线栓法制作大鼠大脑中动脉梗阻模型

线栓法制作大鼠大脑中动脉梗阻模型

吴桂甫;凌兰兴;杨小叶;杨斌;王柳萍;梁永红

【摘 要】目的:制作大鼠大脑中动脉梗阻模型.方法:健康成年雄性SD大鼠20只,随

机分为假手术对照组和模型组,每组10只.模型组大鼠采用线栓法制作大鼠大脑中

动脉梗阻模型,假手术对照组大鼠只做颈动脉分离手术,不用插入线栓.造模成功后,观

测各组大鼠神经行为学变化,检测各组大鼠脑含水量、脑梗死体积百分比.结果:模型

组大鼠神经行为学评分为(3.60±0.52)分,脑含水量和脑梗死体积百分比分别为

(34.6±6.2)%,(28.2±4.4)%,假手术对照组大鼠脑含水量为(13.5±1.3)%,无脑梗死,

神经行为学正常.结论:线栓法制作大鼠大脑中动脉梗阻模型成功.

【期刊名称】《广西医科大学学报》

【年(卷),期】2013(030)003

【总页数】2页(P346-347)

【关键词】大脑中动脉梗阻;脑水肿;脑梗死

【作 者】吴桂甫;凌兰兴;杨小叶;杨斌;王柳萍;梁永红

【作者单位】广西医科大学药学院,南宁,530021;广西医科大学药学院,南

宁,530021;广西医科大学药学院,南宁,530021;广西医科大学药学院,南宁,530021;

