应，参照例1步骤6与三氟乙酸反应，再参照案例1步骤7与2-氯噻唑[4,5-b]吡啶反应得到化合物compound 39，产率为53％。esi-ms:m/z＝552[m+h]
+
；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ12.35(s,1h),8.26(dt,j＝4.9,1.5hz,1h),8.14(dt,j＝
7.8,1.6hz,1h),7.79(d,j＝5.8hz,1h),7.54
–
7.40(m,3h),7.33(m,j＝8.0,2.7,1.4hz,1h),6.98(m,j＝7.7,4.9,1.2hz,1h),5.04(s,1h),4.47
–
4.30(m,1h),3.81(s,4h),3.31(d,j＝1.4hz,3h),2.40
–
2.24(m,1h).
[0452]
制备实施例64
[0453]
合成(r)-2-甲氧基-n-(5-(((r)-1-(噻唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-2-(3-(三氟甲氧基)苯基)乙酰胺和(s)-2-甲氧基-n-(5-(((r)-1-(噻唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)氨基)-1,3,4-噻二唑-2-基)-2-(3-(三氟甲氧基)苯基)乙酰胺
[0454][0455]
合成方法参照例63得到化合物compound 39-1和compound 39-2，再通过手性柱拆分(柱型：chiralcel oz-h(ozh0cd-od010)，0.46cm i.d.
×
15cm l；洗脱体系：meoh，acn)，得到39-1和39-2，产率分别为23％和20％。esi-ms:m/z＝552[m+h]
+
；39-1：1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.39(s,1h),8.25(dt,j＝4.8,1.6hz,1h),8.15(dt,j＝7.8,1.6hz,1h),7.79(d,j＝5.8hz,1h),7.53
–
7.40(m,3h),7.33(m,j＝8.0,2.7,1.4hz,1h),6.98(m,j＝7.7,4.9,1.2hz,1h),5.04(s,1h),4.48
–
4.30(m,1h),3.81(s,4h),3.31(d,j＝1.4hz,3h),2.42
–
2.24(m,1h).39-2：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ12.36(s,1h),8.27(dt,j＝4.9,1.5hz,1h),8.14(dt,j＝7.8,1.6hz,1h),7.80(d,j＝5.8hz,1h),7.54
–
7.40(m,3h),7.32(m,j＝8.0,2.7,1.4hz,1h),6.98(m,j＝7.7,4.9,1.2hz,1h),5.03(s,1h),4.47
–
4.30(m,1h),3.81(s,4h),3.31(d,j＝1.4hz,3h),2.40
–
2.22(m,1h).
[0456]
生物活性实验
[0457]
一、体外gls酶活
[0458]
反应体系：gls-domain(1μm)、gln(20mm)、na2hpo4(100mm)、edta(0.2mm)、tris-hcl(50mm)、抑制剂(0.5μl，25μm)、ddw补足200μl，阳性对照:cb-839，阴性对照：dmso。
[0459]
先将gls-domain、抑制剂、ddw混匀，室温静置30min；
[0460]
依次加入gln、na2hpo4、edta、tris-hcl，室温静置30min；
[0461]
按照谷氨酸检测试剂盒进行检测。
[0462]
药物浓度：1μm。结果见表2。
[0463]
表2. 1μm化合物作用时对体外gls相对酶活的测定结果
[0464][0465]
结论：1μm化合物作用时体外gls相对酶活力大大降低，说明本发明化合物对gls的酶活具有优异的抑制效果，大部分化合物的活性优于或与cb-839相当。
[0466]
二、细胞谷氨酸代谢
[0467]
