丛枝菌根真菌

Ａｂｓｔｒａｃｔ

Ａｒｂｕｓｃｕｌａｒ

ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｓａｒｅｍｕｍａｉｉｓｔｉｃ

ｓｙｍｂｉｏｔｉｃ

ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｓｆｏｒｍｅｄｂｅｔｗｅｅｎｃｌｔｒｕｓ

ａｎｄ

ａｒｂｕｓｃｕｌａｒ

ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｈｍｇｉ。Ａｒｂｕｓｃｕｌａｒｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｆｕｎｇｉ

ａｉｄ

ｐｒｏｃｕｒｅｍｅｎｔ

ｏｆｗａｔｅｒ

ａｎｄｍｉｎｅｒａｌ

ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ

ｂｙ

ｃｉｔｒｕｓ

ｒｏｏｔｓ

ｗｉｔｈ

ｓｐａｒｓｅ

ｒｏｏｔ·ｈａｉｒｓ，ａｎｄ

ｅｘｐｅｄｉｔｅ

ｔｈｅ

ｐｒｏｃｅｓｓ

ｏｆ

ｇｒｏｗｔｈ

ａｎｄ

ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ａｎｄ

ｔｏｎｅ

ｕｐ

ｔｈｅ

ｃｏｍｐｅｔｅｎｃｅ

ｏｆｓｔｒｅｓｓｅｓ—ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ

ｒｅｓｕｌｔａｎｔｌｙ，ａｓ

ｗｅｌｌａｓ

ｇｅｔ

ｔｈｅ

ａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ

ｏｆｃａｒｂｏｎｆｒｏｍｃｉｔｒｕｓ．Ａｓｔｈｅ

ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ

ｏｆ

ａｒｂｕｓｃｕｌａｒ

ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｓ

ｗａｓ

ｃｏｎｓｉｄｅｒｅｄ，ｒｅｓｅａｒｃｈｅｓ

Ｏｎａｒｂｕｓｃｕｌａｒ

ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｓ

ｏｆｃｉｔｒｕｓｗｏｕｌｄ

ｓｉｇｎｉｆｙａｇｒｅａｔｐｒｏｍｏｔｉｏｎ

ｆｏｒ

ｓｕｓｔａｉｎａｂｌｅ

ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ

ｏｆｃｉｔｒｕｓ

ｉｎｄｕｓｔｒｙ．

Ｈｅｒｅ．ｗｅ

ｒｅｐｏｒｔｅｄｏｕｒａｔｔｅｍｐｔｓ

ｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈｄｕａｌ

ｃｕｌｔｕｒｅ

ｓｙｓｔｅｍｏｆｈａｉｒｙ

ｒｏｏｔｓｏｆｃｉｔｒｕｓ

ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ

ｂｙ

Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ

ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈａｒｂｕｓｃｕｌａｒ

ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｆｕｎｇｉ．

Ｔｈｅｍａｉｎｒｅｓｕｌｔｓｗｅｒｅａｓｆｏｌｌｏｗｓ：

１．Ｆｉｓｈ－ｓｑｕａｍａ－ｓｈａｐｅｄ－ｗｏｕｎｄｅｄ（ＦＳＳＷ）ｔｒｅａｔｍｅｎｔｈａｄ

ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｉｎｃｒｅａｓｍｇ

ｅｆｆｅｃｔｏｎ

ｔｈｅ

ｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆ

ｈａｉｒｙ

ｒｏｏｔｓ

ｏｒｉｇｉｎａｔｅｄ

ｆｒｏｍ

ｅｐｉｃｏｔｙｌｓ，ＴｈｅｅｐｉｃｏＷｔｓ

ｏｆｔｒｉｆｏｌｉａｔｅ

ｏｒａｎｇｅ

（Ｐｏｎｃｉｒｕｓｔｒ蜘ｌｉａｔａ（Ｌ．）Ｒａｆ．），４０ｄａｙｓ

ｏｌｄ，ｗｅｒｅ

ｆｉｓｈ—ｓｑｕａｍａ＊ｓｈａｐｅｄ

ｗｏｕｎｄｅｄ，ａｎｄ

ｔｈｅｎ

ｗｅｒｅｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ

ｂｙ

Ａ４ｄｓｔｒａｉｎｏｆ

Ａ．ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ

Ｉｔｗａｓｒｅｖｅａｌｅｄｔｈａｔ

ｅｐｉｃｏｔｙｌｓ

ｔｒｅａｔｅｄ

ｗｉｔｈＦＳＳＷｍｅｔｈｏｄｈａｄ

ｈｉｇｈｅｒｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ

ｏｆｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ．６６７％．ｔｈａｎｔｈｏｓｅｏｆ

ｕｎｔｒｅａｔｅｄ

ｅｐｉｃｏｔｙｌｓ，２９．２％，ａｎｄ

ｔｈｅ

ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ

ｏｆｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｔｗｏ

ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓｗａｓｉｎｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ．

２．Ｔｈｅ

ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ

ｂｅｔｗｅｅｎ

ｔｙｐｅｏｒａｇｅ

ｏｆ

ｅｘｐｌａｎｔｓ

ｏｆｌｅｍｏｎ（Ｃｉｔｍｚｓｔｉｍｏｎ（Ｌ．）Ｂｕｒｒｎ）

ｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈＦＳＳＷｍｅｔｈｏｄａｎｄｔｈｅ

ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ

ｏｆ

ｈａｉｒｙ

ｒｏｏｔｓ

ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓｉｓ

ｉｎｄｕｃｅｄ

ｂｙ

Ａ４ｔ

ｓｔｒａｉｎｏｆ

Ａ。ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ

Ｗａｓ

ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ。Ｔｈｅ

ｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅ

ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ

ｏｆ

ｈａｉｒｙ

ｒｏｏｔｓ

ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓｉｓ

ｏｆ

ｅｐｉｃｏｔｙｌｓ

ｏｆｌｅｍｏｎｗｈｉｃｈ

ｈａｄ

ｇｒｏｗｎ

ｆｏｒ１５

ｄａｙｓＶｅｒＳＵＳ１０５

ｄａｙｓ

ＷａＳ７０．８％ｖｅｒｓｕｓ８３．３％、ａｎｄｔｈｅ

ｒｈｉｚｏｇｅｎｉｃ

ｒａｔｉｏｂｅｔｗｅｅｎ

ｔｈｅ

ｅｘｐｌａｎｔｓ

ｏｆｔｗｏ

ａｇｅｓ

ｗａｓ

ｎｏｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔ

ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ，ｗｈｅｒｅａｓ

ｔｈｅ

ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ

ｏｆ

ｈａｉｒｙ

ｒｏｏｔｓｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓｉｓ

ｏｆ

ｅｐｉｃｏｔｙｌｓ

ｖｅｒｓｕｓｃｏｔｙｌｅｄｏｎｓ

ｏｆｌｅｍｏｎｗｈｉｃｈｈａｄ

ｇｒｏｗｎ

ｆｏｒ１５

ｄａｙｓ

ｗａｓ６７＋５％ｖｅｒｓｕｓ２３＿３％．ａｎｄ

ｔｈｅ

ｒｈｉｚｏｇｅｎｉｃ

ｒａｔｉｏｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｔｗｏ

ｅｘｐｌａｎｔｔｙｐｅｓ

ｗａｓｄｉｆｆｅｒｅｎｔ

ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ、Ｉｔ

ｗａｓ

ｒｅｖｅａｌｅｄｔｈａｔ

ｅｘｐｌａｎｔｔｙｐｅ，ｗｈｉｃｈｃｏｍｐａｒｅｄ

ｗｉｔｈ

ｅｘｐｌａｎｔａｇｅ，ｗａｓｏｎｅｏｆｔｈｅ

ｉｍｐｏｒｔａｎｔ

ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｆａｃｔｏｒｓｏｆｔｈｅ

ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ

ｏｆ

ｈａｉｒｙｒｏｏｔｓ

ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅｅｐｉｃｏｔｙｔ’Ｓ

ａｇｉｎｇ

ｗｏｕｌｄ

ｈｅｌｐ

ｔｏ

ｕｐｇｒａｄｅ

ｔｈｅ

ｒｈｉｚｏｇｅｎｉｃ

ｒａｔｉｏ。

３。Ｈａｉｒｙ

ｒｏｏｔｓｏｆｌｅｍｏｎ

ｄｉｓｐｌａｙｅｄ

ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ

ｖａｒｉａｔｉｏｎａｎｄ

ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ，ａｎｄ

ｅｌｉｔｅｃｌｏｎｅｓ

ＯＬ２．１，ＯＬｘｘｌ，ＯＬｌ３—２，ＹＬ２２－４

ａｎｄＹＬ８－１ｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄ

ｂｙ

ｔｈｅ

ｓｉｎｇｌｅ—ｃｌｏｎｅ—

ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ—ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ

ｍｅｔｈｏｄ，ｈｏｗｅｖｅｒ

ｈａｉｒｙｒｏｏｔｓ

ｏｆｔｒｉｆｏｌｉａｔｅｏｒａｎｇｅｈａｄｎｏｃａｐａｃｉｔｙ

ｏｆ

ｂｒａｎｃｈｉｎｇ，ａｎｄ

ｎｕｌｌｃｌｏｎｅｓｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄ

ｒｅｓｕｌｔａｎｔｌｙ．

４．Ｔｈｅ

ｌｅｎｇｔｈ

ｏｆＯＬ２一ｌｃｌｏｎｅｏｆ＂ｌｅｍｏｎ

ｈａｉｒｙ

ｒｏｏｔｓｗａｓｎｏｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔ

ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ

３

ｂｅｔｗｅｅｎ２

ｗｅｅｋｓ’ｎｅｔ

ｇｒｏｗｔｈ

ａｎｄ４

ｗｅｅｋｓ’ｎｅｔ

ｇｒｏｗｔｈ

ｉｎｔｈｅ

ｓａｍｅ

ｍｅｄｉｕｍ，ｗｈｅｒｅａｓ

ｔｈｅ

ｌｅｎｇｔｈ

ｏｆｔｈｅｍ

ｗｈｉｃｈｈａｄ

ｇｒｏｗｎ

ｆｏｒ２ｗｅｅｋｓｏｒ４

ｗｅｅｋｓｉｎｅａｃｈｏｕｔｏｆｔｈｅｆｏｕｒ

ｍｅｄｉａ，

ｈａｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ．Ｔｈｅｎｅｔ

ｌｅｎｇｔｈ

ｏｆ

ｈａｉｒｙｒｏｏｔｓ，ｗｉｔｈ

ｔｈｅｍａｊｏｒｉｔｙ’Ｓ

ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ

ｏｆ

ａｃｔｉｖｉｔｙ，ｈａｄ

ｅｘｃｅｅｄｅｄ１０．０ｍｉｌｌｉｍｅｔｅｒａｆｔｅｒ４

ｗｅｅｋｓ’ｇｒｏｗｔｈｉｎｔｈｅｍｅｄｉｕｍ

ＩＶ，

ｈｏｗｅｖｅｒｔｈｅｎｅｔ

ｌｅｎｇｔｈ

ｏｆ

ｈａｉｒｙｒｏｏｔｓ，ｗｉｔｈ

ａｌｍｏｓｔｔｈｅ

ｔｏｔａｌｉｔｉｅｓ’ｄｅａｔｈ，ｈａｄ

ｅｌｏｎｇａｔｅｄＤＯ

ｍｏｒｅｔｈａｎ３．５ｍｉｌｌｉｍｅｔｅｒａｆｔｅｒ４

ｗｅｅｋｓ’ｇｒｏｗｔｈ

ｉｎｔｈｅｏｔｈｅｒｓｍｅｄｉａ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔ

ｉｍｐｌｉｅｄ

ｔｈａｔ

ｔｒｉｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ

ａｍｉｎｏｍｅｔｈａｎｅ

ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｃ

ａｃｉｄｂｕｆｆｅｒ（Ｔｒｉｓ·ＨＣＩｂｕｆｆｅｒ），ｗｈｉｃｈ

ｃｏｍｐａｒｅｄ

ｗｉｔｈｔｈｅｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌｉｍｂａｌａｎｃｅ，Ｗａｓａｐｒｏｂａｂｌｙｍａｊｏｒｐｏｉｓｏｎｏｕｓ

ｆａｃｔｏｒ

ｕｎｄｅｒｌｙｉｎｇ

ｔｈｅｄｅａｔｈ＆ｈａｉｒｙｒｏｏｔｓ．

５．Ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆａｒｂｕｓｃｕｌａｒ

ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ

ｆｉｍｇａｌｓｐｏｒｅｓ

ｈａｄ

ｎｏｉｎｔｒａｓｐｅｃｉｆｉｃ，ｂｕｔ

ｈｉｔｅｒｓｐｅｃｉｆｉｃｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ

ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｉｎｔｈｅｍｅｄｉｕｍ

Ｉ，ＩＩ，ＩＩＩ

ａｎｄＩＶ．Ｔｈｅ

ａｖｅｒａｇｅ

ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ

ｏｆ

ｓｐｏｒｅｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ

ｏｆ

Ｇｉｇａｓｐｏｒａｍａｒｇａｒｉｔａ

Ｂｅｃｋｅｒ＆Ｈａｌｌ（ＮＣｌ２１Ａ）ａｎｄ

Ｇｌｏｍｕｓｍｏｓｓｅａｅ（Ｎｏｃｏｌｓｏｎ＆Ｏｅｒｄ．）Ｔｒａｐｐｅ＆Ｇｅｒｄ．（ＣＡｌ２７），ｗｈｉｃｈｗｅｒｅ

ｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈａｔ

ｏｆｆｏｒｍｅｒｒｅｓｅａｒｃｈｅｒｓ’ｎｏｔｅｓ．ｗｅｒｅ３８．０％ａｎｄ

３．３％ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｉｔ

ｗａｓ

ｒｅｖｅａｌｅｄｔｈａｔ

ａｒｂｕｓｃｕｌａｒ

ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｆｕｎｇａｌｓｐｏｒｅｓ

ｈａｄａｗｉｄｅ

ｒａｇｅ

ｏｆ

ａｄａｐｔａｔｉｏｎ

ｔｏｍｅｄｉａ，ａｎｄｔｈｅ

ｓｐｏｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ

ｗｈｉｃｈＷａｓｄｉｆｆｅｒｅｎｔ

ａｍｏｎｇｓｐｅｃｉｅｓ

ａｎｄｌｏｒ

ｇｅｎｅｒａ

ｗａｓａｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔ

ｆａｃｔｏｒ

ｏｆｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ．

６．Ｔｒｉｅｄｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈｄｕａｌｃｕｌｔｕｒｅ

ｓｙｓｔｅｍｓ

ｏｆ

ｈａｉｒｙ

ｒｏｏｔｓｃｌｏｎｅＯＬ２—１

ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｌｌＧｆ

ｍａｒｇａｒｉｔａ

ａｎｄＧｍｏｓｓｅａｅ

ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙｂｙｐｒｏｘｉｍａｌ

ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎｏｆ

ｓｐｏｒｅｓ

ｔｏｔｈｅ

ｔｉｐｓ

ｏｆ

ｈａｉｒｙ

ｒｏｏｔｓｉｎｔｈｅｍｅｄｉｕｍＩＶ．Ｔｈｅａｒｂｕｓｃｕｌａｒ

ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｓ

ｆｏｒｍｅｄ

ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ

ｂｅｔｗｅｅｎ

ｈａｉｒｙｒｏｏｔｓ，ａｎｄ

Ｇｉ

ｍａｒｇａｒｉｔａ

ｗｈｉｃｈｆａｉｌｅｄ

ｔｏｓｐｏｒｕｌａｔｅｓｐｏｒｅｓ，ｈｏｗｅｖｅｒ

ｔｈｅａｒｂｕｓｃｕｌａｒ

ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｓ

ｄｉｄｎｏｔｆｏｒｍｅｄ

ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ

ｂｅｔｗｅｅｎＧｍｏｓｓｅａｅａｎｄｔｈｅｉｒ

ｐａｒｔｎｅｒｓ．

Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｏｆｄｕａｌｃｕｌｔｕｒｅ

ｓｙｓｔｅｍｓ

ｗｅｒｅａｆｆｅｃｔｅｄ

ｂｙｍａｎｙｐａｒａｍｅｔｅｒｓｉｎｃｌｕｄｉｎｇｓｐｏｒｅ

ｓｐｅｃｉｅｓ，ａｃｔｉｖｉｔｙ

ｏｆ

ｓｐｏｒｅ，ｉｎｔｒａｓｐｅｃｉｆｉｃｓｐｏｒｅｔｙｐｅ，ｔｈｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ

ｏｆ

Ｐｅｔｒｉ

ｄｉｓｈｅｓ，ａｎｄＳＯ

ｏｎ

ＫｅｙＷｏｒｄｓ：Ｃｉｔｒｕｓ；ｈａｉｒｙｒｏｏｔｓ；ａｒｂｕｓｅｕｌａｒｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｆｕｎｇｉ；ｄｕａｌ