广西中医药大学药学院;广西医科大学药学院,南宁,530021

【正文语种】中 文

【中图分类】R-332

缺血性脑中风是指脑血管狭窄或闭塞，导致脑血流阻断而使脑组织发生缺血缺氧、

软化甚至坏死，致使脑血管功能障碍，引起相关症状［1］。而建立指标控制理想

的活体脑缺血动物模型是研究脑缺血病理生理变化和评价有效干预措施的手段。线

栓法制备的大鼠局灶性大脑中动脉闭塞模型具有不开颅、效果肯定、且可以控制缺

血与再灌注时间的特点，该模型得到广泛应用。因此，本实验将研究重点放在大鼠

局灶性大脑中动脉闭塞模型的制备上，为下一步药理实验提供技术支持。

1 实验材料

1.1 实验动物：健康的雄性SD大鼠，SPF级，20只，体重（260±20）g，广西

医科大学动物实验中心提供，试验动物生产许可证SCXK（桂）2009-0002，试验

动物使用许可证SCXK（桂）2009-0004。

1.2 实验药品与试剂：水合氯醛（成都市科龙化工试剂厂，批号：20100614）；

电热恒温干燥箱（长沙医疗器械厂）；氯化钠注射液（贵州天地药业有限责任公司，

批号：A120700114）；TTC染色剂（南京建成生物工程研究所）。

2 实验方法

2.1 大鼠大脑中动脉梗阻模型的建立：随机抽取10只SD雄性大鼠，作为假手术

对照组，其余10只为模型组。模型组大鼠腹腔注射10%水合氯醛（350 mg／kg）

麻醉后，仰卧固定在手术台上，75%乙醇消毒颈部皮肤，正中颈部切口，分离并

暴露右侧颈总动脉（CCA）、颈外动脉（ECA）、颈内动脉（ICA），结扎ECA

及其分支，在术野中ECA近心端、CCA近心端、ICA远心端分置动脉夹夹闭。于

ECA近分叉处用眼科手术剪作一小切口，插入制备好的栓线，扎紧备线，松开

ICA远心端动脉夹，使线栓入ICA，根据动物大小插入深度在18.0～20.0 mm，

越过大脑MCA，到达ACA起始部，阻断MCA血液供应制成大脑中动脉梗阻动

物模型，松开CCA近心端动脉夹，缝合皮肤切口［2］。麻醉清醒后大鼠出现以

左前肢为主的偏瘫作为模型成功的标志。假手术对照组大鼠只做颈总动脉分离手术，

不用插入线栓。

2.2 观察指标及检测方法：造模成功3 d后，大鼠参照Longa评分标准［3］进行

神经行为学评分：无神经缺损症（0分）；提尾巴对侧前肢内收，不能完全伸直

（1分）；爬行时内对侧旋转、划圈（2分）；站立时内对侧倾倒（3分）；无自

主活动伴意识障碍（4分）；死亡（5分）。处死大鼠，取大脑组织，TTC染色，

染色后，参照文献［4］方法分别称重，计算梗死区脑质量占全脑质量的百分比

（%）作为梗死范围。取大脑组织，称重，再置于烘箱中烘干，称重，根据湿重与

干重计算脑含水量。公式为：脑含水量＝（湿重-干重）／湿重×100%。

2.3 统计学处理：应用SPSS13.0软件进行统计分析。数据均以±s表示，经方差

齐性检验，方差齐者采用t检验，方差不齐者采用矫正t检验进行统计学处理。P

＜0.05为差异有统计学意义。

3 结 果

3.1 大脑中动脉梗阻大鼠神经行为学的变化：大脑中动脉梗阻大鼠麻醉清醒后即有

偏瘫样症状出现。主要表现为不同程度的手术对侧前肢内收，肩内旋，肌张力降低，

推右肩向对侧移动，抵抗阻力降低，还出现不停地向一侧转圈，甚至有些动物出现

向对侧倾倒或不能自主活动现象，神经行为学评分为（3.6±0.52）分，假手术对

照组神经行为正常。

3.2 大脑中动脉梗阻大鼠脑梗死体积百分比与脑含水量的变化：模型组大鼠脑脑梗

死体积百分比和脑含水量均显著增高，与假手术对照组比较差异均有统计学意义

（P＜0.01），

见表1。

表1 2组大鼠脑梗死体积百分比与脑含水量比较（±s）注：与假手术对照组比较，

＃P＜0.01组别 n 脑梗死体积 脑含水量百分比（%） （%）假手术对照组10

0±0 13.5±1.3模型组 9 28.2±4.4 34.6±6.2＃

3.3 2组大鼠大脑TTC染色结果：造模后3 d，断头取脑，冰冻后距额极2 mm处

向后作5个冠状切片，厚约2 mm。置于2%TTC溶液中，37℃避光染色。结果

显示与假手术对照组相比，模型组大鼠脑梗死明显，约占大脑的1／3，见图1、

图2。

图1 假手术对照组

图2 模型组

4 讨 论

脑梗死是当今世界危害人类生命健康的重大疾病之一，目前除发病急性期3～4.5

h内溶栓外，尚无更为有效的治疗方法，所以针对脑梗死的研究至今是一大热点，

而研究过程中是否具有一种稳定、可靠的动物模型显得极为重要。自1989年

Longa等［3］使用线栓法制备大鼠脑梗死模型以来，该模型在脑梗死的研究中得

到广泛运用。血管腔内线栓法制作大鼠急性模型，不用开颅从而避免脑外伤，可以

实现再灌注，能很好地模拟临床缺血脑卒中的情况，被广泛应用于缺血性脑卒中的

研究中。

在临床和动物实验研究中，选择合适的工具进行神经功能评估有重要意义。动物实

验中，评价神经功能缺损的方法有许多，但是大多数方法得出的结论与梗死体积不

成线性关系［5］。本实验采用Longa评分标准评定大鼠神经功能，发现该方法

所得结果与梗死体积也成线性关系，方法简单易操作。颅腔是个基本密闭的骨性结

构，其内主要由脑组织、血液和脑脊液3种物质所充满。平时颅内压处于动态平

衡中，当这3种内容物中任何一种体积增长时，必然导致其他2种内容物代偿性

缩减。当超出了这种代偿功能的限度时，就导致颅内压增高，使脑组织受压、缺血、

缺氧甚至坏死。脑组织对缺血缺氧极为敏感，在脑动脉闭塞6 h以内，组织改变尚

不明显，属可逆性。但8～48 h以后，病变部位出现明显的脑肿胀，脑沟变窄，

脑回变扁，灰、白质界限不清。7～14 d脑组织出现软化、坏死，并开始液化。因

此，严格地说，不管梗塞的脑血管大小只要超过6 h，而其周围的血管又不能代偿

供血时，都可导致不同程度的脑水肿［6，7］。本实验的数据表明，大脑中动脉

梗阻模型大鼠脑含水量比假手术对照组相比明显提高，说明模型组大鼠出现明显的

脑水肿现象。TTC染色结果也表明模型组大鼠有明显的脑缺血和梗死。

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