细胞处理条件：786-o细胞以20000个/孔在24孔板种板，稳定24h。给予阳和化合物2um。药物用100ul培养基稀释并给予细胞。药物作用4h。
[0468]
谷氨酸检测：药物作用时间后，用1xpbs润洗一次。细胞用150ul双蒸水裂解15min。取100ul上清或细胞裂解液，加入玻璃96孔板。用谷氨酸检测试剂盒检测。结果见表3。
[0469]
表3. 2μm化合物作用时对786-o细胞谷氨酸相对含量的测定结果
[0470][0471]
结论：2μm化合物作用时使786-o细胞谷氨酸相对含量有所下降，说明受试化合物对786-o细胞内谷氨酰胺代谢具有较强抑制作用，活性与cb-839相当。
[0472]
三、细胞增殖抑制活性检测
[0473]
细胞处理条件：786-o或a375或ovcar8以1500个/孔在96孔板种板，稳定24h。
[0474]
给予阳和化合物系列浓度梯度。药物用100ul培养基稀释并给予细胞。药物作用72h。
[0475]
srb染法：将细胞上清弃去，用1xpbs润洗一遍，用10％三固定1h。弃去三，用自来水洗去多余三，60℃烘箱烘干96孔板。向干燥的96孔板每孔加入70ulsrb染液，室温染30min。用1％冰醋酸洗去多余srb染液，60℃烘箱烘干96孔板。用100ul 10mm tris-base溶液溶解srb。酶标仪540nm紫外吸收检测吸光度值。
[0476]
结果见表4至表6。
[0477]
表4.化合物对786-o细胞增值抑制的影响
[0478]
化合物编号786-o细胞ic50(nm)1049.963344.4834169.439-11515462.6cb-839172
[0479]
结论：本发明化合物对786-o细胞有明显的增值抑制活性，说明本发明化合物具有良好的抗肾癌效果，且化合物10、33、54活性明显优于cb-839。
[0480]
表5.化合物对a375细胞增值抑制的影响
[0481]
化合物编号a375细胞ic50(nm)1021.6813148.7914231.43
3318.2334200.339-150.325420.11cb-839160.33
[0482]
结论：本发明化合物对a375细胞有明显的增值抑制活性，说明本发明化合物具有良好的抗黑素瘤效果，且化合物10、33、39-1、54活性明显优于cb-839。
[0483]
表6.化合物对ovcar8细胞增值抑制的影响
[0484]
化合物编号a375细胞ic50(nm)1015.3413148.793356.8934211.2639-159.245430.65cb-839180.56
[0485]
结论：本发明化合物对ovcar细胞有明显的增值抑制活性，说明本发明化合物具有良好的抗软巢癌效果,且化合物10、33、39-1、54活性明显优于cb-839。
[0486]
四、药代动力学测试
[0487]
标准曲线和质控样本配制处理：取化合物混合储备液用50％甲醇水水稀释成含各化合物浓度分别为20、40、100、200、400、1000、2000、4000、10000ng/ml的标准工作液，60、600、8000ng/ml的质控工作液。分别取47.5μl空白大鼠血浆中加入2.50μl的标准曲线工作液和质控工作液，配置成含各化合物浓度为1.00、2.00、5.00、10.00、20.00、50.00、100.00、200.00、500.00ng/ml的标曲和浓度为3.00、30.00和400.00ng/ml的质控样本，分别加入200μl的乙腈(含内标维拉帕米2ng/ml)，涡旋振荡3min后，20000rcf，4℃离心10min，取上清液进行lc-ms/ms分析。
[0488]
未知样本配制处理：取血浆样品50μl，加入200μl的乙腈(含内标维拉帕米2ng/ml)，涡旋振荡3min后，20000rcf，4℃离心10min，取上清液进行lc-ms/ms分析。
[0489]
未知样本稀释10倍配制处理：取空白血浆45μl，加入血浆样品5μl，加入200μl的乙腈(含内标维拉帕米2ng/ml)，涡旋振荡3min后，20000rcf，4℃离心10min，取上清液进行lc-ms/ms分析。
[0490]
结果见表7。
[0491]
表7.本发明化合物在大鼠体内药代动力学性质
[0492][0493]