ｃｕｌｔｕｒｅ

Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ

ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ

４

缩写谰表

Ｔａｂｌｅ

ｏｆＡｂｂｒｅｖｉａｔｉｏｎ

缭写簿号英文中文

Ａｂｂｒｅｖｉａｔｉｏｎ

Ｅｎｇｌｉｓｈ

Ｃｈｉｎｅｓｅ

ＡＡｒｂｕｓｃｕｌｅ丛棱

ＡＭＡｒｂｕｓｃｕｌａｒＭｙｃｏｒｒｈｉｚａｅ

丛彼藩穰

ＡＭＦＡｒｂｕｓｃｕｌａｒＭｙｃｏｒｒｈｉｚａｌＦｕｎｇｉ

丛技莹投真嫠

ＡＬＳＡｒｂｕｓｃｕｌｅ，ｌｉｋｅＳｔｒｕｃｕｒｅ（ｓ）

丛棱状缩构

ＢＡＳＢｒａｃｈｅｄ

ＡｂｓｏｒｂｉｎｇＳｔｒｕｔｕｒｅ（ｓ１

分彼状暇牧结构

ＦＬＳＦａｎ．１ｉｋｅＳｔｒｕｔｕｒｅ（ｓ）

癞羧维橡

ＥＰｔｕｂｅ

Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆｔｕｂｅ

ＥＰ离心管

ＭＤ

Ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ

Ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｙ

菌根依赖性

ＣＰＤＳ

Ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔａｌｉｚｅｄ

ＰｅｔｒｉＤｉｓｈ

Ｓｙｓｔｃｍ

分童培养系统

ＦＳＳＷ

Ｆｉｓｈ．Ｓｑｕａｍａ－Ｓｈａｐｅｄ，Ｗｏｕｎｄｅｄ

鱼鳞竣翊伤

ＭＴ

ＭｕｍｓｈｉｎｇｅａｎｄＴｕｃｈｅｒ（１９６９）

ＭＴ基本培莽基

ＹＭＢ

Ｈｏｏｙｌｍａｓ（１９７７）

ＹＭＢ基本培养基

ＭＳ

ＭｕｒａｓｈｉｇｅａｎｄＳｋｏｏｇｅ（１９６２）

ＭＳ基本培养基

ＣｅｆＣｅｆｏｔａｘｉｍｅ头稳禧黎

戳ｆ

Ｒｉｆａｍｙｃｉｎ

剥横霉豢

ＯＳＤＭＯｎｅ

Ｓｔｅｐ

ＤｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎＭｅｔｈｏｄ一步消毒法

ＴＳＤＭＴｗｏ

Ｓｔｅｐｓ

ＤｉｓｉｎｆｅｃｔｉＯｎＭｅｔｈｏｄ＝步消毒法

矗ｉ耋Ｔｒｉｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｔ

ａｍｉｎｏｍｅｔｈｍｅ

三羟甲蕊氯基零烧

ＩＭ＋ｌＯｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ·ＨＣｌ十ｌ％ＳｕｃｒｏｓｅＩ培养熬

十０，８％Ａｇａｒ

Ｉｌｌ／ｌＯＭＳ＋１０ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ·ＨＣＩ＋ｔＩ培养豢

１％Ｓｕｃｒｏｓｅ÷Ｏ，８％Ａｇａｒ

ＨＩＭ＋ｌ％Ｓｕｃｒｏｓｅ＋Ｏ．８％Ａｇ鲥

ＩＩＩ培养基

１Ｖ１／１０ＭＳ＋１％Ｓｕｃｒｏｓｅ＋Ｏ．８％Ａｇａｒ

ＩＶ培养慕

前言

１问题的提出

柑橘是一种重要的经济果树，也是最重要的国际贸易商品之一，柑橘的生产和

出口是许多国家的重要收入来源；同时也是价格低廉的维生素来源。柑橘可以被丛

枝萤根真菌（曲ｕｓｃｌｌｌａｒｍｙ∞ｍｄｚａｌ

ｆｕｎｇｉ，ＡＭＦ）侵染，形成互惠共生体——丛枝菌根

（ａｒｂｕｓｅｕｌａｒｍｙｅｏｒｒｈｉｚａ，ＡＭ）（何天富，１９９９）。ＡＭ的形成可以极大地改善柑橘的

营养状况（李晓林和冯圄，２００１），明显地增强柑橘的抗逆境能力，缺乏这样的ＡＭ

柑橘不能正常生长。

目前ＡＭ在槽橘生产中的应用还处于初级阶段（黄勤和唐振尧，１９９４），ＡＭＦ

作为一种“生物肥料”的应用潜力很大（Ａｚｃ６ｎ－Ａｇｕｉｌａｒ

ａｎｄＢａｒｅａ，１９９７），在柑橘生

产上可以实现：提高柑橘园的磷肥利用率，减少磷肥施用量；有益于柑橘的营养而

提高植株的适应能力；柑橘育苗中快速容器育苗的应用；显著提高若干衡量柑橘果

实品质的指标值（姚青等，１９９９），使晶质得到提高。因此开展ＡＭ对柑橘的抗性生

理及其在柑橘育苗上的应用研究（李银瞽，１９９３）、柑橘菌根真菌的基础研究、柑橘

菌根与环境的相关研究、柑橘菌根资源的调查以及菌根真菌资源库的建立、菌根制

荆的开发生产及接种技术（毕国昌等，１９９０；沈延厚和万水林，ｔ９９４）等势在必行。

尽管ＡＭＦ的应用潜力很大，但是ＡＭＦ的专性活体营养（ｏｂｌｉｇａｔｅｂｉｏｌｒｏｐｈｙ）

的生物学特性极大地限制了菌剂的大规模生产，菌剂的生产成本相应地也屠高不下，

因此它在包括柑橘生产在内的农林生产中的应用难以推行（李晓林和冯固，２００１）。

为了从根本上解决闽题，研究者开展了针对ＡＭＦ脱离宿主植物的离体培养的研究，

但是都以失败告终（Ｗｉｌｌｉａｎｓ、１９９２）。这要归咎予研究者并末真正了解ＡＭＦ和宿主

植物二者之间非常和谐的共生关系。目前最可能的缘由系（Ｇａｄｋａｒｅｔａ１．，２００１）：专

性活体营养的ＡＭＦ在和宿主植物的共生关系的长期进化过程中，逐渐地失去了一

部分固定碳素的能力，或者是失去一部分支持自身的遗传机制，进化成为完全依赖

予宿主植物供给碳索营养的现状。目前这个假说还缺乏足够的证据。

到目前为止，生产和科研中所用的菌剂多是采用温室条件下固体基质培养系统

（ｓｏｉｌ＿ｂａｓｅｄｃｕｌｔｕｒｅｓｙｓｔｅｍ）、液体培养系统（ｈｙｄｒｏｐｏｎｉｃｃｕｌｔｕｒｅｓｙｓｔｅｒｍ）、气雾栽培生

产系统（ａｅｒｏｐｏｍｃｃｕｌｔｒｕｅｓｙｓｔｅｒｍ）（Ｊａｒｓｔｆｅｒａｎｄ

Ｓｙｌｖｉａ，１９９５），英国洛桑试验站开发了

营养薄膜技术（ｎｕｔｒｉｅｎｔｆｉｌｍｔｅｃｈｎｉｑｕｅ），但是并不适用于进一步的深入研究；后来

发展的离体根与ＡＭＦ共培养系统（李晓林和冯固，２００ｔ），尤其是发根农杆菌

（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ）转化胡萝ｂ的毛状根与ＡＩＱＦ双重培养系统的成功建立

及其衍生系统（有时也称釉质粒转化的毛状根），为深入开展ＡＭＦ的离体研究提供

了良好的技术平台。

虽然ＡＭＦ对宿主植物没有严格的选择性，但是还是有一定范围限制；另夕｝建

立双重培养系统的组合双方所需的营养条件不同，因此目前所建立的宿主植物离体

根系与ＡＭＦ的双重培养系统组合数目及种类还不是太多（Ｆｏｒｔｉｎｅｔａ１．，２００２）。

虽然多数研究者以胡萝ｈ毛状根为宿主植物根系研究丛枝菌根（Ｆｏｒｔｉｎｅｔ

ａ１．，

２００２），但是考虑到研究内容的特殊性，一部分研究者选择其它植物的实生苗根系或

者发根农杆菌诱导的毛状根从事相关领域的研究（Ｂｏｉｓｓｏｎ．Ｄｅｍｉｅｒｅｔａ１．，２００１）。

目前在所能收集到的信息和资料的范围内还未见有关以柑橘实生苗根系或者毛

状根与ＡＭＦ建立双重培养系统的报道。柑橘的遗传转化多选用根癌农杆菌（Ａ

ｒｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）转化目标材料（黄家权，２００５），鲜有以发根农杆菌做为转化柑橘的工

具（李名扬等，１９９６；Ｐ打ｅｚ—Ｍｏｌｐｈｅ．ＢａｌｃｈａｎｄＯｃｈｏａ．Ａｌｅ｛ｏ，１９９８）。相对完善４．

ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ转化技术体系和柑橘组织培养技术体系的有机结合无疑可以为开展的本

课题研究提供值得借鉴的方法和经验（王占斌等，２００２；王子成和邓秀新，２００２；

Ｇｉｕｓｅｐｐｉｎａ

ｅｔａ１．，２０００）以及相关的技术支持。本研究尝试利用发根农杆菌转化柑橘

获得毛状根，并且以毛状根和丛枝菌根真菌建立双重培养系统，为柑橘菌根离体研

究做一些前期性的工作。

２发根农杆菌介导遗传转化的研究进展

２．１发根农杆菌转化植物的研究现状

自Ａｃｋｅｒｍａｎｎ于１９７３年获得第一个发根农杆菌转化的高等植物——烟草植株

以来（转引Ｔｅｐｆｅｒ，１９９０），之后的２０多年内（尤其是８０年代以后）发根农杆菌遗

传转化取得长足发展。至Ｕ２０００年为止，全世界得到的毛状根的植物已经多达２００余种

（Ｇｉｒｉ

ａｎｄＮａｒａｓｕ，２０００）。虽然种类众多，但是继续诱导成植株的却很少。尽管如

此，发根农杆菌在植物转基因方面，尤其是以毛状根工厂化生产药用的次生代谢物

质方面显示出巨大优势。

２１１发根农杆菌介导遗传转化的机理

发根农杆菌属于农杆菌属，革兰氏阴性菌。主要生长在被多种植物生长过的土

壤中。发根农杆菌可以侵染几乎所有的双子叶植物和裸子植物，而对单子叶植物侵

染能力较差。发根农杆菌中的融质粒可以作为基因转移的载体。目前其结构和转移

的机理已经研究的较为清楚。其结构主要分为五个区（周达锋等，１９９３）：（１）Ｔ—ＤＮＡ

区（Ｔｒａｎｓｆｅｒ—ＤＮＡ

ｒｅｇｉｏｎ）：是侵染后从Ｒｊ质粒转移到植物细胞中的一段ＤＮＡ；（２）

Ｖｉｒ区（Ｖｉｒｕｌｅｎｃｅｒｅｇｉｏｎ）：包含激活Ｔ．ＤＮＡ转移的基因，因而也称为致毒区；（３）

Ｃｏｎ区（Ｒｅｇｉｏｎｅｎｃｏｄｉｎｇｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ）：调控ｍ质粒在农杆菌之间的转移，也称为结合

编码区；（４）Ｏｒｉ区（Ｏｒｉｇｉｎｏｆｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ）：主要功能为调控ｍ质粒的自我复制：（５）

冠瘿碱合成功能区（Ｏｐｉｎｅｓｙｎｔｈｅｓｉｓｒｅｇｉｏｎ）。根据合成冠瘿碱的不同，可将已知的

７

砌质粒主要分为农杆碱（ａｇｒｏｐｉｎｅ）型、甘露碱（ｍａｒｍｏｐｉｎｅ）型、黄瓜碱（ｃｕｃｕｍｏｐｉｎｅ）

型三大类（周达锋等，１９９３）。

ＴＬ－ＤＮＡ和ＴＲ－ＤＮＡ两区之间是大约１５ｋｂ的非转移ＤＮＡ。ＴＬ．ＤＮＡ上存在与

根的形态发生及再生植株某些形态特征有关的基因群ｒｏｌＡＢＣＤ，其中ｒｏｌＢ基因最为

重要。ＴＲ－ＤＮＡ上带有编码农杆碱合成酶基因（ａｇｓ）和生长素合成酶基因（ｔｍｓｌａｎｄ

ｔｍｓ２），后者指导ＩＡＡ的合成，因此转化产生的毛状根是激素自养型的。在转化过

程中，ＴＬ．ＤＮＡ的长度具有较高的稳定性，而ＴＲ－ＤＮＡ则可以缺失或在一定范围内

变动。单独的ＴＬ．ＤＮＡ也可以转化植物产生毛状根，但是表现出对生长素的依赖性。

ＴＬ．ＤＮＡ和ＴＲ．ＤＮＡ共同作用时，转化能力大大提高，这表明两者在转化时具有协

同作用。甘露碱型和黄瓜碱型质粒的Ｔ－ＤＮＡ是连续的，其上不含生长索合成基因，

与农杆碱型Ｒｊ质粒的ＴＲ．ＤＮＡ没有明显的同源性，但与ＴＬ．ＤＮＡ具有高度同源的

片断。３种Ⅺ质粒两端各有一段与Ｔｉ质粒Ｔ－ＤＮＡ左右边界序列高度同源的２５ｂｐ

重复序列，是切割Ｔ－ＤＮＡ时的特异性酶切位点。３种类型硒质粒的Ｖｉｒ区具有很高

的保守性，并与ｎ质粒的Ｖｉｒ区同源。Ｖｉｒ区基因在转化过程中并不发生转移，但

它对Ｔ－ＤＮＡ的转移起着极其重要的作用。在通常情况下，Ｖｉｒ区的７个操纵予ＶｉｒＡ．

Ｇ中，除ⅥｒＡ属于组成型表达外，其余６个都处于被抑止状态（梁机等，２００２；王

关林和方宏筠，２００２）。

当发根农杆菌侵染时，植物伤口产生的低分子酚类化合物（乙酰丁香酮、羟基乙酰

丁香酮等）能以ⅥｒＡ的表达产物为媒介激活其它Ｖ＇ｔｒＡ基因联合群，表达产生一系列限

制性核酸内切酶。酶切产生的Ｔ＿ＤＮＡ链在细胞核定位信号的引导下穿过农杆菌细胞

膜上的特定孔道，进入宿主植物细胞核，进而整合到植物基因组中。单子叶植物不

易被砌质粒感染可能正是因为其细胞缺乏合成特异小分子酚类化合物的能力。

２２．２影响农杆菌介导遗传转化的因子

在发根农杆菌介导的遗传转化过程中，包括农杆菌菌株、外植体的种类和生理

状态以及整个操作过程中的环境和物化条件都会对最终的转化效率产生影响。其中

较为主要的为以下几个方面：

２．２．２．１菌株类型

在遗传转化中常用的菌株有很多种，分别属于三种主要的不同类型，即：农杆

碱型、甘露碱型和黄瓜碱型。其中农杆碱型较为常用，代表菌株有Ａ４、１８５５、１５８３４、

ＨＲＩ、ＴＲｌ０５；甘露碱型中代表菌株是８１９６、ＴＲｌ０７、ＮＣＰＰＢ：黄瓜碱型中代表菌株

为ＮＣＰＰＢ、２６５９、２３５７（王关林和方宏筠，２００２）。

由于发根农杆菌菌株的侵染能力在应用于不同类型植株时也有很大的差异，因

而不同的作物种类在实际的操作过程中其实存在着最合适或最为敏感的发根农杆菌

菌株（Ｐｅｔｉｔ

ｅｔａｔ．，１９８３）。因此，在遗传转化的实验当中，选择两者的合理搭配是很

霾要豹。这种缀合将直接影编最终转纯成败朔转化率的高低。

２２．２．２≯｝植体的种类和生溪状态

在苏往的邀传转亿实验中，愈伤组织、予叶、叶子（施和平等，２００３）、窠生

越上题辘、原生震侮、秘予、腿牧体戳及残笨态抟茎段等不同类型的终捧俸都曾经

被作为外檬体加以威用（壬莉等，２００２）。选择倪种材料对于每一种植物糖类来说

都具有其囱身的特点和优势，而作为高效转化体系的外植体的选择则必须考虑以下

几个方面：高效稳寇的再生畿力；较高的遗传稳定性；稳定的外植体来源；对农杆

麓侵染爰寂懿敏感蠖（王芙转和方宏篱，２００２）。

因此在考虑以上的几神因素的同时，必须根撼材料本身黔特点对典所特毒的相

关因素进彳亍合理的优化组合，才能得到令人满意的效果。

２．２．２．３操作程序的优化

在遗传转化实验中，操作程序是否合理也会对转化产生影响。建立一套优化的

操作程序就显得很重要。

２．２发襁农杆菌转化植物的藏用

与常规组织培养材料相比较，绝状撤具有生长迅速、激素自弊、生长条件简单、

次生物痿禽垂裔置稔定激及分亿覆霾离、不荔变舞等特点，踅夕｝滏可敲毛状校培养

物中罨找凝鲍饯会物，成为良好款生甥反应嚣（黪士云毅侯豢生，１９９３；Ｎｕｓｓｂｂａｕｍｅｒ

吼ａ１．，１９９８）。另外还可以利用砸质粒促进生根（ＤｅｖｉａｎｄＲａｎｉ，２００２）、增强抗逆性、

提高千＃物产量等（Ｓ打ｏｂｅｌｃｔａｌ．，１９８８），以及在基因工程中做为载体携带外源基因。

笔狡根还可敬作为宿主／寄主植镪替代赭被糟于士壤微生物研究（Ｍｉｔｋｏｗｓｋｉａｎｄ

Ａｂａｗｉ，２００２）。

３（丛枝）菌摄的研究现状

胬摄磷究瓢１６０多年滋前开始，籁阀是波折怒茯，辩至今日已经在全球范阐内

弓ｌ起广泛域关注。爨翦磺究领域广泛蛙秘学科阗懿媚蔓渗透性，馒季导毽摄辑究已残

为多学科渗透的综合性边缘生物科学（弓明钦等，１９９７）。

３．１菌根的类型

菌根魑±壤真菌和植物根系形成的曩惠共生体。菌根关系不仅仅是±壤真麓和

植物之间的关系，土壤因子也是不可或缺的～方。根据菌根形态学和解剖学特征的

差异，学者们将菌缀分为下述４太获（弓晴饮等，１９９７），即：外生翁根

（Ｅｃｔｏ．ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａ）、内生蕊程（Ｅｎｄｏ－ｍｙｅｏｒｒｈｉｚａ）、内外垒菌裰（Ｅｃｔｏｅｎｄｏ－ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａ）

擘

和其它菌根（包括混合菌根（Ｄｕａｌ—ｍｙｅｏｒｒｈｉｚａ）、假菌根（Ｐｓｅｕｄｏ—ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａ）、外围

菌根（Ｐｅｒｉｔｒｏｐｈｉｃ．ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａ）等（弓明钦等，１９９７）。

内生菌根又可分为丛枝菌根（Ａｒｂｕｓｃｕｌａｒ

Ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａ，ＡＭ）、杜鹃类菌根

（Ｅｒｉｃａｃｅｏｕｓ

Ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａ）和兰科菌根（ＯｒｃｈｉｄａｃｅｏｕｓＭｙｃｏｒｒｈｉｚａ）。其中，丛枝菌根是

目前研究的热点（Ｈａｒｒｉｓｏｎ，１９９９）。丛枝菌根的主要特征结构有：泡囊（Ｖｅｓｉｃｌｅ）、

丛枝（Ａｒｂｕｓｃｕｌｅ）、内生菌丝（Ｉｎｔｅｒｎａｌｈｙｐｈａｅ）、外生菌丝（Ｅｘｔｅｒｎａｌｈｙｐｈａｅ）、孢子

和／或孢予果（Ｓｐｏｒｅａｎｄ／ｏｒｓｐｏｒｅｅａｒｐ），以及宿主根系（李晓林和冯固，２００１）。

３．２丛枝菌根研究进展

丛枝菌根形成年代久远（Ｔａｙｌｏｒｅｔａ１．，１９９５），愈来愈多的证据显示（丛枝）

茵根真菌对首批登陆的陆生植物的生存和进化起到积极作用（Ｔｒａｐｅ，１９８７，转引自

Ｂｌｅｅａｎｄ

Ａｎｄｅｒｓｏｎ，１９９８），共生双方协同进化直到今天（Ｇａｄｋａｒｅｔａｌ，，２００１），但

是，约１０％的植物在进化过程中失去了丛枝菌根共生功能（Ｔｅｓｔｅｒｅｔａ１．，１９８７）。关

于丛枝菌根互惠共生双方之间的相互影响和作用的研究已经取得令人瞩目的进展

（ＫｏｉｄｅａｎｄＭｏｓｓｅ，２００４）。

３．２．１丛枝菌根与植物营养

业已证实，ＡＭＦ能够以多种方式或者途径影响植物的诸多代谢过程，它们对植

物的进化与分布、生长与发育、营养状况、水分的吸收与利用、抗逆境能力，以及

产量和品质等方面都具有重要的影响（李晓林和冯固，２００１）。鉴于磷、氮和碳对植

物的重要性，相关的温室试验和田间试验，结合基于双重培养系统的试验开展的较

多，所以本文对丛枝菌根与磷、氮和碳方面的研究进展做一些总结。

３，２．１．１丛枝菌根与植物磷素营养

磷素是植物生长发育的必需元素之一。农业生产中人们一直寻求某些行之有效

的方法和措施，以减少土壤对磷素固定，提高植物吸收利用磷素能力。丛枝菌根可

以直接地或者间接地促进植物对磷素的吸收（Ｋｏｔｈａｒｉｅｔａ１．．１９９０ａ）。这在很大程度

上是外延的ＡＭ菌丝能够吸收根系缺磷区以外的磷素，并将之转运到植物根系

（＇ＳｍｉｔｈａｎｄＧｉａｎｉｎａｚｚｉ．Ｐｅａｒｓｏｎ，１９８８）。研究报告指出可溶性磷素浓度过高会引起

ＡＭＦ侵染率降低，这种降低作用可能缘于磷素对外生菌丝的生长和扩展的直接抑制

作用（Ｎａｇａｈａｓｈｉｅｔａ１．，１９９６），或者是内生菌丝的侵染的改变所导致的间接抑制作用

（Ｎａｇａｈａｓｈｉｅｔ

ａ１．，１９９６；Ａｚｃ６ｎ

ｅｔａ１．，２００３），还可能是宿主植物在高磷条件下根细胞

膜透性不及低磷条件下根细胞膜透性，细胞分泌物或细胞渗漏物减少，使得支持侵

染前ＡＭＦ孢子萌发或侵染后菌丝继续生长的物质大量减少所致（Ｇｒａｈａｍｅｔａ１．，

１９８１）。然而，当土壤中可溶性磷素浓度很低时，适度地增加磷素则可以起到正相作

用（Ｖａｌｅｎｔｉｎｅｌｅｔａ１．，２００１；Ａｚｃ６ｎｅｔａ１．，２００３），其内在生理机制不明。

ｎ

丛枝（ａｒｂｕｓｃｕｌｅ，Ａ）是ＡＭＦ和宿主植物形成的超级有机组织，它被认为是ＡＭ

共生双方营养物质交换的位置（Ｈａｒｒｉｓｏｎ，１９９９），近几年在植物中陆续发现的定位在Ａ周围的磷素转运子（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ脚。舾）及其基因表达情况也证实了这一点

