急性子中balsaminone A和balsaminone B对人肺癌A549细胞生长及周期的影

植物资源与环境学报２０１ １，２０（２）：１５—１８

Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ

急性 子中ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ａ和ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ｂ对

人肺癌Ａ５４９细胞生长及周期的影响

裴 慧 ，钱士辉 ，①

（ｉ．南京中医药大学，江苏南京２１００４６；２．江苏省中医药研究院，江苏南京２１００２８）

摘要：应用ＭＴ１１法和流式细胞仪研究了急性子（Ｉｍｐａｔｉｅｎｓ ｂａｌｓａｍｉｎａ Ｌ．）中双萘呋喃一７，１２一酮类化合物ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ

Ａ和ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ｂ对人肺癌Ａ５４９细胞生长及周期的影响。结果表明：２Ｏ、４Ｏ、６０和８０ ｍｏ１．Ｌ～ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ａ和

Ｂ作用４８ ｈ均对Ａ５４９细胞生长的抑制作用显著（Ｐ＜０．０５），其吸光值均显著低于阴性对照且随浓度的提高逐渐降

低，但均高于阳性对照（１００ ｍｇ・Ｌ－１５－氟尿嘧啶）；各处理组Ａ５４９细胞的生长抑制率均低于阳性对照组，其中

６０和８０ ｔｘｍｏｌ・Ｌ‘。ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ａ处理组的生长抑制率接近阳性对照。ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ａ作用４８ ｈ使ＤＮＡ合成前期

（Ｇ。／Ｇ 期）的细胞比例减少，ＤＮＡ合成期（Ｓ期）和ＤＮＡ合成后期（Ｇ：／Ｍ期）的细胞比例增加，但无明显的量效关

系；而ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ｂ作用４８ ｈ使Ｇ。／Ｇ，期的细胞比例减少，ｓ期的细胞比例明显增加，呈明显的量效关系。研究结

果显示：ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ａ和Ｂ对Ａ５４９细胞的生长均具有显著的抑制作用，二者的作用机制可能与诱导细胞周期阻滞

有关但有一定的差异

关键词：急性子；ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ａ；ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ｂ；人肺癌Ａ５４９细胞；生长抑制；细胞周期

中图分类号：Ｑ９４９．７５５．７；Ｒ２８５．５ 文献标志码：Ａ 文章编号：１６７４－７８９５（２０１１）０２－００１５－０４

Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ａ ａｎｄ ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ｂ ｆｒｏｍ Ｉｍｐａｔｉｅｎｓ ｂａｌｓａｍｉｎａ ｓｅｅｄ ｏｎ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｃｙｃｌｅ

ｏｆ ｈｕｍａｎ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ Ａ５４９ ｃｅｌｌ ＰＥＩ Ｈｕｉ ｒ，ＱＩＡＮ Ｓｈｉ．ｈｕｉ ，①（１．Ｎａｎｊｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ

Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎａｎｊｉｎｇ ２１００４６，Ｃｈｉｎａ；２．Ｊｉａｎｇｓｕ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，

Ｎａｎｊｉｎｇ ２１００２８，Ｃｈｉｎａ）， Ｐｌａｎｔ Ｒｅｓｏｕｒ．＆Ｅｎｖｉｒｏｎ．２０１１，２０（２）：１５—１８

Ａｂｓｔｒａｃｔ： ｒｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｎａｐｈｔｈｏｆｕｒａｎ－７，１２一ｄｉｏｎｅ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ，ｗｈｉｃｈ ａｒｅ ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ａ ａｎｄ

ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ｂ．ｆｒｏｍ Ｉｍｐａｔｉｅｎｓ ｂａｌｓａｍｉｎａ Ｌ．ｓｅｅｄ ｏｎ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｃｙｃｌｅ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ Ａ５４９ ｃｅｌｌ

ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ ｂｙ ＭＴＴ ａｓｓａｙ ａｎｄ ｌｆｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗ ｔｈａｔ ｂｏｔｈ ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ａ ａｎｄ Ｂ ｗｉｔｈ ２０，

４０，６０ ａｎｄ ８０ ＬＬｍ０１．Ｌ ｈａｖｅ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ Ａ５４９ ｃｅｌｌ ａｆｔｅｒ ４８ ｈ（Ｐ＜