结论：本发明化合物在大鼠中药代吸收良好，具有药代动力学优势。所有待测化合物的cmax和auc都比cb-839和bptes有明显提高，清除率低于cb-839。
[0494]
五、肝微粒体稳定性
[0495]
1.用ph值7.41的5mm mgcl2预热100mm k-buffer。
[0496]
2.测试液配制
[0497]
0.5mm a液:将10mm的化合物原液加5μl，参比于acn的95μl中。
[0498]
微粒体1.5μm溶液(0.75mg/ml):将1.5μl的500μm溶液和18.75μl的20mg/ml肝微粒体加入479.75μl的k/mg-buffer中。
[0499]
3.用配制k/mg-buffer nadph溶液(6mm，5mg/ml)。
[0500]
4.分别将30μm含0.75mg/ml浓度的人、犬、猴、大鼠、小鼠肝微粒体的的加到不同时间点的检测板上(0,15,30,45,60min)。
[0501]
5.在37℃预孵育5分钟。
[0502]
6.0min时，在添加15μl nadph原液(6mm)前，先添加150μl含is的acn。
[0503]
将nadph溶解于k/mg缓冲液中，制备6mm，5mg/ml的nadph原液。
[0504]
7.在其他时间点，在孔中加入15μl的nadph原液(6mm)，开始反应并计时。
[0505]
8. 15min、30min、45min、60min时分别在对应板孔中加入150μl含is的acn，停止反应。
[0506]
9.淬火后，摇匀10分钟(600转/分)，然后6000转/分离心15分钟。
[0507]
10.将每孔80μl上清液转入96孔样品板(含140μl纯水)，用于lc/ms分析。
[0508]
结果见表8。
[0509]
表8.本发明化合物对不同种属肝微粒体稳定性实验结果
[0510][0511]
结论：本发明化合物在不同种属中肝微粒体稳定性良好，尤其是在人肝微粒体中半衰期明显优于cb-839，说明本发明化合物相较于cb-839对人的肝微粒体更为稳定。
[0512]
六、血浆稳定性
[0513]
1.用5mm mgcl2(k/mg-buffer)预热0.1m磷酸钾缓冲液，ph 7.4
±
0.1。
[0514]
2.血浆制备:将冰冻的人、犬、猴、大鼠、小鼠血浆置于37℃快速解冻。
[0515]
3.测试化合物和内标化合物溶液:
[0516]
0.5mm溶液a：在95μl acn中加入10mm储备液的5μl。0.01mm溶液b:在980μl0.1m k/mg-buffer缓冲液中加入20μl溶液a。
[0517]
4.将血浆与溶液b一起在37℃下预热5min。
[0518]
5.分别在0、5、15、30、60,120min各时间点分别加入90μl预热好的血浆。
[0519]
6.在0min板孔中分别加入10μl b溶液，400μl含内标物(is)的acn。
[0520]
7.对于其他时间点，分别在5、15、30、60,120min的时间点指定的孔中加入10μl预热后的溶液b。
[0521]
8.在5、15、30、60,120min分别在相应板孔中加入400μl含is的acn，停止反应。
[0522]
9.淬火后，摇匀5分钟(600转/分)，并在-20℃保存(如有必要)。
[0523]
10.lc/ms/ms分析前，将样品在室温下解冻，6000rpm离心20分钟。
[0524]
11.将每孔100μl上清液转入96孔含100μl超纯水的样品板中，用于lc/ms分析。
[0525]
结果见表9。
[0526]
表9.本发明化合物对不同种属血浆稳定性实验结果
[0527][0528]
结论：本发明化合物在不同种属中血浆稳定性优异，在120min的检测时间范围内未见明显代谢。
[0529]
七、体内药效
[0530]
1.小鼠结肠癌皮下移植瘤模型的建立
[0531]
消化收集体外培养的小鼠结肠癌ct26细胞，以1
×
106细胞/100μl注射入小鼠皮下，观察小鼠肿瘤生长情况。
[0532]
2.分组
[0533]
待小鼠肿瘤平均体积生长至75mm3～100mm3时进行分组给药，24只雄性balb/c小鼠根据肿瘤体积和体重随机分为4组，每组6只。
[0534]
(1)溶媒对照组(0.5％cmc-na)