（Ｈａｒｒｉｓｏｎｅｔａ１．，２００２）。Ｈａｒｒｉｓｏｎａｎｄｖ蛆Ｂｕｕｒｅｎ（１９９５）首先从Ｇｌｏｍｕｓｖｅｒｓ帕ｒｍｅ

的外生菌丝中克隆到磷素转运子的基因，其表达受环境中磷素影响。随后又克隆到

碱性磷酸酶基因ＧｉＡＬＰ（Ｇｌｏｍｕｓ

ｉｎｔｒａｒａｄｉｃｅｓ）和ＧｍＡＬＰ（Ｇｉｇａｓｐｏｒａｍａｒｇａｒｉｔａ）（Ａｏｎｏ

ｃｔａ１．，２００４），ＧｉＡ凹和ＧｍＡＬＰ都在内生菌丝中表达，都系组成型表达，对外界环境

中磷索变化没有响应，这暗示了ＧｉＡＬＰ和ＧｍＡＬＰ系在Ａ处参予磷索的交换，而非从

环境中吸收磷素。

磷素在宿主植物体内的运输研究得比较透彻，相比而言，关于磷素在心压Ｆ体内

如何运输的研究明显不足。现在的共识系：磷素，特指正磷酸（ｏａｈｃ－ｐｈｏｓｐｈａｔｅ，Ｐｉ），

被外生菌丝质膜上磷素转运子负责运输到菌丝内部（ＨａｒｒｉｓｏｎａｎｄｖａｉｌＢｕｕｒｅｎ，１９９５；

Ｍａｌｄｏｎａｄｏ．Ｍｅｎｄｏｚａｅｔａ１．，２００１），该过程需要Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅｓ提供能量协助完成（Ｆｅｒｒｏｌ

ｅｔａ１．，２０００）；Ｐｉ进入菌丝后，可能被运输Ｎｄ，泡（ｖａｃｕｏｌｅ）中，并且被浓缩成多聚

磷酸（ｐｏｌｙｐｈｏｓｐｈａｔｅ，ｐｏｌｙＰ），这些含磷底物（包括ｐｏｌｙｐ）被一个移动管状小泡系统

（ｍｏｔｉｌｅｔｕｂｕｌａｒｖａｃｕｏｌａｒｓｙｓｔｅｍ）转运到内生菌丝中（Ｕｅｔａｋｅｅｔａｉ．，２００２）；当ｐｏｌｙＰ

被转运到丛枝界面时，就会被重新水解成Ｐｉ，通过ＡＭ共生双方的磷素转运子转运到

宿主植物根系细胞内，该过程同样需要口．ＡＴＰａｓｅｓ提供能量协助完成（Ｒｏｓｅｗａｍｅｅｔ

ａ１．，１９９９；Ｆｅｒｒｏｌｅｔａ１．，２０００；Ｇｉａｎｉｎａｚｚｉ－Ｐｅａｒｓｏｎ

ｅｔ

ａ１．，２０００；Ｈａｒｒｉｓｏｎ

ｅｔａ１．，２００２）。珠状

巨孢囊霉的Ａ中Ｐｉ的溢出和ｐｏｌｙＰ的减少同步发生（ＳｏｌａｉｍａｎａｎｄＳａｉｍ，２００１），葡萄

糖的存在可以促进该过程的进行，这表ＮｐｏｌｙＶ在共生双方的碳——磷交换过程中扮

演重要角色。

３．２．１．２丛枝菌根与植物氮素营养

与ＡＭ和磷素营养的研究相比，ＡＭ和氮索营养关系的研究较为滞后。ＡＭ的

外生菌丝可以从土壤中吸收氮索转运给宿主植物根系，氮素吸收量虽远不及磷素的

吸收量，却是很可观的（Ｊｏｈａｎｓｅｎｅｔａ１．，１９９２）。外生菌丝可以从土壤中吸收多种形

式的氮素营养，铵态氮的吸收机制阐述的较为清楚，而硝态氮（ＮＯｒ－Ｎ）和氨基酸

等有机氮的吸收机制也有一定的了解（Ｊｏｈａｎｓｅｎ

ｅｔａｌ．，１９９２，１９９４ａ，１９９４ｂ；Ｆｒｅｙ

ｅｔａ１．，

１９９３；Ｈａｗｋｉｎｓ

ｅｔａ１．，２０００）。一旦氮素进入菌丝后，就可能会优先被吸收同化满足

ＡＭＦ自身需求，然后再转运给宿主植物。Ａｓｐ、Ａｒｇ、Ｇｉｎ和Ｇｌｕ在ＡＭ外生菌丝中

的丰度最高（Ｂａｇｏｅｔ

ａ１．，１９９６；Ｊｏｈａｎｓｅｎ

ｅｔａ１．，１９９６ａ），这暗示了它们可能是ＡＭ向

宿主植物转送氮素的主要形式。

将无机氮吸收同化成为氨基酸是绝大多数土壤微生物体内一个关键的生化代谢

途径。铵态氮（或硝态氮还原得到的铵态氮）可以选择ＮＡＤＰ．ＧＤＨ代谢途径，或

选择ＧＳ．ＧＯＧＡＴ代谢途径进行代谢。谷氨酰胺合成酶（ＧＳ）被认为是ＡＭＦ菌丝中

氮素同化途径中的主要酶（Ｍａｇｄａｌｅｎｅ

ｅｔａｌ．．２００４）。在此之后，除了分离并且确证

硝酸还原酶之外（Ｋａｌｄｏｒｆｅｔａ１．，１９９８），再也没有该同化途径中的其它酶蛋白或基

因的相关报道。Ｍａｇｄａｌｅｎｅｅｔａ１．（２００４）分离得到编码ＧＳ的ｃＤＮＡ，即：ＧｍＧｍＩ

（Ｇｌｏｍｕｓｍｏｓｓｅａｅ）和ＧｉＧｌｎｌ（Ｇｌｏｍｕｓｉｎｔｒａｒａｄｉｃｅｓ）。二者在ＡＭＦ生活周期中都

是组成性表达，ｍＲＮＡ水平不受外源氮素的影响：Ｇ．ｉｎｔｒａｒａｄｉｃｅｓ外生菌丝中的ＧＳ

酶活性却对外源氮素反应强烈。这表明ＧＳ在转录后水平上发生调控；也暗示了ＧＳ

酶活性可能也和植物中的ＧＳ酶活性一样被磷酸化所调节。ＡＭ菌丝可能是在转运子

，透性酶（ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓ／ｐｅｒｍｅａｓｅｓ）和ＡＴＰａｓｅ￥的参予下吸收不同形式的氮素（Ｒｅｑｕｅｎａ

ｅｔａ１．，２００３；Ｍａｇｄａｌｅｎｅｅｔａ１．，２００４）。

虽然有证据表明ＡＩｖｌＦ存在ＧＯＧＡＴ途径（Ｃｌｉｑｕｅｔａｎｄ

Ｓｔｅｗａｒｔ，１９９３；Ｍａｇｄａｌｅｎｅｅｔ

ａ１．，２００４），但是ＮＡＤＰ．ＧＤＨ途径也不能被排除在外（ＣｌｉｑｕｅｔａｎｄＳｔｅｗａｒｔ，１９９３）。

３．２．１．３丛枝菌根与植物碳素营养

ＡＭＦ帮助宿主植物吸收矿质营养和水分，反过来，宿主植物为ＡＭＦ提供所需的

碳源。研究者们对ＡＭ中宿主植物所需要付出的碳源代价做了评估，普遍认为宿主植

物需要为越ｖＩＦ提供光合同化物的４％－２０％（Ｓｍｉｔｈ

ａｎｄ

Ｒｅａｄ，１９９７）。光合同化作用以

及随后的对根部的碳分配与ＡＭＦ在宿主植物根系内的发育程度密切相关，具体关系

因宿主植物和ＡＭＦ组合不同而变的十分复杂（Ｔａｙｌｏｒｅｔａｌ．，２０００；Ｌｅｒａｔｅｔａ１．，２００３）。

Ｓｃｕｔｅｌｌｏｓｐｏｒａｃａｌｏｓｐｏｒａ或Ｇ．ａｓｃｉｃｕｌａｔｕｍ对三叶草根部的侵染程度与三叶草向根系中

分配的碳的量呈现正相关性（Ｔｈｏｍｓｏｎｅｔａ１．，１９９０）；接种摩西球囊霉的大豆在黑暗

中生长却不能够被侵染（Ｖｉｅｒｈｅｉｌｉｇｅｔａ１．。２００２）；菌根化的三叶草光合同化作用的

增强并不能增加它的生长量，这可能是碳索被输送到Ａ＾仃这个碳库内的缘故（Ｗｒｉｇｈｔ

ｅｔａ１．．１９９８ｂ）。

碳与磷的关系密切，碳在植物组织器官内的重新分配受到叶片内磷的浓度影响，

菌根化植物的营养状况会改变碳的收支状况（Ｗｒｉｇｈｔｅｔａ１．，１９９８ａ），影响宿主植物

的生长状况，因此，ＡＭＦ的多样性是决定植物多样性的因子之一（ｖａｎｄｅｒＨｅｉｊｄｅｎｅｔ

ａ１．：１９９８）

近几年来，关于怂仃能否通过菌丝网在宿主植物间传递碳的研究颇引人注目。

有证据显示碳可以通过菌丝网在同种植物不同个体之间，以及异种植物不同个体之

间传输（Ｐｆｅｆｆｅｒｅｔａ１．，２００４），得出该结论的基础系：以伺位素“Ｃ标记的碳源能够

从供体植物传递给ＡＭＦ，ＡＭＦ通过菌丝把碳输送到受体植物，因此在受体植物体内

检测到放射性：丛枝是超级的双向交换营养的有机组织（刘润进和李晓林，２０００）。

ＡＭ的历史有超过４亿年之久，这样的结论无疑对理解植物群落以及群落之间的竞争，

具有深远的意义（ｖａｎｄｅｒＨｅｉｊｄｅｎｅｔａｌ．，１９９８），对植物的进化具有潜在的重要性。

然而这样的结论却逐渐受到怀疑，疑点系：在受体植物内，尤其是菌根化的根

系内所检测到放射性是否称得上真正意义的营养转运，或者算是任何一种形式的物

质转移。提出质疑的证据系：即使在非常有利于促进地下部分（根）向地上部分（茎）

输送碳的条件下，受体植物内绝大部分，甚至全部的标记物依然保留在菌根化的根

系内而不向上输送，这就需要对试验结果做出谨慎的解释（Ｒｏｂｉｎｓｏｎａｎｄ

Ｆｉａｅｒ，

１９９９）。尽管有时可以在受体植物的地上部分检测到少量的放射性，但是把它与ＡＭＦ

输送碳相联系未免有些牵强附会（Ｆｉ＿ｔｔｅｒｅｔａ１．，１９９８），因为这种放射性可能是根内

的ＡＭＦ的呼吸作用所释放的Ｃ０２被糖回补反应或糖异生作用重新固定而引起的假

象。即使在受体植物地上部分检测到较多１４Ｃ的放射性（Ｐｆｅｆｆｅｒｅｔａ１．，２００４），也不

能过分夸大ＡＭＦ对宿主植物的营养贡献性（Ｆｉｔｔｅｒｅｔａ１．，１９９８；Ｐｆｅｆｆｅｒｅｔａ１．，２００４）。

以”Ｃ标记物证明了供体植物和受体植物之间确实有碳转移，但是被转移的碳依旧被

固定在ＡＭＦ内，用于其自身的消耗和贮藏，没有输送给受体植物（Ｆｉｔｔｅｒｅｔ

ａ１．，１９９８；

ＲｏｂｉｎｓｏｄａｎｄＦｉｔｔｅｒ，１９９９），Ｂａｇｏｅｔａ１．（１９９９，２０００，２００２，２００３）的工作也为这些质

疑提供了大量的新的证据。

无光合作用能力的寄生植物通过ＡＭＦ菌丝网与有光合作用能力的植物联系后

可以正常生长（Ｂｉｄａｒｔｏｎｄｏｅｔａ１．，２０００）；无光合作用的烟草突变体通过ＡＭＦ菌丝

网与有光合作用能力的野生型植株联系后同样能够正常生长（ＭＵｌｌｅｒ

ａｎｄ

Ｄｕｌｉｅｕ，

１９９８），这使得学者们又不能完全否定ＡＭＦ在宿主植物之间转移碳并且为受体植

物输送生长发育所需的碳的可能性。

３．２．２柑橘菌根研究概况

自Ｐｅｙｒｏｎｅ（１９２２）发现柑橘类植物存在菌根后，关于柑橘菌根的研究以及利弊

之争颇经一番波折。Ｇｅｒｄｅｍａｎｎ（１９６８，１９７２）和其它学者的理论和生产实践上的启

示才使得人们认识到菌根对柑橘的重要性。随后，柑橘菌根的研究才日益活跃，且

成果较丰（转引自黄勤和唐振尧，１９９４；Ｇｒａｈａｍ，２０００）。

柑橘接种ＡＭＦ后，其生长量和矿质营养水平几乎都有不同程度的提高（沈延厚

和万水林，１９９４；黄勤和唐振尧，１９９４；何天富，１９９９）。接种ＡＭＦ的植株即使在

水分胁迫下也能保持较高的生长量（低Ｐ条件），比不接种ＡＭＦ的植株能够更为有效

地降低体内的渗透调节物质的含量（吴强盛和夏仁学，２００４）。接种ＡＭＦ还能够改

变成年温州蜜柑的蒸腾作用和光合作用，提高果实蔗糖含量，增加果面色泽，改善

果实品质（尧青等，１９９７，１９９９；Ｙｏｇｅｓｈｅｔａ１．，１９９５，１９９６），值得注意的是，菌种

的选择非常重要（毕国昌等，１９９０；Ｙｏｇｅｓｈ

ｅｔ出．，１９９６）。温州蜜柑／枳（Ｓａｔｓｕｍａ

ｍａｎｄａｒｉｎ／ｔｒｉｆｏｌｉａｔｅ

ｏｒａｎｇｅ：Ｃｉｔｒｕｓｕｎｓｈｉｕ／Ｐｏｎｃｉｒｕｓ矿ｉｆｏｌｉａｔａ）接种ＡＭＦ后，其蒸腾作用

和光合作用加强（Ｙｏｇｅｓｈｅｔａ１．，１９９５），而枳上却没有观测到类似的促进作用（Ｇｒａｈａｍ

ａｎｄ

Ｓｙｖｅｒｔｓｅｎ，１

９８５），这就有必要对包括植株大小、生长速率、营养状况、柑橘基因

黧在内的诸多影响豳素迸彳予综含眈较分析才可能辙池含灌的解释（Ｇｒａｈａｍａｎｄ

Ｅｉｓｓｅｎｓｔａｔ，ｔ９９４）。

在糖橘茁躐她内先期矮瓣闻栽种瑚镶陂鞭畿离静革奉植物，会对随后的稽稀鹜承

翡垒长蠢霞避佟羯，《戮增翔产懑，授灭魄（ＰａｎｊａａｎｄＣｈａｕｄｈｕｒｉ，２００４）。ＡＭ壤赖性

杂草的发酵物的配合施用，效果Ｗ能会照佳（杨晓红，２０００）。

ＡＭＦ与瘘溅蘩羧期是令魄较蠢争议熬闲露，结聚鬻露毒ＡＭＦ、攫攘萋羹瘸覆蘩三

袭荧系以及环竣条彳串商关（Ｃｒｒａｈａｍ，２００１）。夜低磷条张下，甜橙（Ｃｉｔｒｕｓ觚聍ｇ挖蛳）

接种Ｇｌｏｍｕｓｆａｓｃｉｃｕｌａｔｕｓ可以增强由Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｔｏｒａｐａｒａｓｉｔｉｃａ｜起的根瘸瘸的耐往

（Ｄａｖｉｓａｎｄ

Ｍｅｎｇｅ，１９８０），鞭且生长媾况也魄对照好；在磁磷条件下，这种接种优

势帮会消失，体者捺溺为嚣穰啜收了更多矿质营养，觉其怒磷，方漓除戏者减辍了

ＰｐａｒａｓｉｔｉｃａＪ铖秘冠窖。蠢愈伤缀织诱导鬻成瓣“ｚ销ａｒａＢｉａｎｃａ”蘩橡（Ｃ．１ｉｍｏｎ）

砧木试管苗移栽时揍种ＡＭＦ（Ｑｕａｔｒｉｎｉｅｌａ１．，２００３），移栽后的前１８ｗ（ｗｅａｎｉｎｇｐｈａｓｅ）

葵戏漂率表繇誉稳定，作者诀蕊怒当建主蔫蘩耪串其它粪蘩凌，徽黛凌影嫡搿致；警

熄±蔫ＡＭＦ混会麓辨与摩嚣球囊霉（ＢＥＧＩｌ６）棚比没有驻示出优势，但是６９ｗ却鼹示

出明照的优势，６９ｗ）罾摩西球囊霉（ＢＥＧｌｌ６）液现严重的抑制效果。遽可能蔗“Ｚａｇａｒａ

Ｂｉａｎｅａ”莱攘为获褥营募薅慰出鹣碳代份过离掰致（Ｇｒａｈａｍ，２０００），此时摩西球樊

霉（ＢＥＧｌｌ６）已寝璐出一定稔度的寄生性。合适菌种的逡择，配合缀织培养技术，凭

疑会对稚稀产歉摇瓣结本尼擎竞念依赖释予豹传统垒产方法产生蠹大影确（Ｑｕａｔｒｉｎｉ

ｅｔａｌ．，２００３）。

ＡＭＦ侵染横裰嚣会成梵～个耨翡库，使褥党台声貔分酝孛燕京熬淳一潺平瓣蜀

瓣媳或整体地被褥破，走会产物褒被重教势鬣（Ｋｏｃｈａｎｄ

Ｊｏｈｎｓｏｎ，１９８ｔ；Ｙｏｇｅｓｈｅｔａｌ。，

１９９５），这样可能会使朋岬表现出抑制柑橘生长的性质（Ｑｕａｔｒｉｎｉｅｌａ１．，２００３）。荧国

攀孝怼（Ｇｒａｈａｍ或采，，１９８５，１９９１，１９９６，１９９７，１９９８；Ｊｉｆｏｎ嚣ｌ越．，２００２）对蒸基建鬻髑

的柑擒砧木的荫掇依赖性（ｍｙｅｏｒｒｈｉｚａｌｄｅｐｅｎｄｅｎｃｙ，ＭＤ），麓丝侵染率和侵染速率，

以及掇橘碚本的磺ｌ弋价受豢汔率（ｃａｒｂｏｎｃｏｓｔ／ｂｅｎｅｆｉＯ簿淘戆邂彳亍了簇为漾入的磷究：

黼ＭＤ砧木被馒染的速率快予低ＭＤ砧本被侵染的速率，但是，却以付出赢昂的碳为

焦价；在磷供庭充足黪条｛串下，酗本安身霹叛暇牧足够豹磷供应鸯鸯鬻袋，如鬃ＡＭＦ

继续与棂系茇惫联系，裂箕性袋投毒霹辘爨共生状态变为瓷生数态；碚本基霆爨楚

调节ＭＤ的重擞的因予之一，基因型上亲缘关系近的砧术对ＭＤ的调节也相似：农不

粼兹貘磷条｛拳灏／袋接耪苓强ＡＭ亨条｛争下，蚕强萋嚣裂豹融本（鸯攘穗，笼接穗）黠

想碳、贮藏碳、可溶蛀碳、还原糖、非逐瓢耱等的分凝情况有缀大不同，使砧术适

威ＡＭＦ的侵染；高磷高Ｃ０２条件下，虽然净光合速率增强，但是，离ＭＤ砧术和低

Ｍ潮珐术辛｝偿藏根冀慧呼吸所消糍碳的爨不同，翦者的生长越缓或受掷制程度高于后

砻，表明低ＭＤ砧术对碳代价可能具有更加严谨的调节能力。

始爨舍瑗魏翻掰穰橇懿掇，激爱是溪萄戳采嚣寅耱豹方法选裔在特定遗域祭｛串

１４

下对ＡＭＦ具有适宜的ＭＤ和严谨调节碳代价受蘸比率能力的砧木都需要进行更为广

泛两深入的调查和研究（Ｇｒａｈａｍ，２０００）。

３．３双重培养研究溉况及成用进曩

ＭｏｓｓｅａｎｄＨｅｐｐｅｒ（１９７５）首先报道番茄（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｕｍ

ｅｓｃｕｔｅｎｔｕｍ）离体根以

及红三时摹离体根分瓣与摩器璩囊簿建立双璧壤葵，但是麟谖球囊霉没餐产孢（转弓ｌ

富Ｆｏｒｔｉｎｅｔａｔ。，２００２）。培养基敬巍之后（Ａ氍ｌｌｅｒ－ＷｉｄｍａｎａｎｄＷａｔｒｕｄ，１９８４），番茄离

体根与珠状巨孢囊熊双重培养成功，并且珠状艇孢囊霉产孢。之后相关的报道逐渐

增多（Ｂ６ｅａｒｄａｎｄ

Ｆｏｒｔｉｎ，１９８８；Ｆｏｒｔｉｎ

ｅｔａＩ．，２００２）。

ＭｕｇｎｉｅｒａｎｄＭｏｓｓｅ（１９８７）簧次擐遂摩嚣塔囊霉爱絷勰萝ｔ－毛妖缀，逮撼熬是

没有产孢。首次有必ＡＭＦ能够慢染寄主植物搬系（Ｂ６ｅａｒｄａｎｄＦｏｒｔｉｎ，１９８８），而且

产孢的是Ｇｆｏｍ蚶ｉｎｔｒａｒａｄｉｃｅｓ与胡萝ｈ毛状搬的双重培养体系。此后，双重培养系

统不裁缝棱改进，傻茭适合不簿的酝究器要＜攀骁蘸秘冯鼷，２００１：Ｈａｒｒｉｓｏｎ，１９９５；

Ｍａｌｄｏｎａｄｏ－Ｍｅｎｄｏｚａｅｔａｌ。，２００ｌ，２００２；Ｆｏｎ过武采。，２００２），笼其是Ｓｔ－Ａｍａｕｄｅｔａｌ，

（１９９６）在前人研究基础之上推出的分室培养系统（ＣｏｍｐａｒｔｍｅｎｔａｌｉｚｅｄＰｅｔｒｉＤｉｓｈ

Ｓｙｓｔｅｍ，ＣＰＤＳ）更怒为深入研究ＡＭ提供了良好的技术平台。

蹙ｅＰＤＳ羞獭之上，结会麓餐素示踩羧零，虢及棱磁多荽振技零∞嫩釉，更趣

拓展了ＡＭ研究领域，使得ＡＭ的生理生化代谢机制，以及Ａ／ｖｌＦ和宿主植物共生

机制取得了很大的溅展（Ｐｆｅｆｆｅｒ暾ａ１．，１９９９，２００１；Ｂａｂｇｅｔ

ａ１．，２００２；Ｆｏｎｉｎ

ｃｔ

ａ１．，

２００２）。其主要成暴露：摄建蔻丝霹潋菲零离效避吸收甍蘩糖秘栗糖荠把它们转化为

碳承纯会物和中性§簿类；棼生藏缎不能设牧外源蔗糖参予代谢、贮存以及向宿主植

物传递；内生菌丝搬从宿主植物吸收的糖类转化为脂类后，再运送到外嫩菌丝（外

生菌丝几乎没有脂类合成能力）；与宿主植物捆魄，ＡＭＦ体内的己糖邋避戊糖磷酸

途径代落豹强度受大：｛≥共生狳羧，（葫发）獠子氇能啜救稻翻薅蘩饕糖秘暴糖（不

吸收甘褥糖），可以裔效地暗固定Ｃ０２（ｄａｒｋｆｉｘａｔｉｏｎｏｆＣ０２），还可以合成Ａｒｇ及其

它氨綦酸；菌丝具谢双向转运碳水化合物的功能，但是以内生菌丝向外嫩菌丝转运

是圭，转运过程霹默羧磷调节。投擐已经竟隆别瓣若干令代溅步骤中楣美薅戆基因，

以及主隳的同位素研究结果，还肖前人大量的研究结果，ＢａｂｇＣｔａｌ（１９９９）推铡ＡＭＦ

体内可能也存在乙麟酸循环、三羧酸循环、糖原异生作用、磷酸戊糖途裰以及尿素

循环，健是，是否豢延存在上述骄寄途径还嚣骚进一步确避，每个途经的特点，以

及与箕玄生物体穗叛途径春帮差籀您稃需要深入研究。

孢子产量一直怒令人关注的问题，ＣＰＤＳ可以用来生产包括孢子在内的无菌接

种体。最然有学者尝试利用悬空嫩物反应嚣（ＡｉｒｌｉｆｔＢｉｏｒｅａｃｔｏｒ）生产无蘸接种体

（ＪｏｌｉｃｏｅｕｒｅｔａＩ。，１９９９），产量零不及ＣＰＤＳ，瓣基搡终溷蕊，毽是，这为王潼纯大麓

模生产接种体开辟了一条新途径。通过问隔性地收获、凝胶替换和连续供应葡萄糖

等措施（Ｄｏｕｄｓ，２００２），ＣＰＤＳ中孢子产量可达约２００００个，还通过数学模型确定了

ＣＰＤＳ中适宜的接种体收获期（Ｄｅｅｌｅｒｅｋｅｔａｌ．，２００１）。目前利用双麓培养进行深入研

究的ＡＭＦ只有少数几个种，其主要服因就燕孢予产蠢过低。无菌孢子以及箕它形

式的接种体（超）低温贮藏技术的探索为菌剂的长期保存开启了一扇希望之门（Ａｄｄｙ

ｅｔ

ａ１．．１９９８；Ｄｅｅｌｅｒｅｋ

ａｎｄ

Ａｎｇｅｌｏ－ｖａｎＣｏｐｐｅｎｏｌｌｅ．２０００）。双重培养建立成功的ＡＭＦ

约有２０多种（资料收集日期截至剜２００５年，表Ｉ）。

虽然离体根和ＡＭＦ的双重墙养系统在诸多方面显示出磺显的优势，僵楚，至

少有一点嫒重要的是离体根不能代表蕤个宿主植物。培养盈内不少研究缩栗，尤其

是ＡＩＶＩＦ与其它病原菌相奠影响的研究鲭莱与田阊／温室的研究结柒不一致（Ｆｏｒｔｉｎｅｔ

ａ１．．２００２），甚至确互矛盾。舅拜。还有光合俸用、激素平衡、蔗糖浓度过高、共生

关系不明鞠等一系捌不足乏懿。尽管黯魏，逶过备稀播藏对箕进行改进至少可戮使

之在莱望方面更撩近鼍：实际情况（Ｍｉｌｌｅｒ－ＷｉｄｅｍａｎａｎｄＷａｔｒｕ，１９８４；Ｆｏ雌遮ｅ｛ａ１．，

２００２），从而爨好蟪进行ＡＭ共奎骄究。

表ｌ黻黧壤养建意纛凑鹃Ａ＿ＭＦ耱名

ＴａｂｌｅＩ

Ｓｐｅｃｉｅｓ

ｏｆＧｌｏｍａｌｅｓｃｕｌｔｉｖａｔｅｄｏｎｒｏｏｔ－ｏｒｇａｎ

ｃｕｌｔｕｒｅｓ

ＡｃａｕｌｏｓｐｏｒａｃｅａｅＧｉ．ｎｉｇｒａ

Ｇｅｔｕｎｉｃａｔｕｍ

Ａｃａｕｔｏｓｐｏｒａ

ｔａｅｖｉｓＧｉ．ｒｅｔｉｃｕｌａｔａＧｆａｓｃｉｃｕｌａｔｕｍ

Ａ．ｍｏＭｏｗａｅＧｌｏｍａｅｅａｅａｆａｒａｌｏｓｕｍ

Ａ．Ｍｈｍｉｉ

ＧｌｏｍⅡｓ

ａｇｇｒｅｇａｍｍ

Ｇｉｎｔｒａｒａｄｉｃｅｓ

Ｇｉｇａｓｐｏｒａｃｅａｅ

ＧｃａｔｅｄｏｎｉｕｍＧｔａｍｅｌｌｏｓｌｄ，ｎ

Ｇｉｇａｓｐｏｒａ

ａｌｂｉｄａＧｃｅｒｅｂｒｉｆｏｒｍｅＧｍａｃｒｏｃａｒｐｕｍ

ＧＬｇｉｇａｎｔｅａ

ＧｃｔａｒｕｍＧｍｏｓｓｅａｅ

Ｇｉ

ｍａｒｇａｒｉｔａ

Ｇｃｏｒ８ｔｎ＇ｃａｏｎＧｖｅｒｓｉｆｏｒｍ

Ｇｉ．ｒｏｓｅａＧｄｅｓｅｒｆｉｅｏｌａ

娃Ｍｎｕｏｓｕｍ”

Ｇｉ，ｃａｓｔａｎｅａ

Ｇｄｔａｐｈａｎｕｍ

Ｓｅｔｅｒｏｃｙｓｔｉｓ

ｓｉｎｕｏｓａ

１）：Ｂｉ醚ａｌ。，２００４其它资料雩ｌ皇Ｆｏｒｔｉｎ蛙ａｌ，，２００２

４本研究的豳的和内容

双重培养系统作为离体研究ＡＭ的平台日益显示出它的优越性和功能的强大

憔，而且可以作为试验用无菌孢子及其它形式的接种体生产的羹要补充形式。建立

邋宜于特定研究领域的双重培养系统已经成为ＡＭ研究领域一个颇具前景的方向。

菌根对柑橘的意义重大，开展柑橘菌根的研究势在必行。本研究尝试建立柑橘毛状

根与ＡＭＦ的双重培养系统，为柑橘菌根的离体研究做～些前期性的工作。具体研

１６

究内容主要有：

１．利用发根农杆麓转化柑橘，通过单兜隧增殖筛选，获樗柑橘毛状根克隆（转

化材料：枳和卡宁檬）。

２。对柑橘毛状根爽隆进程低营养培养熬生长试验，筛选念遁的培养基。

３。ＡＭＦ稳子在璐葵蓥上豹蘩发试验。

４．尝试建立稽稀壤状根和ＡＭＦ双鬟壤葬系统。

１７

材料与方法

１柑橘毛状根的获得

１．１柑橘材料的准备

从柠檬（ｃｆｔｒｕｓ

ｌｉｍｏｎ（Ｌ．）Ｂｍ－ｍ．）果实和枳（Ｐｏｎｃｉｒｕｓｔｒｉｆｏｌｉａｔａ（Ｌ．）Ｒａｆ．）果实

（华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室谭美莲赠送）中剥出饱满种子，自来

水漂洗。１％ＮａＯＨ溶液处理１５ｍｉｎ，自来水漂洗干净。种子在超净工作台上用７５％

的酒精处理３０ｓｅｃ，Ｏ．１％ＨｇＣｌ２（加２滴Ｔｗｅｅｎ一２０）中浸泡１０ｒａｉｎ，无菌水清洗４－５

遍，剥去种皮，播种在ＭＴ（ＭｕｒａｓｈｉｇｅａｎｄＴｕｃｋｅｒ，１９６９）＋４％蔗糖＋０．７％琼脂

（ｐＨ５．８．６．Ｏ）培养基中，在极弱的光照（１６／Ｓｈ，光／暗周期，光照度约为５岬ｏｌ／（ｍ２·ｓｅｃ））

条件下培养，培养温度为２５±２℃。枳幼苗生长４０ｄ，柠檬幼苗生长１５ｄ和１０５ｄ备

用。

１．２供试菌株的活化

发根农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ

ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ）为菌株Ａ４，携带ｍ质粒：一株为野生

型菌株，购自中国科学院南京土壤研究所，定名为Ａ４ｔ菌株，另一株为西北高原生

物研究所董相军惠赠（该菌株具有利福平抗性，其它遗传背景不详），定名为Ａ４ｄ

菌株。为方便起见，下文中如未加说明，发根农杆菌菌株均用Ａ４表示。

低温保存的发根农杆菌Ａ４ｄ菌株在ＹＭＢ（Ｈｏｏｙｋａａｓ，１９７７）上于２８＂Ｃ活化３￣４

代，培养基中含利福平（Ｒｉｆａｍｙｃｉｎ，Ｒｉｆ），终浓度为４０ｍｇ／Ｌ。挑取活化的Ａ４ｄ菌株

单菌落转移到５０ｍｌＹＭＢ液体培养基中，于２８＂Ｃ，１２０ｒ／ｒａｉｎ，黑暗旋转振荡培养约

３６ｈ，直至ＯＤ６００为０．９－１．０。之后，转入５０ｍＩＥＰ离心管（Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆｔｕｂｅ）于４０００

ｒ／ｍｉｎ离心５ｒａｉｎ（ＥｐｐｅｎｄｏｒｆＣｅｎｔｒｉｆｕｇｅ，５８１０Ｒ，Ｇｅｒｍａｎ），弃上清保留菌株沉淀。采

用ＭＳ（ＭｕｒａｓｈｉｇｅａｎｄＳｋｏｏｇｅ，１９６２）液体培养基等体积重新悬浮，加入乙酰丁香酮

（ａｃｅｔｏｓｙｒｉｎｇｏｎｅ，ＡＳ），终浓度为１００１．ｔｍｏｌ／Ｌ，振荡培养２ｈ（条件同上），即为工程

菌液。

Ａ４ｔ菌株的活化程序与Ａ４ｄ菌株基本相同，只是ＹＭＢ固体培养基无Ｒｉｆ。

１．３发根农杆菌转化柑橘材料

取枳半黄化苗的上胚轴，设为２个处理：①用解剖刀在其双面密集地做鱼鳞状

划伤（Ｆｉｓｈ．Ｓｑｕａｍａ－Ｓｈａｐｅｄ．Ｗｏｕｎｄｅｄ，ＦＳＳＷ）处理，切口为４５０，深至木质部，最后

切成长约ｌｃｍ的小段（图１Ａ）：②直接切成长约１ｃｍ的小段，不做鱼鳞状划伤处理。

对照材料用不含发根农杆菌的工程菌液处理。

将枳外植体浸入备好的Ａ４ｄ工程菌液中，浸泡３０ｒａｉｎ，期间振荡８～１０次。之后，

取出外植体，用无菌滤纸吸干工程菌液，转入ＭＳ＋０．７％琼脂（ｐＨ５．８－６．Ｏ）基本

ｌ毫

培养基中，于２０±１℃黑暗共培养３ｄ。

共培养后的外植体在无菌水中漂洗若干次，直至洗液变清为止，再用含４００

ｍｇ／Ｌ头孢霉素（Ｃｃｆｏｔａｘｉｍｅ，Ｃｃｆ，北京鼎国生物技术有限责任公司）的无菌水浸

泡２０ｍｉｎ（石玮，２００１），期间振荡５～６次，倾去洗液，取出外植体，用无菌滤纸吸

干水分，接种到含４００ｍｇ／ＬＣｅｆ的ＭＳ基本培养基上（水平放置）。将外植体置于黑

暗中培养，温度保持２５±２℃。

柠檬１５ｄ和１０５ｄ龄的半黄化苗上胚轴切割方法同上（图ＩＡ）：１５ｄ龄柠檬半黄

化苗子叶在双面也做鱼鳞状划伤处理，再纵向切割开（图ｌＢ－Ｉ，Ｂ．２）。采用Ａ４ｔ

工程菌液对柠檬外植体进行转化，其操作程序同枳外植体。以上试验每个处理４０块

外植体，每个处理重复３次。一丑瓣栅每锄口Ａ

Ｂ．１Ｂ．２

图１柑橘外植体傲鱼鳞状划伤处理示意图

Ｆｉｇ

１Ｓｃｈｅｍａｔｉｃｉｌｌｕｓｔｒａｔｉｏｎｓｏｆ

ｆｉｓｈ－ｓｑｕａｍａ－ｓｈａｐｅｄ－ｗｏｕｎｄｅｄ

ｔｒｅａｔｍｅｎｔＯｉｌｃｉｔｒｕｓ

ｅｘｐｌａｎｔｓ

１．４柑橘毛状根的诱导与发生

发根农杆菌感染外植体３ｗ后（自共培养结束之日算起），凡是能够在含４００

ｍｇ／Ｌ

Ｃｅｆ的ＭＳ培养基上生长的离体根均记为毛状根；随机选择２０块转化成功的

外植体，计数毛状根密度。统计公式如下（刘传飞等，２０００）：毛状根诱导率ｃ％，＝兰竺盖蔫赛铲×ｔ。。％

毛状根密度（条）＝乒墨再嘉蒜蠹‰

柑橘毛状根诱导出来后，进行单克隆培养。待长度达到约３．Ｏｃｍ时，将毛状根

至根尖处剪下约１．５～２．Ｏｃｍ进行单克隆继代增殖，每４ｗ继代一次。为方便继代，

采用半固体（ｓｅｍｉ—ｓｏｌｉｄ）ＭＳ培养基，并加入Ｃｅｆ除菌，配方为ＭＳ＋０．５％琼脂

＋４００ｍｇ／ＬＣｅｆ（ｐＨ５．８—６．Ｏ）：继代３－－４次后，Ｃｅｆ的浓度逐渐降低，配合高温（约

４０℃）处理约３６ｈ，协助除菌。

１９

霜薅式基镦镜（ＸＴＳ３０连续交继俸式驻徽镜，她袁黎炎仪爨蠢疆公司）和数璃

相机拍照。

１。５稽糯毛状檬优竞甍隆麓雾；ｌ；遥

参考刘传飞镣（２０００）的方法，略作改进。对柑橘琶状根进行单克隆增殖，筛

选分棱逶璇，分棱之闰静长度逶串（１～２ｃｍ），蠢径较缀（≤ｌｍ糙）的革克隆毛狱

椴。

克隧命名方法。取稽横耱辩焚交名称辩首字蹲静大写形式，将兵毒琶状辗貔外

槭体进行熬数编号（１，２，３，……，ｎ），樽对编芍后的外植体上的具有筛选潜力的

毛获辗辈霓瀣送行整数编弩（１，２，３，……，ｒ１）；辩手１５ｄ程１０５ｄ豹移穰，除了

谯上述命名基础之上，还分别加上ＹｆＹｏｕｎｇ）和Ｏ（Ｏｌｄ）；对于日膳编号遗失的毛状

擐，剩箕缡号静麓数都分渡走小鬈字母ＸＸ翘整数（１，２，３，……，Ｉ＂１），静：ｘｘｎ。

依据该命名规则，枳（ｔｒｉｆｏｌｉａｔｅ

ｏｒａｎｇｅ）的范状根克隆编号为ＴＯ

ｎ＿ｎ．柠檬（１ｅｍｏｎ）

毪状稷亮隧编号为ＹＬｎ－ｎ或ＯＬｎ－ｎ。

２柠檬毛状根优良克隆在培养基中的生长表现

本研究选用克隆ＯＬ２．１进行培养藏适应能生长试验。根据前人研究结梁

（Ｍｉｌｌｅｒ－ＷｉｄｅｍａｎａｎｄＷａｔｒａ建１９８４；Ｂ６ｃａｒｄａｎｄＦｏｒｔｉｎ，１９８８；Ｄｏｕｄｓ．１９９７），选用下列

培养基Ｉ、ＩＩ、Ⅲ和ＩＶ（１２１℃下高压湿热灭菌１５ｍｉｎ），其中培养基Ｉ、ＩＩ中加入

三羟甲基羝纂甲蠛（Ｔｒｉｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ

ａｍｉｎＯｍｅｔｈａｎｅ，Ｔｒｉｓ）盐酸缓冲液。

Ｉ：

Ｍ十１０ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ－ＨＣｌ＋１％Ｓｕｃｒｏｓｅ＋０．８％Ａｇａｒ，ｐＨ