０．０５）．ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ ｖａｌｕｅｓ。ｗｈｉｃｈ ｇｒａｄｕａｌｌｙ ｄｅｃｒｅａｓｅ ｗｉｔｈ ｅｎｈａｎｃｉｎｇ ｏｆ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ，ａｌｌ ａｒｅ

ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｏｓｅ ｏｆ ｔｈｅ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｂｕｔ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｏｓｅ ｏｆ ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ（１ ００ ｍｇ・Ｌ～５一

ＦＵ １．Ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ Ａ５４９ ｃｅｌｌ ｉｎ ａｌｌ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｇｒｏｕｐｓ ｉｓ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ

ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ．ｉｎ ｗｈｉｃｈ．ｔｈａｔ ｉｎ ６０ ａｎｄ ８０ ｐ￣ｍｏｌ・Ｌ。。ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ａ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｇｒｏｕｐｓ ｉｓ ｃｌｏｓｅ ｔｏ ｔｈａｔ ｏｆ

ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏ１．Ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ａ ｌｅａｄｓ ｔｏ ｄｅｃｒｅａｓｉｎｇ ｏｆ ｃｅｌｌ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ ｉｎ ＤＮＡ ｐｒｅｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｐｈａｓｅ

（Ｇｏ／Ｇｌ ｐｈａｓｅ）ａｎｄ ｔｏ ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ ｏｆ ｃｅｌｌ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ ｉｎ ＤＮＡ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｐｈａｓｅ（Ｓ ｐｈａｓｅ）ａｎｄ ＤＮＡ

ｐｏｓｔｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｐｈａｓｅ ｆ Ｇ，／Ｍ ｐｈａｓｅ）ａｆｔｅｒ ４８ ｈ ｗｉｔｈ ａｎ ｕｎｏｂｖｉｏｕｓ ｄｏｓｅ—ｅｆｆｅｃｔ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ．Ｗｈｉｌｅ

ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ｂ １ｃａｄｓ ｔｏ ｄｅｃｒｅａｓｉｎｇ ｏｆ ｃｅｌｌ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ ｉｎ Ｇｎ／Ｇ】ｐｈａｓｅ ａｎｄ ｔｏ ｅｖｉｄｅｎｔｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ ｏｆ ｃｅｌｌ

ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ ｉｎ Ｓ ｐｈａｓｅ ａｆｔｅｒ ４８ ｈ ｗｉｔｈ ａｎ ｏｂｖｉｏｕｓ ｄｏｓｅ．ｅｆｆｅｃｔ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ．Ｉｔ ｉｓ ｓｕｇｇｅｓｔｅｄ ｔｈａｔ ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ

Ａ ａｎｄ Ｂ ｈａｖｅ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ Ａ５４９ ｃｅｌ１．ｔｈｅｉｒ ａｃｔｉｏｎ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｍａｙ ｂｅ ｒｅｌａｔｅｄ

ｔｏ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ａｒｒｅｓｔ ｂｕｔ ｔｈｅｉｒ ｅｆｆｅｃｔｓ ｅｘｉｓｔ ｓｏｍｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｓｅｅｄ ｏｆ Ｉｍｐａｔｉｅｎｓ ｂａｌｓａｍｉｎａ Ｌ．；ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ａ；ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ｂ；ｈｕｍａｎ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ Ａ５４９

ｃｅｌｌ；ｇｒｏｗｔｈ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ；ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ

收稿日期：２０１０—１２－２３

基金项目：江苏省公益研究项目（ＢＭ２００６１０４）

作者简介：裴慧（１９８７一），女，江苏连云港人，硕士研究生，主要从事中药品质评价方面的研究。

①通信作者Ｅ－ｍａｉｌ：ｎｊｑｓｈ２００５＠１２６．ｔｏｍ

１６ 植物资源与环境学报 第２０卷

中药急性子为凤仙花科（Ｂａｌｓａｍｉｎａｃｅａｅ）植物风

仙花（Ｉｍｐａｔｉｅｎｓ ｂａｌｓａｍｉｎａ Ｌ．）的干燥成熟种子…，中

国大部分地区均有分布，资源丰富。急性子具有破血

软坚、消积的功效，其味微苦、性温，有小毒；人肝、脾

经、降气行瘀，主治经闭、噎膈、腹部肿块、骨哽咽喉和

外疡坚块…；临床上可用于避孕 ，终止早孕 ，食

管贲门癌及梗阻、癌症、肿瘤 ，闭经和骨质增生

等 ］。现代药理学研究表明：急性子具有促透皮、抗

生育、抗肿瘤及抗菌等作用。

细胞异常增殖是恶性肿瘤的生物学特征之一，检

测药物是否影响肿瘤细胞的增殖活性通常是筛选抗

肿瘤药物的主要方法。Ｍ１Ｔ法（噻唑蓝法）是最为常

用的方法之一，该法灵敏度高，线性关系好，简便、经

济、快速，广泛应用于大规模抗肿瘤药物筛选、细胞毒 度３７ 、饱和湿度、５％ＣＯ 培养箱内培养。细胞呈

性实验以及肿瘤放射敏感性测定等方面 Ｊ。

作者以人肺癌Ａ５４９细胞株为实验对象，对从急 ７０％～８０％时传代。实验均在细胞对数生长期进行。

性子中分离得到的双萘呋喃一７，１２一酮类化合物 １．２．２细胞生长抑制率的测定采用ＭＴＦ法 测

ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ａ和ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ｂ体外抑制肿瘤细胞生 定Ａ５４９细胞的生长抑制率。取对数生长期的Ａ５４９

长的作用以及对细胞周期的影响进行研究，以期为抗

肿瘤中药的开发和临床应用提供实验依据。

１ 材料和方法

１．１材料

人肺癌Ａ５４９细胞株购自中国科学院上海生命

科学研究院生物化学与细胞生物学研究所。

急性子购自江苏省盱眙县中药饮片厂，经江苏省

中医药研究院钱士辉研究员鉴定为凤仙花的干燥成

熟种子。采用体积分数８０％和６０％乙醇加热回流提

取，并经溶剂萃取、Ｄ１０１大孔树脂富集、硅胶柱层析、

Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ－２０和ＯＤＳ柱层析以及重结晶等方法获 弃上清液，每孔加入１００ ＩｘＬ ＤＭＳＯ，振荡１０ ｍｉｎ，溶解

得提取物，再经 Ｈ—ＮＭＲ、”Ｃ—ＮＭＲ、ＭＳ、ＩＲ和ｕＶ等

方法鉴定结构，并参照文献［７］的数据鉴定提取物为

ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ａ和ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ｂ，经ＨＰＬＣ检测纯度均

大于９８％。临用时用ＤＭＥＭ培养液分别配制成不同

浓度备用，其中ＤＭＳＯ终浓度小于体积分数０．５％。

主要试剂包括：ＤＭＥＭ完全培养基（美国ＧＩＢＣＯ 于６孔板中，每孑Ｌ ２ ｍＬ细胞悬液；培养２４ ｈ后，处理

公司，批号：４５０５４２）、新生牛血清（兰州民海生物工 组分别添加含不同浓度ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ａ和Ｂ的培养液