[0535]
(2)化合物33 200mg/kg组
[0536]
(3)pd-l1单抗组(鼠源单抗)5mg/kg组
[0537]
(4)化合物33剂量200mg/kg+pd-l1单抗(鼠源单抗)剂量5mg/kg合用组
[0538]
3.给药和指标测定
[0539]
首次给药当天计为给药第1天。化合物33和溶媒对照(0.5％cmc-na)每天两次灌胃给药(两次间隔时间约8小时)，pd-l1单抗组(鼠源单抗)每周两次腹腔注射给药。每天称量小鼠体重，每周三次测定小鼠肿瘤体积，计算相对肿瘤体积和t/c。给药13天后剖取肿瘤，称瘤重，计算ir。并进行统计分析。
[0540]
结果见表10。
[0541]
表10.化合物33联合pd-l1单抗对小鼠肿瘤瘤重的影响
[0542]
组别剂量(mg/kg)twt/cirvehicle control-1.0117
±
0.2087
‑ꢀ
化合物332000.5543
±
0.140644.0445.21anti pd-l150.2491
±
0.159428.3475.38化合物33+anti pd-l1200+50.0654
±
0.0247
*
8.9293.54
[0543]
与vehicle control相比，
*
：p《0.05。
[0544]
结论：本发明化合物在单用情况下对结肠癌模型有一定效果，与pd-l1单抗联用效果优于化合物单用以及pd-l1单抗单用。
[0545]
以上所述仅是本发明的具体实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
技术特征：
1.一种具有结构式i的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，其中：a是苯环或者吡啶环；b是含n个杂原子的5-6元芳杂环，n选自1-3的整数，杂原子选自o、n、s中的一种或多种；c是含p个杂原子的8-12元稠芳环，p选自1-7的整数，杂原子选自o、n、s中的一种或多种；l1选择自l2选择自选择自其中x选自ch或n，y、z各自独立地选自键、ch2、nh或o，m、h各自独立地选自0-3的整数，k选自1-3的整数；r1和r2各自独立地选自氢、氰基、卤素、c
1-5
烷氧基、c
3-5
环烷基氧基或c
1-5
烷基，所述c
1-5
烷氧基、c
3-5
环烷基氧基、c
1-5
烷基可任意地被1-3个卤素所取代；r3和r4各自独立地选自缺失、氢、卤素、氰基、胺基、c
1-5
烷基或c
3-5
环烷基，所述c
1-5
烷基、c
3-5
环烷基可任意地被1-3个卤素所取代，所述胺基可任意地被1-2个c
1-5
烷基所取代；l3选自键、其中q选自1-4的整数；r6选自氢或c
1-5
烷基；r7和r8各自独立地选自氢、胺基、c
1-5
烷氧基或c
1-5
烷基，所述胺基可任意地被1-2个c
1-5
烷基所取代；当x是ch时，y、z不同时选自键和/或ch2；l2不选自k选自1-3的整数。2.根据权利要求1所述的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，其中所述化合物具有式ⅱ所示结构，其中：
b选自其中b1选自s或o，b2、b3、b4、b5各自独立地选自ch或n，且b4、b5不同时为ch；c选自其中c5选自o、nh或s，c1、c2、c3、c4、c6、c7各自独立地选自ch或n；l2选择自选择自其中x选自ch或n，y、z各自独立地选自键、ch2或nh，m、h选自0-3的整数，k选自1-3的整数；r1和r2各自独立地选自氢、氰基、卤素、c
1-5
烷氧基、c
3-5
环烷基氧基或c
1-5
烷基，所述c
1-5
烷氧基、c
3-5
环烷基氧基、c
1-5
烷基可任意地被1-3个卤素所取代；r3和r4各自独立地选自缺失、氢、卤素、氰基、胺基、c
1-5
烷基或c
3-5
环烷基，所述c
1-5
烷基、c
3-5
环烷基可任意地被1-3个卤素所取代，所述胺基可任意地被1-2个c
1-5
烷基所取代；l3选自键、r6选自氢或c
1-5
烷基；r7和r8各自独立地选自氢、胺基、c
1-5
烷氧基或c
1-5
烷基，所述胺基可任意地被1或2个c
1-5