６．８－７．０

ＩＩ：ｌ／ｌＯＭＳ＋１０

ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ·ＨＣｌ＋１％Ｓｕｃｒｏｓｅ＋Ｏ＋８％Ａｇａｒ，ｐＨ

６．８－７．０

ＩＩｈ

Ｍ＋１％Ｓｕｃｒｏｓｅ＋０．８％Ａｇａｒ，ｐＨ

５．５

Ⅳ：

１／１０ＭＳ＋１％Ｓｕｃｒｏｓｅ＋Ｏ．８％Ａｇ瓯ｐＨ６．８－７，０

每稀培养基羧稀１５蓉长约２—３ｅｍ酶毪状根竞隆ＯＬ２－１，分成３组，每缰５条

根。用Ｐａｒａｆｉｌｍ（ＡｍｅｒｉｃａＮａｔｉｏｎａｌＣ８／１ＴＭ，Ｍａｎａｓｈａ，ＷＩ，ＵＳＡ）缠封培养臌边缘，水

平放置，黧暗培养，溢度为２５±２℃。２ｗ，４ｗ焉禊！｜量净童长量。

２培募基对煳Ｆ孢予萌发的影响

３，１ＡＭＦ菌种的扩繁

供试菌种珠妖巨孢囊箨（Ｇｉｇａｓｐｏｒａｍａｒｇａｒｉｔａ

Ｂｅｅｋｅｒ＆Ｈａｌｌ（ＮＣｌ２ＩＡ））和壤话

球囊霉（Ｇｌｏｍｕｓ

ｍｏｓｓｅａｅ（Ｎｏｃｏｌｓｏｎ＆Ｇｅｒｄ．）Ｔｒａｐｐｅ＆Ｇｅｒｄ．（ＣＡｌ２７））购于美国瑙弗

吉尼亚大举雷际ＶＡ菌禳缣藏串心（ＩＮＶＡＭ），蕊兰盱革（Ｔｒｉｆｏｔｉｕｍｒｅｐｅｎｓ

Ｌ．）（黼

予斌汉市壕沟种子市场）为宿主横物采用艋钵法扩繁菌种。菌种收获后４＂Ｃ贮藏备

用。

３．２ＡＭＦ孢子韵分离

分蒜毯子参考漫筛法（ＧｅｒｄｅｍａｒｍａｎｄＮｉｃｏｌｓｏｎ、１９６３＞缝合蔗糖密度撵度麓心

法（叶维青译，土壤微生物实验法，１９８３；Ｆｕｒｌａｎｅｔａ１．．１９８０），略做改动（附录１）。

３。３ＡＭＦ孢予戆表囊溃毒

消毒方法参考Ｂ６ｃａｒｄａｎｄＦｏｒｔｉｎ（１９８８）、杨晓红等（２００１）以及董昌金等（２００３）

翡方法，珞骰浚耱（辫淤２）。淫：掰有互佟筠在超净王终台土宠戒。

３．３．１消毒液配制

消毒液Ｉ：２％氯胺Ｔ（ｃｈｌｏｒａｍｉｎｅＬｗ／ｖ）十Ｏ．０２％硫酸链霉素（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ

Ｓｕｌｐｈａｔｅ，ｗ／ｖ）＋０．０１％硫酸庆大霉索（ＧｅｎｔａｍｙｃｉｎＳｕｌｐｈａｔｅ，ｗ／ｖ）

＋０．２５％土温－２０（Ｔｗｅｅｎ．２０．ｖ／ｖ）。

消毒波Ｉｌ：２％氯胺Ｔ（ｗ／ｖ）＋０．２５％土温．２０（ｖ／ｖ）。

抗生索溶液：Ｏ．０２％硫酸链霉索（ｗ／ｖ）＋Ｏ．０１％硫酸庆大霉素（ｗ／ｖ）

无菌水配制３种溶液，０．２２ｐａｎ微孔滤膜抽滤灭菌，储存于４４Ｃ冰箱中奄用。

３．３．２消毒程序

本磷究孛采爝“二步溃毒法”（Ｔｗｏ

Ｓｔｅｐｓ

ＤｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎＭｅｔｈｏｄ，ＴＳＤＭ法），觅

（附疑２）。

３．４ＡＭＦ燕子麓蔬发试验

将经过表面消毒的球状巨獭囊霉孢予分别接种到培弊基Ｉ、ｌＩ、ＩＩＩ和Ⅳ表蕊。

踊Ｐａｍｆｉｌｍ缠封培养盈边缘，衡置黑暗培养，漱度为２５±２℃。每种培养基上瀚萌

发试验薰复３次，每重复２５个獭子。

瘁谣球囊霉稳子葫发试验操作同珠状匿孢囊霉孢予滟萌发试验搡｛乍，重复３次，

每重复３５个孢予。

４柠檬毛状根与ＡＭＦ的双重培养

４．｛｛孛檬毛状摄０１２－１克隆熬准餐

双重培养前，柠檬芬状根ＯＬ２．１克媵半固体ＭＳ培养基上继代生长２ｗ。临用醣

焉菌隶溥洗２～３次，去豫附着程毛获校上静培养基。

４．２笔状根和ＡＭＦ孢子的接种、壤养及观察

＜ｌ＞剪取ＯＬ２．１兜隆根炎１～２ｃｍ，无菌滤纸快速轻微地吸去多余水，接种到培捧基

Ⅳ的袭藿，没意贴紧，防止脱落或棂尖翘起脱离培莠基表嚣。

＜２＞用长的无菌尖头玻璃吸管（曲＝０．５～１．０ｒａｍ）在与根尖垂氲方向上接种孢予，

２ｌ

斑子距离粳尖一＜２ｍｍ；每个垮葵艇（９ｃｍ）孛量卡字型接耪４条掇尖，校尖朝淘

培养皿中心，每个根尖接种５个珠状巨孢囊霉孢予，接种１０皿，不设黧复，共

计２００个缒子。瘸Ｐａｒａｆ疆ｔｍ缠封壤莠丑边缘，竖慧放置，２５±２℃黑暗壤莠。

＜３＞用无菌注射器（７４针头，尖端用细砂纸打磨成角度约为５０。的斜黼）接种摩西球

囊霉孢予，孢子与根尖饿鬟及隧慝的操佟程序嗣珠状巨獭囊霉孢子的接耪程序。

簿个根尖接种８～１５个小孢子，接种１０舭（９ｅｒａ），也不设置重复。共计５１４个

小孢予。

＜４＞２ｗ后将所有培养越旋转１８铲，继续培养。

＜５＞对照处理（ＣＫ）不接种粮尖。接种４４个珠状巨狍囊霉豫子作为对照；接种２１７

个摩舀球囊霉孢予作为对照。

＜６＞每周观祭并记蒙，２ｗ质统计孢子萌发率。体式显微镜和／或倒置显微镜

（Ｏｌｙｍｐｕｓ，ＣＫＸ４１）和／袋显徽镜（Ｏｌｙｍｐｕｓ，ＢＨ一２）下稽照。

４．３ＡＭ的制片观察

采用ＰｈｉｌｉｐｓａｎｄＨａｙｍａｎ（１９７０）的方法进行染色制片，略作改动（附岽３），

Ｏｌｙｍｐｕｓ显微镜（ＢＨ．２和／或ＣＫＸ４１）下观察拍照。

结果与分析

１柑橘毛状根的诱导与培养

１．１柑橘毛状根的发生过程与生长特·陛

在含Ｃｅｆ的ＭＳ培养基上，外植体的切口创伤面处逐渐形成愈伤组织，大约１０ｄ

后，从外植体上陆续分化出肉眼可见的微黄的白根，幼根多从愈伤组织与外植体的

交接缝隙处产生（图版１

ａ，ｂ），多数毛状根呈现密集丛生状（图版１Ｃ，ｄ）。

之后的１４～２１ｄ是毛状根的形成高峰期，３０ｄ后基本不产生毛状根。经过鱼鳞

状划伤处理的外植体，其毛状根形成的高峰期可以比未经过鱼鳞状划伤处理的外植

体延长约７ｄ，约３０ｄ后，还零星地产生毛状根；其创伤面的愈伤化更加严重，甚至

成为恶性瘤（图版ｌｃ）；愈伤组织常常包住外植体（图版１ｃ）。上胚轴上的毛状根

诱导部位较随机，而子叶上的毛状根诱导部位多位于子叶的近轴端（图版ｌｅ），其

它部位相对较少。

对照处理的外植体基本上逐渐褐化死亡，但是偶有极个别外植体在下部的上胚

轴基端部位产生１～２条新根，生长极为缓慢。

柑橘毛状根未切离外植体情况下，其总体的生长速率大于切离母体后的生长速

率（Ａ４ｔ菌株转化的柠檬，Ａ４ｄ菌株转化的枳；数据未显示），可能是母体提供某些

刺激物质所致。两种情况下的毛状根在形态及分枝能力上并无异样之处。

Ａ４ｔ转化柠檬诱导产生的毛状根一般都具有分枝能力，不受切离母体与否状态

的影响。Ａ４ｄ转化枳诱导的毛状根不管切离母体与否都没有分枝能力，即使毛状根

长至２５ｃｍ也未表现出分枝能力。枳毛状根切段处理也不能刺激其产生分枝，外植

体上的毛状根在其切口出能够产生１～２条新根，各条新根也不具有分枝能力。

发根农杆菌黜质粒上Ｔ－ＤＮＡ整合到宿主植物核基因组中的位置随机，拷贝数

及各拷贝的连接状态迥异，使得单克隆起源的毛状根表现出生长速率、分枝能力的

差异性以及毛状根形态变异性和形态多样性（图版２）（Ａ４ｔ转化的柠檬）。

绝大多数毛状根在半固体ＭＳ基本培养基上表现自主生长特性；分生新根的能

力极强；根趋向于水平生长，向地性部分或全部消失（图版３

ａ，ｂ）。同一毛状根克

隆在继代过程中紧贴培养基表面或深入其内部可以快速生长，表现出该克隆在该培

养基上的固有特征：如果从上代母根上产生的新根接触不到培养基，则新根长至１～

２ｃｍ就会停止生长，根尖膨大，产生愈伤，呈短钢刷状（图版３ｂ，Ｃ）。分枝能力过

强的毛状根易愈伤化，上调或下调整体的生长速率。节间长度适中、分枝适度的毛

状根继代过程中保留部分愈伤组织可以上调整体的生长速率。

１．２鱼鳞状划伤处理对枳毛状根诱导率的影响

壁已逶蜜农疑蓥转钝褴物糖瓣系取经蜀爱入豹，穆日大小黠转纯率毒一定缒影

响。适度划伤处理引起细脆生理状态的改变，有利于转化率的提商。表１表明：以

发根农杆菌Ａ４ｄ菌株转化枳上胚轴，经过鱼鳞状划伤处理后，转化率明显提糟。没

肖经过鱼鳞、状划伤处理的上胚轴的转化攀必２９．２‰经过鱼鳞状划伤处理的上瓤辘

豹转纯率显麓缝提高，遮戮６６．７％，麓者魄嚣者增魏１２８。４％：辩子毛状攮密凄丽

宙，前者和詹者分别为４．１条和１２．６祭，后者比前者增加了２储多，差异显著。

表ｌ辍（Ｐｏｎｃｉｒｕｓｔｒｉｆｏｌｉａｔａ）主嚣壤夔鳞凝楚｜镌赡理怼毛状壤诱导搴戆彩旗

Ｔａｂｌｅ１Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｏｆ

ｈａｉｒｙ

ｒｏｏｔｓ

ｏｒｉｇｉｎａｔｅｄ

ｆｒｏｍ

ｅｐｉｃｏｔｙｌｓ

ｏｆｔｒｉｆｏｌｉａｔｅ

！懋熙竖！竺竺！！璺数坐塾：！！竺兰翌！：！塾！Ｐ鲤竺２竺跫璺鲤堡：堕型２缎！塑！呈！

鱼鳞状划伤处理转化率（％）

毛状根密度（条）

ＦＳＳＷＴｒｅａｔｍｅｎｔ

Ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ

ｏｆｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ

Ｄｅｎｓｉｔｙｏｆｈａｉｒｙｒｏｏｔｓ

注：１）菱摄农拇藏Ａ４ｄ蓥摭转纯４０ｄ羚揆太题辘。２）转铯率经过聂菠泫转换蜃采焉

费歇尔ＬＳＤ检验，嗣列不同的小写簪母表示差异鼹箸（ｐ≤Ｏ，０５）。

Ｎｏｔｅ：１）Ｅｐｉｅｏｔｙｌｓｏｆ４０ｄａｙｓ

ｏｌｄｔｒｉｆｏｌｉａｔｅ

ｏｒａｎｇｅ

ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｂｙ

Ａ４ｄ

ｓｔｒａｉｎｏｆ

Ａ．ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ．

２）Ｆｉｓｈｅｒ’ＳＬＳＤｔｅｓｔｗａｓ

ａｐｐｌｉｅｄ

ｔＯａｎａｌｙｓｉｓ

ｄａｔａｓｏｆ

ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ

ｏｆｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎａｆｔｅｒｔｈｅ

ａｒｅｓｉｎｅ－ｆｕｎｃｔｉｏｎ

ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ．Ｍｅａｎｓｗｉｔｈｉｎｅａｃｈｃｏｌｕｍｆｏｌｌｏｗｅｄ

ｂｙ

ｄｉｆｆｅｒｅｒｄｌｅｔｔｅｒｓａｒｅ

ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ

ｄｉｆｆｅｒｅｎｔａｔＰ≤０．０５．

｛。３毒孛檬扑檀薅类型及蓥龄霹罨状摄诱导褰的影嚷

同一植物的外植体类勰不同，其转化率也有所不同；相同的外植体类型凝生理

年龄不同，转化率也变化不一。以柠檬半黄化苗为试材研究了不同生理年龄相同外

棱镩类型，以及稷阉生理霉龄不同步｝攘镄类垄经发壤农杼蓑Ａ４ｔ蘩株转佬爱琵状辗

的诱导率（鱼鳞状划伤始溅）。结果（圈ｌＡ，Ｂ）表明：生长１５ｄ和１０５ｄ的柠檬半

黄化苗上胚轴的转化率分别为７０．８％和８３．３％，二瀚相差１２．５个百分点，蓑异不

鼹藿，这表明菌龄对毛状檄的诱导没有大蛇影响。擞长１５ｄ的柠檬半黄化茁的上胚

辍帮子时豹转纯率，蓊老为６７。５％，落疆者为２３．３％，二者穗蓑４４．２个酉分点，

麓异显著，这表明外植体类型对转化率的影响甚大。

１５１０５

Ｇｒｏｗｔｈ

ｔｉｍｅ（ｄａｙ）

Ａ

ｅｐｉｃｏｔｙｌｃｏｔｙｌｅｄｏｎ

ＥｘｐｌａｎｔｔｙｐｅＢ

圈１柠檬（Ｃｉｔｒｕｓｌｉｍｏｎ）半黄化菌（Ａ）菌龄（１５ｄＶＳ１０５ｄ）；（Ｂ）外梭体类型

（上殛辘ＶＳ予时）（１５ｄ蕙龄）慰激状摄转纯搴熬影响（发缀农释蓥

Ａ４ｔ嚣撩）

注：转化率经过度诞弦转换后采用费歇尔ＬＳＤ检验，柱型图上方不同的小写字母表示差

界显著，相同的小写字母表示麓异不显著（ｐ≤０．０５）

Ｆｉｇ．１

Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆ（Ａ）ｇｒｏｗｔｈｔｉｍｅ（１５ｄｖｅｒｓｎｓ１０５ｄ）；（Ｂ）ｅｘｐｌａｎｔｔｙｐｅ

（ｅｐｉｃｏｔｙｌｖｅｒｓｕｓｃｏｔｙｌｅｄｏｎ）ｆ１５ｄａｙｓ

ｏｌｄｓｅｅｄｌｉｎｇｓ）ｏｒｓｔｈｅ

ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ

ｏｆ

ｔａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｓｅｍｉ－ｅｔｉｏｌａｔｉｏｎａｌ

ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ

ｏｆ

ｌｅｍｏｎ（Ａ４ｔ

ｓｔｒａｉｎｏｆＡ。

ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ）

Ｎｏｔｅ：Ｆｉｓｈｅｒ’ＳＬＳＤｔｅｓｔｗａｓ

ａｐｐｌｉｅｄ

ｔｏ

ａｎａｌｙｓｉｓ

ｄａｔａｓｏｆ

ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ

ｏｆｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎａｆｔｅｒｔｈｅ

ａｒｃｓｉｎｅ－一ｆｕｎｃｔｉｏｎｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ。Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｌｅｔｔｅｒｓａｂｏｖｅｔｈｅｃｏｌｕｍｎｓｉｎｄｉｃａｔｅ

ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ

ｗｈｉｌｅｔｈｅｓａｍｅｌｅｔｔｅｒｓ，ｎｏｎ－ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ，武Ｐ《０。０５．

１．４柑橘毛状根优良克隆的筛选

经过对柑橘毛状摄克隆的增麓、筛选，获褥蓑干节闻故度中等、分棱遥度的毛

蔽撮瓷隧（表２）。

表２发根农杆黼转化柑橘获得的良好毛状根克隆

Ｔａｂｌｅ２Ｅｌｉｔｅｃｌｏｎｅｓｏｆ

ｈａｉｒｙ

ｒｏｏｔｓｏｆＣｉｔｒｕｓｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ

ｂｙ

Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ

外植体黼株毙隆编号

Ｅｘｐｌａｎｔｓ

Ｓ拈ａｉｎＣｌｏｎｅＮｏ

注：｝枳毛状根无分技能力，未得到良好克隆。

Ｎｏｔｅ：＋ｒｔａｉｒｙｍｏｔｓ，ｏｒｉｇｉｎａｔｅｄ

ｆｒｏｍｔｒｉｆｏｌｉａｔｅ

ｏｒａｎｇｅ，ｈａｄｎｏｃａｐａｃｉｔｙ

ｏｆ

ｂｒａｎｃｈｉｎｇ，ａｎｄ

ｎｕｌｌｅｌｉｔｅ

ｃｌｏｎｅ（ｓ）ｏｂｔａｉｎｅｄｒｅｓｕｌｔａｎｔｌｙ．

驰翳加∞瓣蝣∞∞埒棼

柠檬毛状裉０Ｌ２－１克隆在不同嬷养基审的生长表现

要建立糕撩毫状横葶瑟ＡＭＴ斑－Ｔ－懿粳重培葵，裁必须淡是双方的营葵嚣求。ＡＭＦ

对营养需求比较低，而且比较苛刻，现行条件下只能让毛状根适应低营养需求的

ＡＭＦ的生长环壤。医此，在翦人鸵研究莲礁上，对柠檬廷状攫在４零孛燎葵基的生长

适应性进行了调查（表３）。

表３柠檬（Ｃｇｒ黼／／舢ｎ）毛状粮ＯＬ２－１克隆在４种培养基中生长状况

Ｔａｂｌｅ３Ｇｒｏｗｔｈｓｔａｔｕｓ

ｏｆ

ＯＬ２－１

ｃｌｏｎｅｏｆ

ｈａｉｒｙ

ｒｏｏｔｓ

ｏｒｉｇｉｎａｔｅｄ

ｆｒｏｍｌｅｍｏｎ

ｃｕｌｔｕｒｅｄｉｎｆｏｕｒｋｉｎｄｓｏｆｍｅｄｉａ

壤养基代号２ｗ的净生长量（ｒａｍ）Ｍｅａｎ±Ｓｔｄ

４ｗ的净生长量（ｒａｍ）Ｍｅａｎ士Ｓｔｄ

ＴｏｋｅｎｏｆｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉｕｍＴｗｏｗｅｅｋｓ’ｎｅｔ

ｇｒｏｗｔｈｔｏｔａｌｉｔｙ

Ｔｗｏｗｅｅｋｓ’ｎｅｔ

ｇｒｏｗｔｈｔｏｔａｌｉｔｙ

Ｉ

１．３士０．８ｃ１，４士０．９ｏ

ＩＩ２．５士１．２ｂｃ２＋５士１．２ｂｃ

ｍ３．１士１．２ｂ

３．１士¨ｂ

Ⅳ１０．６士２．６ａ１０．８士２．６ａ

注：数据纵向比较，费歇尔ＬＳＤ梭验，不嘲字母表示差异显著，相同字母表示差异不照著

（ｐ≤０．０５）

Ｉ：

Ｍ＋ｌＯｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ’ＨＣｌ十１％Ｓｕｃｒｏｓｅ＋Ｏ．８％ＡｇａｒｐＨ６．８－７．０

ＩＩ：１，１０ＭＳ＋１０

ｍｍｏＦＬＴｒｉｓ－ＨＣｌ＋１％Ｓｕｃｒｏｓｅ＋Ｏ．８％ＡｇａｒｐＨ６．８·７．０

珏王：

Ｍ＋１％Ｓｕｃｒｏｓｅ＋０。８％ＡｇａｒｐＨ５．５

ＩＶ：

１／１０ＭＳ＋ｌ％Ｓｕｃｒｏｓｅ＋０．８％Ａｇａｒ时｛６．８－７．０

Ｎｏｔｅ：Ｆｉｓｈｅｒ’ＳＬＳＤｔｅｓｔｗａｓ

ａｐｐｌｉｅｄ

ｔｏ

ａｎａｌｙｓｅ

ｔｈｅｄａｔａｓｉｎｖｅｒｔｉｃａｌｏｒｉｅｎｔａｔｉｏｎ．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｌｅｔｔｅｒｓ

ｉｎｄｉｃａｔｅ

ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ

ａｔＰ≤Ｏ．０５，ｗｈｉｌｅ

ｔｈｅｓａｍｅ１榭ｅｒｓ，ｎｏｎ－ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ．

款袭３孛哥知交隆ＯＬ２．１农培葵基ｌ、鞋、瓣襄Ⅳ上２ｗ懿冷生长豢分剐为ｉ。３、

２．５、３．１和１０．６ｍｍ，极值之麓为９．３ｍｍ；４ｗ的净生长量分别为１．４、２．５、３．１

饔１０．８ｍｍ，掇篷之差为９，４ｍｍ。嚣鳃数据都分裂呈瑗镀次壤糖薛趋势，瑟鬟溺缀

数据之间的差异几乎都迭到显著水平。

依次分粳裁一耪塔莽基蠹黛长２ｗ耪４ｗ君壤狭棱鹣净生长爨，差舅不显著（ｐ≤

Ｏ．０５，分析结果来显示）。从数獭上显示根系可能停止生长，但是，其活力有很大不

瓣。试验结果袭臻：奁壤莠基ｌ释ｌｌ上爱长懿ＯＬ２一ｌ交隧２ｗ蘑已经逐龌瑟亡，辗

尖枯死，４ｗ后全部死亡；在培养基Ⅲ上的观测结果与在培养基Ｉ和ＩＩ上的观测结果

一致，哭是该邋程较兹＝者缓蠖：瑟生长在培莠基＆上耱ＯＬ２＊ｌ竞羟２ｗ凡乎郄终

止生长，除个别根系枯死外，绝大多数都保持极低的活力。这与培养基中营养元素

憨丰度蠢壤大懿关系。

３ＡＭＦ孢子萌发试验

零磅究襞选鼹戆４穆培养基建在裁入磷究熬萋礁上鞘镞敬交瑟残，瓣嚣，这４

种培养蕊都眈较适含触忸？孢子麓发。

曩Ｇｉｇａｓｐｏｒａｍａｒｇａｒｉｔａ（ＮＣｌ２１Ａ）

ＩＩⅢⅣ

Ｔ０ｋｅｎｏｆｃｕｌｔｍ－ｅｍｅ出ｌｍ

鼙２臻状匿邋囊霉（Ｇｉｇａｓｐｏｒａｍａｒｇａｒｉｔａ）和摩西球囊霉（Ｇｌｏｍｕｓｍｏｓｓｅａｅ）

在骜养萋ｌ、嚣、毽和掰主熬萌发穗滋调查

注：１）萌发率经过反正弦函数转换后采用邓肯氏新复极差检验，不同的字母畿示著异显

著，相同的字母表示差异不显著。（口≤Ｏ．０５）

Ｆｉｇ．２

Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ

ｏｆ

ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ

ｏｆ

Ｇ￡ｍａｒｇａｒｉｔａ

ａｎｄＧｍｏｓｓｅａｅｏｎ

ｆｏｕｒ

ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｕｌｔｕｒｅ

ｍｅｄｉａ，ｎａｍｅｌｙ

ｍｅｄｉｕｍｌ，嚣，毽ａｎｄＩＶ

Ｎｏｒｅ：１）Ｄｕｃａｎ＇ｓｎ尊ｗ

ｍｕｌｔｉｐｌｅｒａｎｇｅ把ｓｔｗａｓａｐｐｌｉｅｄｔｏ翱】ａＩｖｓ张ｄａｔａｓｏｆ

ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ

ｏｆ

ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ

ａｆｔｅｒｔｈｅｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆａｒｅｓｉｎｅｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｌｅｔｔｅｒｓｉｎｄｉｃａｔｅ

ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ

ａｔＰ≤０．０５，ｗｈｉｌｅ

ｔｈｅｓａｍｅ

ｌｅｔｔｅｒｓ，ｎｏｎ－ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ．

闰２表明：珠状甄孢囊霉孢子在培养基Ｉ、ＩＩ、Ⅲ和Ⅳ中的萌发率分别为３９．８％、

３５．５％、３８．７％和３７．９％，相互之间差异不显藩：摩西球囊鬈孢子在培养綦Ｉ、ＩＩ、

ＩＩＩ和ＩＶ上的萌发率分别戈４，６％、２．４％、２．５％秘３。６％，楣强之闻差异瞧不显著。

豫状匿豫囊霉穗予帮痒西球囊霉孢子豹警均萌发率分澍为３８．Ｏ％和３．３‰前

者和厝者相差３４．７个百分点，謦霹显著。结果淡明这４种培养基对本试黢中的２种

孢子的萌发率没有什么影响，而孢子本身的固有特性才对特定培养基中酌萌发率起

蔷决定壤终溺。

本研究中的萌淡率都很低，尤其是摩西球囊霉孢子的平均萌发率为３．３％，这极

有可能与孢子在基质中低温贮藏的时间过久（＞１２ｍｏｎｔｈｓ）、活力衰退乃至丧失有关。

摩珏球囊霉孢子的潍力衰退速率运大子珠状睡魄囊霉憨子靛潺力衰退速窭，经过ｌｙ

豹贮藏，稳子严重搦纯、破裂，箕活力几乎全都丧失。

ａ上Ｌ、～ｏ墨ａ山曩叠基

翰

一

一ａ豳露暖腿

一

一ｒＬＳ

４

４

３

３

２

２

１

ｌ

４柠檬毛状根０Ｌ２—１克隆与ＡＭＦ孢子的双重培养

４．１双重培养建立过程的观察

显微镜下可以观测到珠状巨孢囊霉孢子为乳黄奶油色的球形物，直径约３３０～

４７０“ｍ。孢予萌发时从配囊柄处伸出若干条菌丝（图版４如ｂ），逐渐产生分枝。菌

丝生长有极强的负向重力性（图版４

ｃ）。ｌ～２ｗ后菌丝可以形成丛枝状结构，少数

菌丝顶端形成辅助细胞（图版４

ｄ）。较粗的菌丝受损时，具有自我愈伤能力，形成

“Ｄ”环型结构（图版４

ｅ）。菌丝接近毛状根时，分枝增多（图版４ｆ），形成扇状

结构（Ｆａｎ—ｌｉｋｅＳｔｒｕｔｕｒｅｓ，ＦＬＳ），扩大接触面（图版４

ｇ），利于侵染宿主根系。菌

丝开始侵染毛状根（图版４

ｈ），蓠丝在根附近也可以形成紧密缠绕的菌丝团（Ｄｅｎｓｅｌｙ

ＰａｃｋｅｄＣｏｉｌ，ＤＰＣ）（图版４ｉ）。培养约３ｗ后，双重培养的部分菌丝前端微膨大，逐

渐形成分枝状吸收结构（ＢｒａｎｃｈｅｄＡｂｓｏｒｂｉｎｇＳｔｒｕｔｕｒｅ（ｓ），ＢＡＳ）（图版４Ｊ），一般有３－－

５级分枝。培养约４ｗ后，由于“ｇ”限制型（ｇｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄｔｙｐｅ）孢子有较强的分枝能

力和生长能力，其菌丝几乎布满整个培养皿（图版４ｋ，１）。如果双重培养建立成功，

则菌丝保持继续生长的能力；否则，菌丝的生长速率将会减缓，直至停滞、死亡。

由于摩西球囊霉孢子的活力衰退严重，虽然接种孢子众多，但是其萌发率极低，

没有得到该过程的相关图片资料。

４．２双重培养建立过程的相关问题比较

本研究的结果表明按种毛状根与不接种毛状根两种情况下珠状巨孢囊霉的孢子

的萌发率分别为３２．５％和３６．４％（表４），差异不显著，这暗示柠檬毛状根似乎对孢

子萌发没有促进作用，但是，接种毛状根后菌丝较为持久的生长延伸能力表明宿主

根系对珠状巨孢囊霉有后发作用。同样两种情况下的摩西球囊霉孢子的萌发率分别

为１．Ｏ％和０（表４），差异也不显著。

建立双重培养过程中，培养皿垂直放置，引起内壁上的水珠下移至上下皿之间

边缘缝隙中，每次观测时液体流动，大大增加了污染的机率，这是造成双重培养成

功率低的因素之一。４ｗ后珠状巨孢囊霉和柠檬毛状根的双重培养单位以及摩西球囊

霉和柠檬毛状根的双重培养单位的污染率分别高达７７．５％和６５．０％（表４）。珠状巨

孢囊霉和柠檬毛状根成功地建立双重培养，但是仅有２个试验单位：摩西球囊霉和

柠檬毛状根的双重培养没有得到预期结果。

取出双重培养建立成功的柠檬毛状根，ＦＡＡ固定，Ｔｒｙｐａｎ

Ｂｌｕｅ染色，制成简易

压片，显微镜下观察，结果显示珠状巨孢囊霉菌丝侵染了柠檬毛状根（图版４ｍ），

但是珠状巨孢囊霉没有产孢。

表４柠檬（Ｃｉｔｒｕｓ

ｌｉｍｏｎ）毛状摄ＯＬ２－１亮隧与鏊校菌掖粪蔼熬双重臻养系统

Ｔａｂｌｅ４Ｄｕａｌｃｕｌｔａｌｅｓｙｓｔｅｍｓ

ｏｆ

ｈａｉｒｙ

ｒｎｏｔｓｃｌｏｎｅＯＬ２．１ｏｆｌｅｍｏｎａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈ

ａｒｂｕｓｃｕｌａｒｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ是矬蓼

（孢子萌发总数）（嚣）的污凝奉（％）

成功建立

Ｓｐｅｃｉｅｓ

ＲｏｏｔＴｏｔａｌｉｔｙ

ｏｆ

Ｐｅｎ；ｅＹＲａｇｅ

ｏｆＣｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎＳｕｃｃｅｓｓ

ｏｆ

Ｓｐｏｒｕｌａｔｉｏｎ

ｉｎｏｅｕｌｍｉｏｎｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ

ｓｐｏｒｅｓｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ

ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ

ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ

（ｔｏｔａｌｉｔｙｏｆｏｆｄｕａｌｃｕｌｔｕｒｅｏｆｄｕａｌ

黻罂ｉ巍睡箜塑瞳！熊

！！｛堂

Ｇｉｇａｓｐｏｒａ

ｍａｒｇａｒｉｔａ

Ｇｌｏｍｕｓ

ｍ∞ＳＯＩ∞

Ｙｅｓ２００（６５）

３２。５８７７．５

ＹｅｓＮｏ

Ｎｏ

Ｙｅｓ

Ｎｏ

４４０６）

５１４（５）

２１７《∞

３６．４ａ

１．０ｂ

０ｂ

△

６５．０

△

△△

ＮＯＮｏ

△△

泣：１）双重培莽中每条根和若干孢子构成１个试验单位，所以每种ＡＭＦ孢子有４×１０＝４０个试

验单位。

２）△表示对照不予以计数分析。

３）对ＡＭＦ雍子赘发率进行吾分数差薯嚣著经梭验（ｐ≤０．０５）．相弱字母表誉差异不显著，

不同字母表示差异显著。

Ｎｏｔｅ：１）Ｅａｃｈｒｏｏｔ，ｃｏｍｐａｎｉｅｄ

ｗｉｔｈ＋ｓｅｖｅｒａｌ

ｓｐｏｒｅｓ．ｃｏｍｔｉｔｕｔｅｄｏｎｅｄｕａｌｃｕｌｔｕｒｅ

ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ

ｕｎｉｔ，ＳＯ秘

ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ

ｕｎｉｔｓａｒｅａｖａｉｌａｂｌｅｆｏｒｅａｃｈａｒｂｕｓｃｕｌａｒ

ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｆｕｎｇａｌｓｐｅｃｉｅｓ．

２１△ｍｅａｎｓＮＯｄａｔａ

ａｎａｌｙｓｉｓ．

３１

Ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ

ｏｆ

ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ

ｏｆａｒｂｕｓｃｕｌａｒ

ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｆｕｎｇａｌｓｐｏｒｅｓ

ＷａＳ

ｔｅｓｔｅｄ

ｂｙ

Ｔ－ＴＥＳＴａｔ

Ｐ≤

Ｏ。０５，ｔｈｅ

Ｓａｍｅｌｅｔｔｅｒｓｍｅａｎｓｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃ｛ｍｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ，ｗｈｉｌｅ

ｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔ

ｌｅｔｔｅｒｓ，ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ

ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ．

讨论

１影晌发根农杆菌介导的柑橘转化的因素

到目前为止，柑橘韵遗传转化几乎都鼹采用根癌农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ

ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）转纯岁｝援髂（石臻，２００１｛李东拣，２００２；蒋逵移徐蓦杰等，２００２），少

有以发根农杆菌进行柑橘的遗传转化，遮可能岛发根农杆菌研究起步较晚有关（王

关稀帮方宏筠，２００２），毽惹其擎巍隆起源，不产生酝含体静优点豢示密诱久嚣荣。

在农杆菌介导的遗传转化过程中，包括农杼壤菌株、外檬体的种类和生理状态

班及整个操作过程中的环境和物化条件都会对最终韵转化效率产生影响。研究者在

试验过糕中往皱跟于装些袈髂不熊够对发撮农拶蕊藏橼终出会理约选择，质以只能

在外植体的遴选以及转化操作程序的优化上做有效的改进。

对努疆俸送行穆密处囊是提麓转纯搴熬京效整憝之一。对豢豆子（Ｓｏｐｈｏｒａ

ａｌｏｐｅｃｕｒｏｉｄｅｓ）子叶ｉ挫行抽真空低压伤害，可阻使转化率达到７８．３％（赵东利等，

２００２）。粕用越声波空纯效反过程审气泡闭合形藏湃蔺离捱｛申海外植体表面，造成微

伤口，也可以明显地提高转化率，鄹：越声波辅助农籽菌介零的转化（王毓美等，

２０００）。这两种技术方法比较繁琐，多数研究者偏爱简便易行的解剖刀划伤法来提高

转化率（秦玲等，２００２）。

本研究中对枳上胚轴进行鱼鳞状划伤处理显著提商了发根农杆茵的转化率，从

２９。２％瓒蕊羁６６．７％，捷离ｌ蓿多。转纯成功懿辩撞体主垂奄毫狡禳寮度获《．１条增巍

Ｎ１２．６条，提赢约２倍多。这充分说明对外植体邂度伤寒不仅Ｗ以撮高转化率，而且

可以节约外植体用材。

钋檬钵年龄是影响转化率一个缀关键的霞豢。多数研究赣选用幼嫩的枣葶糕进行

遗传转化。贺纨和李耿光（１９９９）以根癌农杆菌ＥＨＡｌｏｌ菌株为试材对影响枳转化效

率熬嚣素送舒了探｜季，结果袭臻２§鑫龄懿亳｝｛土殛辘转纯率甓显好予３§矗器４０ｄ（５。９％）

龄的枳上胚轴。本研究以发根农杆菌Ａ４ｄ菌株转化４０ｄ龄的枳半黄化菌的上胚轴，即

後宋骰惫鳞袋瀚伤处理，箕转佬率氇可遮２９．２％，这表晴菌种之闻其有差舜，也表

明发根农枵藏对外檀体的年龄没有苛刻的要求。

Ｐ毒ｒｅｚ－Ｍｏｌｐｈｅ．Ｂａｌｃｈ

ａｎｄＯｃｈｏａ－Ａｌｅｊｏ（１９９８）以发根农杆菌Ａ４菌株（携带ｎｐｔⅣ基

爨；｝嚣￡瓣蒸因）转纯甍龄力３ｍｏｎｔｈｓ的墨嚣鼹酸撵（Ｍｅｘｉｃａｎｔｉｍｅ：Ｃ／ｔｒｕｓａｕｒａｎｔｉｆｏ黝）

上胚轴，转化率高达５０．Ｏ％。本研究以发根农杆菌Ａ４ｔ菌株转化１５ｄ龄和１０５ｄ龄柠檬

上艇鞫，二者的转纯率分裂为７０．８％窝８３．３％，１０５ｄ龄靛柠檬上惩辅转纯率｝Ｌ１５ｄ龄

的转化举高１２．５个百分点。这些数据表明材料生长期延长，遗度老化，有助于提高

转化率。

姊棱体来源也能够影睫农楞藏转化搴。在攒撬毂转化中，实生蓑上题辘棠誉戒

为研究者的首选（王子成和邓秀新，２００２；蒋迪和徐昌杰等，２００２）：子叶也是一个

不错的选择；其它的也有，但是不普遍。本研究以１５ｄ龄柠檬的上胚轴和子叶浅析

外植体差异对发根农杆菌Ａ４ｔ菌株的转化率的影响，上胚轴转化率为６７．５％，而子

叶转化率为２３．３％，二者相差约２倍；子叶的转化率与发根农杆菌野生型Ａ４菌株

转化甜橙（Ｃｉｔｒｕｓｓｉｎｅｎｓｉｓ）子叶的结果一致（李名扬等，１９９６）。

无论采用何种转化方法及技术措旌，最终目的是获得毛状根或者近一步通过外

植体再生途径得到遗传转化植株（刘琴等，２００２；ＧｉｆｔａｎｄＮａｒａｓｕ，２０００），如何建立

更为广泛、有效的转化系统以及再生系统，使遗传转化技术达到生产实用化的阶段，

有待于近一步的研究。

２柑橘毛状根诱导过程及生长特性的观察

发根农杆菌之所以能够诱导毛状根的产生，关键在于其Ｒｉ质粒上的ＴＬ．ＤＮＡ，

尤其是ｒｏｌ基因（梁机等，２００２）。柑橘毛状根从外植体伤口处产生过程中，解剖刀

划伤处易愈伤化；融质粒上携带激素基因，可能会引起转化细胞旺盛增殖，显示强

烈的愈伤化，成为恶性瘤（图版ｌｃ），恶性瘤上难以再现毛状根。

本研究中着实令人费解的是以Ａ４ｄ菌株转化枳获得的毛状根连续生长数月竟然

不分枝，一直保持单根延长能力，不受截断或／和激素刺激的影响（数据末显示）。

以Ａ４ｔ菌株转化幼龄枳外植体而诱导产生的毛状根具有分枝能力（曾斌和杨晓红，

私人交流）。菌株差异性极大可能是引起此现象的主要原因。Ｖｉｌｌａｉｎｅｅｔａ１．（１９８７）

报道Ａ４菌株的ＴＲ．ＤＮＡ和ＴＬ．ＤＮＡ都可以单独转化植物细胞，ＴＲ．ＤＮＡ在烟草中

诱导的根与ＴＬ．ＤＮＡ在烟草中诱导的根在表型上有差别：前者不表现高度分枝，甚

至不分枝，而后者表现高度分枝。本研究中的Ａ４ｄ菌株具有Ｒｉｆ抗性，可能经过人

工改造，而Ａ４ｔ菌株是野生型，这更近一步增加了推测的可信度。

柠檬毛状根在生长过程中表现出很强的激素敏感性（数据图版末显示），ＮＡＡ

（旺．ｎａｐｈｔｈｙｌａｃｅｔｉｃａｃｉｄ，萘乙酸）变化范围在０．０１～０．５０ｍ∥Ｌ时（ＭＳ培养基），１ｗ

后根明显增粗，２ｗ后长约２ｃｍ不再延长。离体的实生苗根系几乎不具备此特性。

母根上的新生根无法接触培养基引起生长停止、尖端愈伤化（图版３ｂ，ｃ），这可能

与新生根系无法获取营养，导致营养匮乏有关（ＳｍｉｌａｕｅｒｏｖａａｎｄＳｍｉｌａｕｅｒ，２００２）。

毛状根ＯＬ２．１克隆在营养元素含量极低的培养基Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ和ＩＶ上生长时，表