程有限公司，批号：０８０５０８）、ＭＴＴ（美国ＡＭＲＥＳＣＯ公

司，批号：０７９３）、胰酶（美国ＡＭＲＥＳＣＯ公司，批号：

０４５８）、碘化吡啶（ＰＩ染液，美国Ｓｉｇｍａ公司）、核糖核 养基２ ｍＬ，重复３次；培养４８ ｈ后分别收集细胞，并

酸酶（美国Ｓｉｇｍａ公司）、ＴｒｉｔｏｎＸ一１００（美国

ＡＭＲＥＳＣＯ公司，批号：０１０３７０４０５）、ＤＭＳＯ（美国

ＡＭＲＥＳＣＯ公司，批号：０１９Ｄ０４０４）和５一氟尿嘧啶（天

津金耀氨基酸有限公司，批号：０７１００５２）。

主要仪器包括：ＨＥＲＡ Ｃｅｌｌ １５０ ＣＯ 细胞培养箱

（美国Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｉｆｃ Ｉｎｃ．）、ＣＫＸ３１ ＳＦ倒置

相差显微镜（日本ＯＬＹＭＰＵＳ公司）、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｉｆｃ

Ｍｕｈｉｓｋａｎ Ｓｐｅｃｔｒｕｍ全波长酶标仪（美国Ｔｈｅｒｍｏ

Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｉｆｃ Ｉｎｃ．）、ＭＨ一１４０３平板振荡器（江苏海

门其林贝尔仪器制造有限公司）和ＦＡＣＳ Ｃａｌｉｂｕｒ流

式细胞仪（美国ＢＤ公司）。

１．２方法

１．２．１ 细胞培养将Ａ５４９细胞接种在含体积分数

１０％灭活小牛血清的ＤＭＥＭ完全培养基上，置于温

单层生长，当细胞单层面积长至培养瓶瓶底面积

细胞，用质量体积分数０．２５％胰酶和质量体积分数

０．０２％ＥＤＴＡ混合消化液消化，用含体积分数１０％灭

活小牛血清的ＤＭＥＭ完全培养基将细胞密度调整至

５￣１０ ｍＬ。。，接种到９６孑Ｌ培养板中，每孔１００ ｉＬＬ细

胞悬液；继续培养２４ ｈ后，吸弃培养液；处理组分别

添加含不同浓度ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ａ和ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ｂ的培

养液９０ Ｌ至终浓度为２０、４０、６０和８０ ｍ０Ｉ．Ｌ，

阴性对照添加含ＰＢＳ的ＤＭＥＭ完全培养基９０ Ｌ，

阳性对照添加含５～氟尿嘧啶的ＤＭＥＭ完全培养基

９０ Ｌ至最终质量浓度１００ ｍｇ・Ｌ～；每处理及阴性、

阳性对照均设６个复孔，并设空白调零孔；继续培养

４８ ｈ，每孔加入５ ｇ・Ｌ Ｍ１Ｔｒ １０ Ｌ；继续培养４ ｈ，吸

结晶；用酶标仪测定波长５７０ ｎｍ处的吸光值（Ａ），实

验重复３次。计算Ａ５４９细胞的生长抑制率，公式

为：生长抑制率＝［（Ａ阴性对照一Ａ用药）／Ａ阴性对照］￣１００％。

１．２．３ 细胞周期检测 取对数生长期的Ａ５４９细胞

制成单细胞悬液，调整细胞密度至１ Ｘ１０ ｍＬ～，接种

２ ｍＬ至终浓度为２０、４０、６０和８０ ｍｏ１．Ｌ～，对照组

添加含体积分数１０％灭活小牛血清的ＤＭＥＭ完全培

于１ ５００ ｒ・ｍｉｎ 离心５ ｍｉｎ，ＰＢＳ洗涤后，经３００目

第２期 裴慧，等：急性子中ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ａ和ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ｂ对人肺癌Ａ５４９细胞生长及周期的影响 １７

尼龙网过滤，调整细胞密度至１×１０。ｍＬ一；加入由５０

ｍＬ・Ｌ ＰＩ和２５ ｍｇ・Ｌ ＲＮａｓｅ Ａ组成的染液１ ｍＬ，

４ ＣＩ＝避光染色３０ ｍｉｎ后采用流式细胞仪检测，参照文

表１不同浓度ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ａ和ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ｂ对人肺癌Ａ５４９细胞

的生长抑制作用（ ±ｓＤ）

Ｔａｂｌｅ １ Ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ

ｂａｌｓａｍｉｎｏ

ｎｅ Ａ ａｎｄ ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ｂ ｏｎ ｈｕｍａｎ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ Ａ５４９ ｃｅｌｌ