烷基所取代；当x是ch时，y、z不全选自键和ch2；l2不选自k选自1-3的整数。3.根据权利要求1或2所述的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，其中：b选自4.根据权利要求1-3任一项所述的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，其中：c选自选自5.根据权利要求1-4任一项所述的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，其中：
l3选自键、ch2、6.根据权利要求1-5任一项所述的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，其中：l2选自选自7.根据权利要求1-6任一项所述的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，其中：r1和r2各自独立地选自氢、氰基、f、cl、cf3、8.根据权利要求1-7任一项所述的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，其中：r3和r4各自独立地选自缺失、氢、f、ch3、cf3、氰基、9.根据权利要求1或2所述的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，其中所述化合物包含式iii至式ix任一所示结构：其中，
c选自c选自r1和r2各自独立地选自氢、氰基、f、cl、cf3、r3和r4各自独立地选自缺失、氢、f、ch3、cf3、氰基、l3选自键、ch2、r6选自氢或ch3。10.根据权利要求1或2所述的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，其中所述化合物包含式x所示结构：其中环c、r1、r2、r3、r4、r6和l3如权利要求1-9任一项所定义。11.根据权利要求1-10任一项所述的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，其中，所述化合物选自：
12.权利要求1-11任一项所述的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐在制备用于gls1介导的疾病的药物中的应用。13.根据权利要求12所述的应用，其中所述gls1介导的疾病包括癌症、免疫性障碍和/或神经性障碍。14.根据权利要求13所述的应用，其中所述癌症包括实体瘤结直肠癌、肾癌、乳腺癌、三阴乳腺癌、肺癌、黑素瘤、卵巢癌、胰腺导管腺癌、前列腺癌、血液瘤白血病、淋巴癌或多发性骨髓瘤。15.根据权利要求12所述的应用，其中，权利要求1-11任一项所述的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐单独或与其他药物制剂合用，其中，所述其他药物包括放疗、化疗药物、免疫检查点抑制剂等中的一种或多种。16.根据权利要求15所述的应用，其中，所述其他药物包括化疗药物(如紫杉醇、卡培他滨、伊利替康、阿扎胞苷)、mtor/pi3k/akt通路抑制剂(如依维莫司)、parp抑制剂(如尼拉帕尼、卢卡帕利)、cdk4/6抑制剂(如帕博西尼)、蛋白酶体抑制剂(如泊马度胺)、pd-1/pd-l1单抗(如纳武单抗、阿特丽珠单抗、度伐利尤单抗)等中的一种或多种。17.权利要求1-11任一项所述的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐作为谷氨酰胺酶gls1抑制剂的应用。
技术总结
本发明提供了一种谷氨酰胺酶GLS1抑制剂及其制备方法与应用，具体地，本发明提供了一种具有结构式I的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐，其中A是苯环或者吡啶环；B是含n个杂原子的5-6元芳杂环，n选自1-3的整数，杂原子选自O、、S中的一种或多种；C是含p个杂原子的8-12元稠芳环，p选自1-7的整数，杂原子选自O、、S中的一种或多种；各取代基如说明书中所定义。本发明的化合物、其异构体或其药学上可接受的盐可作为GLS1抑制剂，具有良好的活性和代谢性质。谢性质。谢性质。