现出严重的停滞性、甚至死亡，４ｗ的净生长量与２ｗ的净生长量没有差异。由此可

见毛状根主要在前２ｗ内生长，这可能与毛状根从富营养的ＭＳ培养基上继代至上

述４种培养基中之后的一段时间内依然能够利用继代前的贮备营养保持旺盛的分裂

生长能力，而此后毛状根在这４种培养基中不能够吸收足够的营养有关。凡是在含

有Ｔｒｉｓ·ＨＣｌ的培养基上的柠檬毛状根生长状况都最差，４ｗ后全部死亡，这与胡萝

ｈ毛状根在Ｍ＋Ｔｒｉｓ·ＨＣｌ培养基上生长状况的报道不一致（Ｄｏｕｄｓ，１９９７）。这表明物

季孛敬麓暴性系关键所在。

３孢子藐发滚验与双重墙葬麓麓立

研究者多在菌种扩繁焉４ｍｏｎｔｈｓ

２－内傲孢子萌发试验，至多不超过６ｍｏｎｔｈｓ

（Ｂｅｃａｒｄａｎｄ

Ｆｏｒｔｉｎ，１９８８；Ｂｕｄｉｅｔａ１．，１９９９；Ｊｕｇｅｅｔａ１．，２００２）。超过６ｍｏｎｔｈｓ荫，孢予

的活力，尤其是小孢子的活力迅速袭邋；大孢子因储存较多营养而活力衰退较慢，

遗悬决定萌发率的主导因素。本试骏中珠状巨孢囊霉孢子和摩西球囊霉孢予的贮藏

期都超过ｌｙ，二者的萌发率极低也诚实了避一点。包括培养基成分在内的巢燃物质，

旗慝伴生细菌也能够影响孢子的萌发（慧晶金等，２００３；Ｋａｔｈｒｙｎ，１９８６；Ｖｉｅｒｈｅｉｌｉｇｅｔ

ａ１．，２００３），消毒方法也是一个很重要的影响因素（Ｂｕｄｉ戬ａ１．，１９９９），但是更多的是

荚注刺激物质对已经萌发孢子的嫠熊的影响（杨晓红等，２００１；Ｂｅｃａｒｄａｎｄ

Ｐｉｃｈ６，１９８９；

Ｂ§ｅａｒｄｅｔａｌ，，１９９２）。

双重蛰葵孛氇子薅发率势寒毯接耱壤浚稷｜｝嚣发生显著毪改交，然嚣蘩丝嚣麓与

游麓静生长特点出现差剐，与拖入熬辑究缝粟一致（鄂菊芳，２００４），蘸发攀没露整

髯可能是根系分泌物或挥发性耪震的浓发不足弓｛起（Ｂ６ｃａｒｄａｎｄ

Ｐｉｃｈ６，１９８９；Ｂ６ｃａｒｄ

ｅｔａｌ．，１９９２；Ｓａｍｐｅｄｒｏｅｔ

ａ１．，２００３）。ＡＭＦ孢平从萌发到侵染毛状根的过程中，蔚缎结

构逐渐发生一些与功能相适应的变化。本研究中珠状巨孢囊霉的菌丝显示负向煎力

性，而次级菌丝具有正向重力性，平檄倒灏１８０。也不能够改变这种特性，这与Ｗａｔｒｕｄ

ｅｔａ１．（１９７８）报道的结果一致（培养基包埋和光照均不能改变这种特性），邵粥游

（２００４）也曾观察到此现象。然而杨晓级镣（２００ｔ）报道在Ｍ培养基中加入囱三时

肇发黪物的甲醇提取物，以垂直平板定时转动培养法（ｍｅｔｈｏｄｏｆｔｉｍｅｔｕｒｎｉｎｇｖｅｒｔｉｃａｌ

ｐｌａｔｅ

ｃｕｌｔｕｒｅ）培养臻状臣孢囊霉稳予，藏丝鼹示正向重力性，这可能与学簿撼取物

蠢荚。

Ｊｕｇｅ

ｅｔａｌ＋（２００２）在聚究Ｇｔｏｍｕｓｉｎｔｒａｒａｄｉｃｅ穗子铱强与贮藏对满豹关系辩察先

掇趣“Ｇ扩展型”菌丝和“ｇ隈翩型”麓熊（Ｇｅｘｔｅｎｓｉｖｅｔｙｐｅａｎｄｇｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄｔｙｐｅ）概

念。本研究中也观察到珠状巨孢囊霉的“ｇ限制型”菌丝（图版４ｋ１），该癸黼熊扩

展范围受到一定的限制，菌丝分枝却ｊ｝常多，单位面积内菌丝密度大，在培养胍内

傻染宿主根系的机率更大，更具有成功建藏双重培养的优势；“Ｇ扩展型”菌缎分枝

少，菌丝可以延伸很长，更适合远距鬻慢染，但是在向重力性的影响下，极易错过

宿主根系而无法侵染，表现出更大的随机慷。杨晓红等（２００ｉ）的试验结果中倒鼹

盼平扳内菌丝图像也具有“Ｇ扩展型”和“ｇ限制型”结构（原文图１．），然黼农囊

煮转动培养串，菌丝分棱明显藏少，举褥最嚣“ｇ限裁鍪”萤丝的特征。低潺（４℃）

贮藏对涟霹戮改变曩毒“Ｇ扩蓑鍪”蘩熬豹穗子专其毒“ｇ疆寒ｌ型”莹丝静稳予之阗

麴院鲷关系，丈蘩星负糖关。重力怒磷糍够孳｜踅稳予“Ｇ扩震鍪”藿丝类黧与“ｇ鞭

铡塑”菌丝类型豹转换篷褥深愚，繁熬类澎与低温戳及重力之闽的关系瞧德褥深入

研究。ＡＭＦ行使无性繁殖，却是进化很成功的物种，多核性系一个关键原因（Ｓａｎｄｅｒｓ，

１９９９；Ｋｕｈｎ

ｅｔ

ａｌ。，２００１；Ｐａｗｌｏｗｓｋａ

ａｎｄＴａｙｌｏｒ，２００４），如果实瑷单孢培养，慰子代斑

子的懿丝类垄又将会怎么群膏努簧傲更近一步她研究。

率研究中观察到ＢＡＳ结构（阁版４

ｊ），它在ＡＩｖＩＦ的培弊中可能具肖煎要的功能

（Ｂａｇｏ

ｅｔ

ａ１．，１９９８ａ，１９９８ｂ）。Ｇｌｏｍｕｓｉｎｔｒａｒａｄｉｃｅｓ的根外菌擞体发育过程中，从～些

低级涝确瓣努支鲶麓德毪逮长赉浮壁蔻丝，影裁毒缝织豹疆楚溺凌结孛窀。这鉴势支

发育成新的厚壁菌熬，或形成ＢＡＳ结构或孢予（Ｂａｇｏｅｔａ１．，１９９８ａ）。趟微结构观察

表明ＢＡＳ与根内的Ａ结构相似，并鼠寿命也相似，约７ｄ，是强烈代谢活动的场所（Ｂａｇｏ

ｅｔａｌ；，１９９８ｂ；Ｂａｇｏ，２０００；Ｓｍｉｔｈ

ａｎｄＳｍｉｔｋ１９９７）。ＢＡＳ显萋遮扩展蔻丝袋露积，有裂

予营养吸收。ＢＡＳ稍Ａ总体形态缩构帮功能糖儆性及其备蠢特异往有宓鼗进一步研

究。

零试验建立了珠状巨孢囊霉和柑橘毛状撤的双重培养，菌丝成功侵染毛状根形

畿蘩攒（霭叛４壤）。乎投垂壹敖嚣激及显徽镜下餐萋鼹察鬻鬻霞褥冷凝求滏浚雩｜莛

高污染，提高无菌培养室条件和／戚在特制培养皿内缠绕吸水能力强的棉线可以缓解

这种尴尬（Ｂ６ｅａｒｄａｎｄＰｉｅｈｄ，１９８９），然而该方法可行性不强。尽管建立了双重培养，

遗撼的是没毒获缛次生孢子。在糯有熬摄道中，胡萝｝、毛状壤与ＡＭＦ建立熬双重培

养系统巾并菲都脊产孢记录（Ｆｏｒｔｉｎｅｔａｌ。，２００２），或者产孢熊力还不及戳蒸它宿主植

物实生根系或毛状根与ＡＭＦ建或的双重培养系统。前人的报道中较典型的是以“根

一下胚轴系统”（ｒｏｏｔ－ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ

ｓｙｓｔｅｍ，ＲＨ系统）与ＡＭＦ建立的双震培养系统

（Ｍｉｌｌｅｒ－ＷｉｄｅｍａｎａｎｄＷａｔｒｕｄ，１９８４），缳色蠡孽下憝羲霹戳璜麓生长素东乎，获瑟改交

激素的平衡，影响双重培养的建崴。笔者曾试图以红桔（Ｃｉｔｒｕｓｒｅｔｉｃｕｌａｔａ）的ＲＨ系

统在Ｍ培养基上建藏双重培养，但是胚根上切口处的次级根不易产生，即使产生也

因次级擐童径过大戏豢尖端挂藏（Ｍ避蓁基不逶舍楗撬生长）使褥－ＡＭＦ不黢够经染。

组织培养中以发撮农杆菌诱导鼹以生根的材料生根（ＤｅｖｉａｎｄＲａｎｉ，２００２），如果在

其它撩烈培养基上建立柑橘，尤其是砧木的ＲＨ系统或ＨＲＨ系统（ｈａｉｒｙ．ｒｏｏｔ，ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ

ｓｙｓｔｅｍ，罨炊根一下瓤辘系统）墨ＡＭＦ的双重培养系统可熊更具有可行髅。

图版和图版说明

ＰｌａｔｅｓＡｎｄ

Ｅｘｐｌａｎａｔｉｏｎｓ

图版１柑橘毛状根的诱导过程

图版１柑橘毛状根的诱导过程

ａ：柠檬新毛状根的产生（ｂａｒ＝２．０ｍｍ）。箭头所指为幼嫩毛状根

ｂ：枳新毛状根的产生（ｂａｒ＝２．５ｒａｍ）。箭头所指为幼嫩毛状根

ｃ：柠檬毛状根密集丛生，外植体强烈愈伤化成为恶性瘤（ｂａｒ＝１．０ｃｍ）。

ｄ：枳毛状根密集丛生（ｂａｒ＝１．０ｃｍ）。

ｅ：柠檬毛状根从子叶近轴端长出（ｂａｒ＝Ｏ．５ｃｍ）。箭头所指为予叶近轴端

Ｐｌａｔｅ１

Ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｔｉｃｐｒｏｃｅｓｓ

ｏｆ

ｈａｉｒｙ

ｒｏｏｔｓｏｆｃｉｔｒｕｓ

ａ：Ｎｅｗｌｙ

ｉｎｄｕｃｅｄ

１璩ｉｒｙｒｏｏｔｓ

ｏｆｌｅｍｏｎｉｎｔｈｅｉｒ

ｉｎｆａｎｃｙ（ｂａｒ２２．０ｒａｍ）．Ａｒｒｏｗｈｅａｄｓ

ｐｏｉｎｔ

ｔｏｉｎｆａｎｔ

ｈａｉｒｙ

ｒｏｏｔｓ

ｂ：Ｎｅｗｌｙ

ｉｎｄｕｃｅｄ

ｈａｉｒｙｒｏｏｔｓ

ｏｆｔｒｉｆｏｌｉａｔｅ

ｏｒａｎｇｅｉｎｔｈｅｉｒ

ｉｎｆａｎｃｙ（ｂａｒ２２．５ｒａｍ）

Ａｒｒｏｗｈｅａｄ

ｐｏｉｎｔｔｏｉｎｆａｎｔ

ｈａｉｒｙｒｏｏｔ

ｃ：Ｈａｉｒｙ

ｒｏｏｔｓｏｆｌｅｍｏｎｔｕｆｔｄｅｎｓｅｌｙ，ａｎｄｅｘｐｌａｎｔｓ

ｃｉｃａｔｒｉｚｅｔｏｍａｌｉｇｎａｎｔ

ｔｕｒｎｅｒｓ（ｂａｒ２

１．０ｅｒａ）．

ｄ：Ｈａｉｒｙ

ｒｏｏｔｓｏｆｔｒｉｆｏｌｉａｔｅ

ｏｒａｎｇｅ

ｔｕｆｔ

ｄｅｎｓｅｌｙＣｏａｒ。１．０ｃｍ）．

ｅ：Ｈａｉｒｙ

ｒｏｏｔｓｏｆｌｅｍｏｎ

ｏｒｉｇｉｎａｔｅｄ

ｆｒｏｍｔｈｅａｄａｘｉａｉ

ｐａｒｔ

ｏｆｃｏｔｙｌｅｄｏｎ（ｂａｒ。Ｏ．５ｃｍ）．

Ａｒｒｏｗｈｅａｄ

ｐｏｉｌｌｔ

ｔｏｔｈｅａｄａｘｉａｌ

ｐａｒｔ

ｏｆ

ｅｏｔｙｌｅｄｏｎ

圈版２柠檬毛状根的形态变器性和形态多群往

蓬叛２柠檬毛获擐的形悫交黪鳇鞠形态多襻牲（发校农抒甍Ａ４ｔ蘩拣）

Ｐｌａｔｅ２Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉ罐ｖａｒｉａｔｉｏｎａｎｄ

ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ

ｏｆｌｅｍｏｎ

ｈａｉｒｙ

ｒｏｏｔｓｉｎｄｕｃｅｄ

ｂｙ

ＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｒｈｉｚｏｇｅｎｅＡ４ｔ

ｓｔｒａｉｎ。（Ｂａｒ１．０ｅｍ）

圈版３柠檬毛状根的生长特点

图版３柠檬镳状根的生长特点

箭头（图ｂ，ｃ）指示接触不到培养基的而停此延长的新根．根尖愈伤化，呈现短钢刷状。

Ｂａｒ（ａ，ｂ）；２．０ｃｍ，Ｂａｒ（ｃ）；１．０ｃｍ

Ｐｌａｔｅ３Ｇｒｏｗｔｈｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｌｅｍｏｎ

ｈａｉｒｙ

ｒｏｏｔｓ

Ａｒｒｏｗｈｅａｄｓ

ｐｏｉｎｔｔｏｔｈｅ

ｎｅｗｌｙ

ｂｒａｅｈｅｄｓｕｂｏｒｄｉｎａｔｅ妇ｒｙｒｏｏｔｓｏｆｌｅｍｏｎ，ｗｈｉｃｈ

ｄｉｓｐｌａｙ

ｓｈｏｒｔ－ｓｔｅｅｌｙ－ｂｒｕｓｈｅｄ

ｓｈａｐｅｓ

ｃａｕｓｅｄ

ｂｙ

ｎｕｔｒｉｅｎｔ

ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ，ａｎｄ

ｃｉｃａｔｒｉｚｅ

ｒｅｓｕｌｔａｎｔｌｙ．

图版４珠状基急囊霉等柠檬毛状撮豹双重培养过程

阑版４珠状隧孢囊霉与柠檬毛状根的双麓培养过程

ａ：骧状巨孢纛霉建子葫发方式（４７×＞建予萌发２条蔻丝

ｂ：辣状匿孢囊霉孢子蘸发穷茂（１００×）孢予蘸发ｌ条菌丝

ｃ：菌丝的生长极性（４０×）

ｄ：菌丝顶端形成辅助细胞（４０Ｘ）

ｅ：受伤菌丝融念戒Ｄ环型终构（４０×）

ｆ：蓥丝接遥毫狭棱分校壤热（４０Ｘ）

ｇ：

菌丝形成扇状结构（４０×）

ｈ：菌丝对毛状根的侵染（１５Ｘ）箭头所指为侵入点

ｉ：裁丝紧密缝绕成菌丝团（４０×）箭头所指为侵入点

ｊ：双重培养耱缓强蓥丝形成分棱获汲数缝穆

（４０Ｘ）庭线蠹势分援凌穰竣络稳

ｋ：ｇ限帝８璺ｌ蓠熊（４０Ｘ）

１：具有ｇ限制激菌丝的孢予（１５ｘ）

ｍ：珠状巨孢囊孵和毛状根形成的菌根（１００ｘ）箭头所指为内擞菌丝

Ｐｌａｔｅ

４Ｐｒｏｃｅｓｓｏｆｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｏｆｄｕａｌｃｕｌｔｕｒｅｏｆ

ｈａｉｒｙｒｏｏｔｓｏｆｌｅｍｏｎａｓｓｏｃｉａｔｅｄ

ｗｉｔｈ

Ｇｉｇａｓｐｏｒａｍａｒｇａｒｉｔａ

ａ：Ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｍｏｄｅｌ

Ｇｉ，ｍａｒｇａｒｉｔａｓｐｏｒｅ毯７ｘ）２玛批ｇｅｒｍｉｎａｔｅｄｆｒｏｍ

ｓｐｏｒｅ

ｂ：Ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ

ｍｏｄｅｌＧＬ

ｍａｒｇａｒｉｔａｓｐｏｒｅ（１００ｘ）ｌ

ｈｙｐｈａ

ｇｅｒｍｉｎａｔｅｄ

ｆｒｏｍ

ｓｐｏｒｅ

ｃ：Ｐｏｌａｒｉｔｙ

ｂｅｈａｖｉｏｒ

ｏｆｈｙｐｈａｌｇｒｏｗｔｈｐ０×）

ｄ：Ａｕｘｉｌｉａｒｙ

ｃｅｉｌｓｆｏｒｍｅｄＯｉｌｔｈｅ

ｈｙｐｈａｌｔｉｐｓ（４０×）

式Ｄ

ｌｏｏｐ

ｓｔｒｕｅＲｉｒｅｆｏｒｍｅｄｂｙ玛噙畦ａｍａｌｇａｍａｔｉｏｎｉｎｂｒｕｉｓｅ嵇０×）

ｆ‘Ｍｏｒｅ

ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆＨｙｐｈａｌ

ｂｒａｎｃｈｅｓｗｉｔｈｔｈｅｉｒ

ａｄｊａｃｅｎｃｙｔｏ．１ａａｉｒｙｒｏｏｔ（４０×）

ｇ：Ｆａｎ—ｌｉｋｅ

ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｆｏｒｍｅｄ

ｂｙｈｙｐｈａｅ（４０ｘ）

ｈ：Ｈｙｐｈａｌｉｎｆｅｃｔｉｏｎｔｏｈａｉｒｙｒｏｏｔ（１５ｘ）Ａｒｒｏｗｈｅａｄｓｐｏｉｎｔｔｏｔｈｅｉｎｆｅｃｔｉｏｎｐｏｉｎｔｓ

ｉ：Ｄｅｎｓｅｌｙｐａｃｋｅｄｃｏｉｌａｄｊａｃｅｎｔ协ｒｏｏｔ（４０ｘ）Ａｒｒｏｗｈｅａｄｓｐｏｉｎｔ

ｔｏｔｈｅｉｎｆｅｃｔｉｏｎ

ｐｏｉｎｔｓ

ｊ：Ｂｒａｎｃｈｅｄ

ａｂｓｏｒｂｉｎｇ

ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｆｏｒｍｅｄ

ｂｙ

ｅｘｔｒａ－ｈｙｐｈａｅ

ｉｎ

ｄｕａｌ

ｃｕｌｔｕｒｅ（４０ｘ）

ＢＡＳｉｓｅｎｃｉｒｃｌｅｄ

ｂｙ

ｂｒｏｋｅｎｌｉｎｅ

ｋ：ｇ

ｒｅｓ仃ｉｃｔｅｄ

ｔｙｐｅ

ｈｙｐｈａｅ（４０ｘ）

ｌ：

Ｓｐｏｒｅ

ｗｉｔｈ

ｇ

ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ

ｔｙｐｅｈｙｐｈａｅ（１５。）

ｍ：Ａｒｂｕｓｃｕｌａｒ

ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａ

ｆｏｒｍｅｄｂｙ

ＧＬｍａｒｇａｒｉｔａ

ａｎｄ

ｈａｉｒｙｒｏｏｔ（１ＯＯ×）

Ａｒｒｏｗｈｅａｄｓ

ｐｏｉｎｔ

ｔｏｔｈｅｉｎｔｅｍａｌ－ｈｙｐｈａｅ

图版４

３９

４１

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Ｇ

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Ｍ

Ｊ，ＳａｉｔｏＭ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ

ｏｆ

ａｌｋａｌｉｎｅ

ｐｈｏｓｐｈｏｔａｓｅｇｅｎｅｓ

ｉｎａｒｂｕｓｅｕｌａｒ

ｍｙｃｏｎ＇ｈｉｚａｓ．ＮｅｗＰｈｙｔｏｌ，２００４，１

６２：５２５－５３４

４０．Ａｚｃｄｒｔ＆ＡｍｂｒｏｓａｎｏＥ，ＣｈａｒｅｓｔＣ。Ｎｕｔｒｉｅｎｔ

ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ

ｉｎ

ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ

ｌｅｔｔｕｃｅ

ｐｌａｎｔｓ

ｕｎｄｅｒ

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ｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓ

