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畜牧兽医科技信息2018年第10期

禽流感

（Avian

Influenza，AI）是由A型流感病毒引起

的一种禽类病毒性疾病，被国际兽疫局确定为一类传染病。

自1878年首次在意大利发生和流行后，140年来在世界各

地多次流行，对养禽业造成重大经济损失。

某种病毒或病毒的血凝素，能选择性地使某种或某几种

动物的红细胞发生凝集，这种凝集红细胞的现象称为血凝，

也称直接血凝反应，利用这种特性设计的试验称血凝试验。

当病毒的悬液中先加入特异性抗体，且这种抗体的量足

以抑制病毒颗粒或其血凝素，则红细胞表面的受体就不能与

病毒颗粒或其血凝素直接接触。

这时红细胞的凝集现象就被

抑制，称为红细胞凝集抑制反应，利用这种特性设计的试验

称血凝抑制试验。

1材料与仪器

本文所用病毒尿囊液、血清皆由扬州大学兽医学院畜禽

传染病学重点开放实验室提供。

1.2.1PBS液的配制

（

pH:7.2）

1.2.21%红细胞悬液的配置

（1）采新鲜的鸡血，其中加抗凝剂1/5~1/10左右；

（2）分装入10mL的离心管中（

未满则用

PBS液补足量

），

配

平后用离心机离心10min，14000rpm/min；

（3）离心结束后，弃去上清液，加PBS吹打，配平后再次离心；

（4）反复离心3次，吹打3次即可；

（5）根据红细胞体积，用PBS配成溶液浓度为1%的红细胞

悬液。

恒温金属水浴锅CHB-100型（杭州大和热磁电子有限

公司）、各种量程微量移液器、微量振荡器、96孔V型微量反

应板。

2实验步骤

具体步骤：按照表2，向1~12孔加25μLPBS；吸取

25μL病毒，并从第1孔开始稀释一直稀释到第11孔，11

孔稀释完后弃去25μL，第12孔不加病毒；12孔全部再加一

遍PBS，剂量为25μL，注意悬空滴加；12孔全部再加一遍

1%红细胞悬液，剂量为25μL，注意滴加时要悬空滴加；轻微

震荡混匀；放37℃恒温箱20min，观察结果实验结果。

具体步骤：按照表3，向1~12孔加25μLPBS；吸取

25μL阳性血清，并从第1孔开始稀释一直稀释到第10孔，

10孔稀释完后弃去25μL，第11、12孔都不加血清；4单位

病毒的配制：即将一个血凝单位的病毒增加至4倍浓度，例

如一个血凝单位为1:64，4个血凝单位则为64/4=16倍稀释

（1倍的病毒+15倍的PBS）；从第1孔开始，病毒悬空滴加

至第11孔，每孔加病毒25μL，第12孔用25μLPBS代替；

振荡混匀，室温或37℃温箱15~30min；每孔加25μL1%红细

胞悬液，振荡混匀，室温10min后开始观察，直到结果出现。

3血凝及血凝抑制试验结果

由表4得出病毒尿囊液的HA效价为27，将HA试验中

得到效价为27的尿囊液，用PBS按1:4稀释成4U病毒，然

后进行HI试验。

由表5可以得出，该病毒样品既不能被H9亚型禽流感

抗血清抑制，也不能被NDV阳性血清抑制，只能被H5亚型

禽流感抗血清抑制，其HI效价为28。可初步判断为H5亚型

禽流感病毒。

4小结与讨论

病毒样品HA血凝素效价可达27，HI效价达28，且血凝

活性不能被抗新城疫病毒血清和AIV~H9标准阳性血清抑

制抑制，排除鸡新城疫和H9，初步判断为H5亚型禽流感。

HA和HI试验不仅可以用于禽流感、

新城疫等具有血凝性病

毒的鉴定，更可用于禽群免疫状态评价。该试验是目前世界

卫生组织和国际动物健康组织进行全球流感监测所普遍采

用的方法，而且因其具有经济、快速、

可靠、操作简便、能够处

理大量样品，并能在短时间内报告抗体水平等优点，已成为

禽流感监测中HA和HI试验的应用

谢弘历

（江苏省无锡市锡山区安镇畜牧兽医站，江苏无锡214191）

摘要：本文通过对一株禽流感病毒样本进行HA和HI试验，详细介绍HA和HI试验的具体步骤，旨在规范实验流

程，为日常动物疫情监测提供参考。

关键词：禽流感；血凝；

血凝抑制

DOI:10援3969/援1671-6027援2018援10.014

表1PBS液配制

试验研究

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畜牧兽医科技信息2018年第10期

表2HA试验

当前基层兽医实验室疫情监测和免疫抗体检测中最常用的

方法。因此灵活掌握HA和HI试验，对畜禽疫情监测工作的

开展具有重要意义。

参考文献

[1]吴庭才，等.禽流感(H9)病毒的分离鉴定及免疫试验[J].河南科

技大学学报(农学版).2003(23)

[2]金元昌，等.禽流感病毒分子生物学研究进展[J].动物医学进展.

2003，01.

[3]何维明，等.禽流感流行病学调查及病原分离鉴定初报[J].西北

农业学报.2001，10，3，:16～19.

[4]金宁一.高致病性禽流感的流行及其预防控制[J].中国免疫学

杂志.2006，22.

表3HI试验

表4血凝试验结果

表5血凝抑制试验结果

2018年9月3日，由国家科学技术奖励工作办公室、中国农业科学院科技局、

中国农业科学院成果转化局和黑龙江省科

技厅相关领导和专家组成的调研组一行11人赴我所，通过现场考察、听取汇报、与相关专家座谈等方式，

就国家科技奖励对

农业发展的带动作用进行了现场调研。

调研组一行首先考察了我所新所区，并参观了所史馆，对我所建设发展历程和我所对国家动物疫病防控做出的贡献进

行了了解。随后，调研组与所领导和创新团队的首席等专家进行了座谈。座谈会上，步志高所长首先对近年来，尤其是创新工

程实施以来我所科技创新平台建设、人才培养、科技进展情况，以及科技成果转化状况进行了汇报；同时，还就1999年以来

我所以第一单位获得的7个国家科技奖励对学科和产业发展的促进作用，我所重大成果培育机制等进行了汇报。我所陈化

兰院士、王笑梅研究员等就已获得的国家科技奖励对后续工作的促进作用，

以及近年来研究工作取得的新进展进行了介绍。

调研组通过听取相关工作汇报和介绍，对我所近年来科技创新工作取得的进展和成果表示了充分的肯定，

并对重大成果培

育提出了建设性意见和建议。国家科学技术奖励工作办公室陈志敏副主任对近年来国家科技奖励工作及评审机制的最新发

展趋势进行了介绍，并就进一步完善当前农业领域国家科技奖励评审制度征求了在座专家的意见和建议。

参加此次调研座谈会的还包括国家科学技术奖励工作办公室相关领导、

中国农业科学院科技局文学副局长及成果转化

局相关领导和专家、黑龙江省科技厅于立河副厅长及相关领导，

以及我所相关创新团队首席和首席助理等。

通过此次与调研组的沟通和交流，进一步加深了我所科研人员对国家科学奖励政策的了解，

为我所科技创新工作更好

的开展和重大成果的培育提供了重要的指导作用。（本刊记者任宪刚柳金雄

）

国家科学技术奖励工作办公室调研组

赴中国农业科学院哈尔滨兽医研究所调研

试验研究

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