ａｎｄ

ｎｉｔｒｏｇｅｎ

ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ＰｌａｎｔＳｃｉ，２００３，１６５：１

１３％１１４５

４１．Ａｚｃｄｎ－ＡｇｕＵａｒＣ，Ｂａｒｅａ

Ｊ

Ｍ．Ａｐｐｌｙｉｎｇｍｙｅｏｒｒｈｉｚａ

ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ

ｔｏ

ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ：ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ

ａｎｄ

ｐｏｔｅｎｔｉａｌｓ．Ｓｅｉｅｎｔｉａ

Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ，１９９７，６８：１－２４

４２．ＢａｇｏＢ，Ａｚｔｏｎ－ＡｇｕｉｌａｒＣ，Ｐｉｃｈａ

Ｙ．Ａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅａｎｄ

ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ

ｄｙｎａｍｉｃｓ

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ｍｙｃｅｌｉｕｍ

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ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｆｕｎｇｕｓ

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ｇｒｏｗｎ

ｕｎｄｅｒｒｎｏｎｏｘｅｎｉｃ

ｃｕｔｔｕｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ．Ｍｙｃｏｌｏｇｉａ，１９９８ａ，９０：５２—６２

４３．ＢａｇｏＢ，Ａｚｄｏｎ－ＡｇｕｉｌａｒＣ，ＧｏｕｌｅｔＡ，Ｐｉｃｈｄ

ＹＢｒａｎｃｈｅｄ

ａｂｓｏｒｂｉｎｇ

ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ（ＢＡＳ）：ａｆｅａｔｕｒｅｏｆ

ｔｈｅｅｘｔｒａｒａｄｉｃａｌ

ｍｙｃｅｌｉｕｍ

ｏｆ

ｓｙｍｂｉｏｔｉｃ

ａｒｂｕｓｃｕｌａｒ

ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｆｕｎｇｉ．ＮｅｗＰｈｙｔｏｌ，１９９８ｂ，

】３９：３７５－３８８

４４．ＢａｇｏＢ，Ｐｆｅｆｆｅｒ

Ｐ

Ｅ，ＡｂｕｂａｋｅｒｌＪｕｎＪ，ＡｌｌａｎｊＷ，Ｂｒｏｕｉｌｌｅｔｔｅ

Ｊ，Ｄｏｕｄｓ

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ａｒｂｕｓｃｕｌａｒ

ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｒｏｏｔｓ

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ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ

ｏｆ

ｇｌｙｃｏｇｅｎ

ａｓｗｅｌｌ

ａＳｌｉｐｉｄ．ｔ）ｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌ，２００３，１３Ｉ：１４９６－１５０７

４５．Ｂａｇｏ

Ｂ，Ｐｆｅｆｆｅｒ

Ｐ

Ｅ，Ｄｏｕｄｓ

ＤＤ，Ｂｍｕｉｌｌｅｔｔｅｊ，ＢｄｃａｒｄＧ，Ｓｈａｃｈａｒ－ＨｉｌｌＹ．Ｃａｒｂｏｎｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｉｎ

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ｍｙｃｏｒｒｌｌｉｚａｌ

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ｍａｇｎｅｄｃ

ｒｅｓｏｎａｎｃｅ

ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ．ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌ，１９９９，１２１：２６３－２７１

４６．ＢａｇｏＢ，Ｐｆｅｆｆｅｒ

Ｐ

Ｅ，Ｓｈａｃｈａｒ－Ｈｉｌｌ

Ｙ．Ｃａｒｂｏｎｍｅｔａｂｏｌｉｓｍａｎｄ

ｔｒａｎｓｐｏｒｔ

ｉｎａｒｂｕｓｃｕｌａｒ

ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｓ．

Ｐｌａｎｔ

Ｐｈｙｓｉｏｌ，２０００，１２４：９２４－９５７

４７

Ｂａｇｏ

Ｂ，Ｐｆｅｆｆｅｒ

Ｐ

Ｅ，Ｚｉｐｆｅｌ

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ｉｎａｒｂｕｓｃｕｌａｒ

ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ

ｆｕｎｇｉ．Ｐｌａｎｔ

ａｎｄ

Ｓｏｉｌ，２００２，２４４：１

８９－１９７

４８．ＢａｇｏＢ，ＶｉｅｒｈｅｉｌｉｇＨ，Ｐｉｃｈ６Ｙ，Ａｚ６０ｎ—ＡｇｕｉｌａｒＣ，Ｎｉｔｒａｔｅ

ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ

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ｍｙｃｅｌｉｕｍ

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ｉｎｔｒａｔａｄｉｃｅｓ

ｇｒｏｗｔｈ

ｉｎ

ｍｏｎｏｘｅｎｉｃｃｕｌｔｕｒｅ．Ｎｅｗ

Ｐｈｙｔｏｌ，１９９６，１３３：２７３－２８０

４９．Ｂａｇｏ

Ｂ．Ｐｕｔａｔｉｖｅｓｉｔｅｓ

ｆｏｒｎｕｔｒｉｅｎｔ

ｕｐｔａｋｅ

ｉｎａｒｂｕｓｃｕｌａｒ

ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｆｕｎｇｉ．Ｐｌａｎｔ

ａｎｄ

Ｓｏｉｌ，２０００．

２２６：２６３－２７４

５０．Ｂ６ｃａｒｄＧＰｉｃｈ６Ｙ

Ｆｕｎｇａｌｇｒｏｗｔｈ

ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ

ｂｙ

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ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｓｙｍｂｉｏｓｉｓ．ＡｐｐｌｉｅｄａｎｄＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，１９８９，９：２３２０—２３２５

５１．Ｂ６ｃａｒｄＧＤａｖｉｄＤ

Ｄ，Ｐｆｅｆｆｅｒ

ＰＥ．Ｅｘｔｅｎｓｉｖｅｉｎｖｉｔｒｏ

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１９９２，３：８２１－８２５

５２．Ｂ６ｃａｒｄＧＦｏｒｔｉｎ

Ｊ

Ａ．Ｅａｒｌｙｅｖｅｎｔｓｏｆｖｅｓｉｃｕｌａｒ－ａｒｂｕｓｃｕｌａｒ

ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａ

ｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｎＲｉＴ－ＤＮＡ

ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｒｏｏｔｓ．Ｎｅｗ尸细ｔｏｌ，１９８８，１０８：２１１－２１８

５３．ＢｉＹ

Ｌ，Ｌｉ

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Ｐ．Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ

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ａｒｂｕｓｃｕｌａｒ

ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｆｕｎｇｕｓ

ＧｌｏｍｕａｓｉｎｕｏｓｕｍａｎｄＲｉＴ－ＤＮＡ－ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｃａｒｒｏｔｒｏｏｔｓ．Ｐｌａｎｔ

ａｎｄＳｏｉｌ，２００４，２６１：２３９－２４４

５４．ＢｉｄａｒｔｏｎｄｏＭ

Ｉ，ＲｅｄｅｅｋｅｒＤ，ＨＵｒｌ

Ｉ，ＷｉｅｍｋｅｎＡ，Ｂｒｕｎｓ

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Ｄ，ＤｏｍｉｎｉｎｇｕｅｚＬ，Ｓ６ｒｓｉｃＡ，ＬｅａｋｅＪ，

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Ｊ．Ｅｐｉｐａｒａｓｉｔｉｃｐｌａｎｔｓｓｐｅｃｉａｌｉｚｅｄｏｎａｒｂｕｓｃｕｌａｒ

ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｆｕｎｇｉ．Ｎａｔｕｒｅ，２０００，

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５５

ＢｌｅｅＫＡ，ＡｎｄｅｒｓｏｎＡＪ．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆａｒｂｕｓｃｕｌａｒｆｏｒｍａｔｉｏｎｂｙｃａｒｂｏｎｉｎｔｈｅ

ｐｌａｎｔ．Ｐｌａｎｔ以１９９８，

１６（５）：５２３－５３０

５６．Ｂｏｉｓｓｏｎ—Ｄｅｍｉｅｒ

Ａ，ＣｈａｂａｕｄＭ，ＧａｒｅｉａＦＩＢ６ｃａｒｄ

Ｇ，ＲｏｓｅｎｂｅｒｇＣ，Ｂａｒｋｅｒ

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ｓｙｍｂｉｏｔｉｃ

ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｓ．ＭｏｌＰｌａｎｔ－Ｍｉｃｒｏｂｅ

Ｉｎｔｅｒａｃｔ，２００１，１４（６）：６９５－７００

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Ｂ，Ｇｉａｎｉｎａｚｚｉ

Ｓ．Ｓｕｒｆａｃｅ－ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎｏｆＧｌｏｍｕｓｍｏｓｓｅａｅ

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ｆｏｒ

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ｅｎｄｏｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｔｉｏｎ

ｉｎｖｉｔｒｏ．Ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａ，１９９９，９：６５－６８

５８．Ｃｌｉｑｕｅｔ

ＪＢ．ＳｔｅｗａｒｔＧＩｔ．ＡｍｍｏｎｉａａｓｓｉｍｉｌａｔｉｏｎｉｎＺｅａ

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Ｌ．ｉｎｆｅｃｔｅｄｗｉｔｈａ

ｖｅｓｉｃｕｌａｒ－ａｒｂｕｓｃｕｌａｒｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｆｕｎｇｕｓＧｌｏｍｕｓｆａｓｅｉｅｕｌａｔｕｍ．ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌ，１９９３．１０１：８６５－８７１

５９．ＤａｖｉｓＲ

Ｍ，Ｍｅｎｇｅ

ＪＡ．ＩｎｆｉｕｅｎｃｅｏｆＧｌｏｍｕｓｆａｓｃｉｅｕｌａｔｕｓ

ａｎｄｓｏｉｌ

ｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓｏｎＰｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ

ｒｏｏｔｒｏｔｏｆＣｉｔｒｕｓ．ＥｃｏｌｏｇｙａｎｄＥｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ，１９８０，７０（５）：４４７－４５２

６０Ｄｅｃｌｅｒｃｋ

Ｓ．Ａｎｇｅｌｏ－ｖａｎＣｏｐｐｅｎｏｌｌｅ

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Ｇ＿Ｃｒｙｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ

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ｓｐｏｒｅｓ

ｏｆａｎａｒｂｕｓｃｕｌａｒ

ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｆｕｎｇｕｓ．ＮｅｗＰｈｙｔｏｌ，２０００．１４８：１６９－１７６

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Ｓ，Ｄ’ｏｒＤ，ＣｒａｎｅｎｂｒｏｕｃｋＳ．Ｍｏｄｅｌｌｉｎｇ

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ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｆｕｎｇｉ

ｉｎｍｏｎｏｅｎｉｃｃｕｌｔｕｒｅ．Ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａ，２００１，１１：２２５－２３０

６２．ＤｅｖｉＰ．Ｒａｎｉ

Ｓ．Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ

ｉｎｄｕｃｅｄ

ｒｏｏｔｉｎｇ

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ｈｙｂｒｉｄ

ｈｅｌｉａｎｔｈｕｓａｎｎｕＭｓ×Ｈｅ妇ｔｈｕｓｔｕｂｅｒｏｓｕｓ．ＳｃｌｅｎｔｉａＨｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ．２００２．９３：１７９—１８６

６３．ＤｏｕｄｓＤＤ．Ａ

ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ

ｆｏｒｔｈｅｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｏｆＧｌｏｍｕｓ

ｍｏｓｓｅａｅｉｎｄｕａｌｃｕｌｔｕｒｅ

ｗｉｔｈＲｉ

Ｔ．ＤＮＡ－ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｃａｒｒｏｔｒｏｏｔｓ．Ｍｙｅｏｌｏｇｉａ，１９９７，７：５７·６１

６４ＤｏｕｄｓＤＤ．Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ

ｓｐｏｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｂｙ

Ｇｌｏｍｕｓ

ｉｎｔｒａｒａｄｉｃｅｓｉｎｔｈｅ

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ｏｆ

ｇｌｕｃｏｓｅ

ｔｏｔｈｅ

ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａ．

Ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａ，２００２，１２：１６３－１６７

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ＪＭ，Ａｚｅ６ｎ－ＡｇｕｉｌａｒＣ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ

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ａｒｂｕｓｃｕｌａｒｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｓ．ＰｌａｎｔａｎｄＳｏｉｌ，２０００．２２６：２１９－２２５

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ａｎｄｉｔｓｃｏｎｔｒｏｌｉｎｎｅｔｗｏｒｋｓｏｆａｒｂｕｓｃｕｌａｒ

ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｓ．ＦｕｎｃｔｉｏｎａｌＥｃｏｌｏｇｙ，１９９８，１２：４０６－４１２

６７ＦｏｒｔｉｎＪ

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ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｏｎｒｏｏｔ－ｏｒｇａｎｃｕｌｔｕｒｅｓ．Ｃａｎ

ＪＢｏｔ，２００２，８０：１－２０

６８．ＦｒｅｙＢ．ＳｃｈｏｅｐｐＨ．Ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ

ｏｆ

ｎｉｔｒｏｇｅｎｂｙ

ｅｘｔｅｒｎａｌ

ｈｙｐｈａｅ

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ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｆｕｎｇｉ

ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈＺｅａ

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Ｌ．Ｎｅｗ

Ｐｈｙｔｏｌ，１９９３．１２４：２２１－２３０

６９．ＦｕｒｌａｎＶ

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ＪＡ．Ｍｅｄｉａｆｏｒ

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ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｏｆ

ｅｎｄｏ—ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ

ｓｐｏｒｅｓ

７）－ａｎｓＢｒＭｙｅｏｌＳｏｃ，１９８０，７５：３３６－３３８

７０．ＧａｄｋａｒＶＤａｖｉｄ－Ｓｃｈｗａｒｔｚ

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ｆａｃｔｏｒｓｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｈｏｓｔ

ｒｅｅｏｇｕｉｔｉｏｎ．Ｐｌａｎｔ

Ｐｈｙｓｉｏｌ，２００１。１２７：１４９３．１４９９

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ｏｆ

ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｅｎｄｏｇｏｎｅ

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ｂｙ

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ｓｉｅｖｉｎｇ

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ｄｅｃａｆｉｎｇ．ｒｒａｎｓ

ＢｒＭｙｃｏｌＳｏｃ，１９６３，４６：２３５—２４４

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Ｖ，ＡｍｏｕｌｄＣ，ＯｕｆａｔｔｏｌｅＭ，ＡｒａｎｇｏＭ，ＧｉａｎｉｎａｚｚｉＳ．Ｄｉｆｉｅｒｅｎｔｉａ【ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ

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ｍｙｅｏｒｒｈｉｚａｌ

ｆｕｎｇｕｓ

ｉｎ

ｒｏｏｔｃｅｌｌｓｏｆ

ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ

ｔｏｂａｃｃｏ

Ｐｌａｎｔａ，２０００，２１１：６０９－６１３

７３．Ｇｉｒｉ

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ｒｏｏｔｓ：ｒｅｃｅｎｔｔｒｅｎｄｓ

ａｎｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ

Ａｄｖａｎｃｅｓ，２０００，１８：１—２２

７４．Ｇｉｕｓａｐｐｉｎａ

Ｆ，ＭａｓｓｉｍｏＲＰａｏｌａ

Ｌ，Ｅｍｉｌｉａ

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７６．ＧｒａｈａｍｊＨ，ＤｕｎｃａｎＬＷ’ＥｉｓｓｅｎｓｔａｔＤＭ．Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅａｌｌｏｃａｔｉｏｎ

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ａｎｄ

ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ

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Ｐｈｙｔｏｌ，１９９７，１３５：３３５—３４３

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Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ

Ｅｃｏｌｏｇｙ，１９９１，

５：７７３—７７９

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ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｓ．Ｎｅｗ

Ｐｈｙｔｏｌ，１９９８，１４０：１０３—１

１０

７９．ＧｒａｈａｍＪ

Ｈ，Ｅｉｓｓｅｎｓｔａｔ

ＤＭ．Ｈｏｓｔ

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ａｎｄＳｏｉｌ，１９９４，１５９：１７９－１８５

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Ｈ，Ｌｅｏｎａｒｄ

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Ｐｈｙｓｉｏｌ

１９８１，６８：５４８－５５２

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ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ．ＮｅｗＰｈｙｔｏｌ，１９８５，１０１：６６７－６７６

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ｂｙ

ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｗｉｔｈｔｈｅＲｉ

ｐｌａｓｍｉｄｏｆＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ．Ｃａｎ

ｄＢｏｔ，１９８８，２６：２５８１－２５８５

１３０．Ｔａｙｌｏｒ

Ｊ，Ｈａｒｒｉｅｒ

Ｌ．Ａ

ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ

ｏｆｎｉｎｅ

ｓｐｅｃｉｅｓ

ｏｆａｒｂｕｓｃｕｌａｒｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｆｕｎｇｉｏｎｔｈｅ

ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ

ａｎｄｎｕｔｒｉｔｉｏｎ

ｏｆｍｉｃｒｏｐｒｏｐａｇａｔｅｄ

ＲｕｂｕｓｉｄａｅｕｓＬ．ＣＶ．ＧｌｅｎＰｒｏｓｅｎ（ＲｅｄＲａｓｐｂｅｒｒｙ）．

Ｐｌａｎｔａｎｄ

Ｓｏｉｌ，２０００，２２５：５３·６１

１３１．Ｔａｙｌｏｒ

Ｔ

Ｎ，Ｒｅｍｙ

Ｗ：Ｈａｓｓ

Ｈ，ＫｅｒｐＨ．Ｆｏｓｓｉｌａｒｂｕｓｃｕｌａｒ

ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｅ

ｆｒｏｍｔｈｅ

ｅａｙｌｙ

Ｄｅｖｏｎｉａｎ．

Ｍｙｃｏｌｏｇｉａ，１９９５，８７：５６０－５７３

１３２．Ｔｅｐｆｅｒ

Ｄ．Ｇｅｎｅｔｉｃｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ

ｕｓｉｎｇＡｇｒｏｂｏｃｔｅｒｉｕｍｒｈ担ｏｇｅｎｅｓ．Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉａ

Ｐｌａｎｔａｒｕｍ，１９９０，

７９：１４０一１４６

１３３．Ｔｅｓｔｅｒ

Ｍ，Ｓｍｉｔｈ

Ｓ

Ｅ，Ｓｍｉｔｈ

ＦＡ．Ｔｈｅｐｈｅｎｏｍｅｎｏｎｏｆ“ｎｏｎｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ”ｐｌａｎｔｓ．ＣａｎＪＢｏｔ，１９８７，

６５：４１９—４３１

１３４．ＴｈｏｍｓｏｎＢ

Ｄ，Ｒｏｂｓｏｎ

Ａ

Ｄ，ＡｂｂｏＲ

ＬＫ．Ｍｙｅｏｒｒｈｉｚａｓ

ｆｏｒｍｅｄ

ｂｙＧｉｇａｓｐｏｒａｃａｌｏｓｐｏｒａ

ａｎｄ

Ｇｌｏｍｕｓｆａｓｃｉｅｕｌａｔｕｍｏｎｓｕｂｔｅｒｒａｎｅａｎｃｌｏｖｅｒｉｎｒｅｌａｔｉｏｎｔｏｓｏｌｕｂｌｅ

ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ

ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｉｎ

ｒｏｏｔｓ．Ｎｅｗ

Ｐｈｙｔｏｌ，１９９０，１

１４：２１７·２２５

１３５．ＵｅｔａｋｅＹ，ＫｏｊｉｍａＴ，ＥｚａｗａＴ，Ｓａｉｔｏ

Ｍ．Ｅｘｔｅｎｓｉｖｅｔｕｂｕｆａｒｖａｃｕｏｌｅ

ｓｙｓｔｅｍ

ｉｎａｎａｒｂｕｓｃｕｌａｒ

ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌｆｕｎｇｕｓ，Ｇｉｇａｓｐｏｒａｍａｒｇａｒｉｔａ．Ｎｅｗｅｈｙｔｏｌ，２００２，１５４：７６１—７６８

１３６．ＶａｌｅｎｔｉｎｅｌＡ

Ｊ，Ｏｓｂｏｒｎｅ

ＢＡ，ＭｉｔｃｈｅｌｌＤＴ．Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓｂｅｔｗｅｅｎ

ｐｈｏｓｐｈｏｒｕｓｓｕｐｐｌｙ

ａｎｄｔｏｔａｌ

ｎｕｔｒｉｅｎｔ

ａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙｏｎｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ

ｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ，ｇｒｏｗｔｈ

ａｎｄ

ｐｈｏｔｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ

ｏｆｃｕｃｕｍｂｅｒ．

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