．

（ ±ＳＤ）¨

献［９］的方法分析Ａ５４９细胞的周期。

１．３数据统计处理

采用ＳＰＳＳ １５．０统计软件对数据进行单因素方

差分析，Ｐ＜０．０５表示有统计学差异。用Ｍｏｄｆｉｔ软件

对荧光强度进行分析，并据此计算出ＤＮＡ合成前期、

ＤＮＡ合成期和ＤＮＡ合成后期细胞的比例。

２结果和分析

２．１ 对Ａ５４９细胞的生长抑制作用

采用ＭＴＹ法检测不同浓度ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ａ和Ｂ

对人肺癌Ａ５４９细胞的生长抑制作用，结果见表１。

与阴性对照组相比，２０、４０、６０和８０ ｔ．￣ｍｏｌ・Ｌ

”ＣＫ１：阴性对照Ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ；ＣＫ２：阳性对照（１００ ｍｇ・Ｌ一 ５一

氟尿嘧啶）Ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ（１００ ｍｇ・Ｌ ５－ＦＵ）．￥：与阴性对照

相比差异显著（Ｐ＜０．０５）Ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ

ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ（Ｐ＜Ｏ．０５）．

ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ａ和Ｂ对Ａ５４９细胞生长有显著抑制作

用（Ｐ＜Ｏ．０５），各处理组的吸光值均显著低于阴性对

照组；且随着二者浓度的提高，对Ａ５４９细胞的生长

抑制率均呈逐渐增加的趋势，这一作用具有明显的量

效关系。但各处理组的吸光值均大于阳性对照组

（１００ ｍｇ・Ｌ ５一氟尿嘧啶），其中，ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ｂ各

生长抑制率均低于阳性对照组，其中２０、４０、６０、８Ｏ

Ｉｘｍｏｌ・Ｌ ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ｂ处理组和２０、４０ Ｉｘｍｏｌ・Ｌ

ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ａ处理组的生长抑制率与阳性对照组差

异较大，而６０和８０ Ｉ．ｚｍｏｌ・Ｌ ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ａ对Ａ５４９

处理组的吸光值与阳性对照组有较大差异，而２０和

４０ Ｉｘｍｏｌ・Ｌ ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ａ处理组的吸光值与阳性

对照组也有较大差异，但６０和８０ ｔｘｍｏｌ・Ｌ

ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ａ处理组的吸光值与阳性对照组的差异

较小。由生长抑制率可见：各处理组对Ａ５４９细胞的

细胞的生长抑制率接近阳性对照组。

２．２对Ａ５４９细胞周期分布的影响

人肺癌Ａ５４９细胞的细胞周期特点是细胞群分

布于细胞的各个时期。经不同浓度ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ａ和

Ｂ处理后Ａ５４９细胞各时期的比例见表２。

表２不同浓度ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅＡ和ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ｂ对人肺癌Ａ５４９细胞周期分布的影响（Ｘ￣ＳＤ）

Ｔａｂｌｅ ２ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ａ ａｎｄ ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ｂ ｏｎ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｃｙｃｌｅ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ Ａ５４９ ｃｅｌｌ（ｘ±

ＳＤ）

Ｇｏ／Ｇｌ：ＤＮＡ合成前期ＤＮＡ ｐｒｅｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｐｈａｓｅ；Ｓ：ＤＮＡ合成期ＤＮＡ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｐｈａｓｅ；Ｇ２／Ｍ：ＤＮＡ合成后期ＤＮＡ ｐｏｓｔｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｐｈａｓｅ． ：与各

自的对照相比差异显著（Ｐ＜Ｏ．０５）Ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ（Ｐ＜Ｏ．０５）

１８ 植物资源与环境学报 第２０卷

ｓａｍｉｎｏｎｅ Ａ能导致Ａ５４９细胞ＤＮＡ合成前 影响。ｂａｌ

２０、４０、６０和８０ Ｉｘｍｏｌ・Ｌ ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ａ作用于

／Ｇ 期）的细胞比例减少、ＤＮＡ合成期（ｓ期）和 期（Ｇ。

Ａ５４９细胞４８ ｈ后，各处理组ＤＮＡ合成前期（Ｇ０／Ｇ

／Ｍ期）的细胞比例增加，说明 ＤＮＡ合成后期（Ｇ：

期）的细胞比例均较对照显著减少（Ｐ＜０．０５）；ＤＮＡ合

ｓａｍｉｎｏｎｅ Ａ主要是将人肺癌Ａ５４９细胞的生长周期 ｂａｌ

成期（Ｓ期）的细胞比例均较对照有所增加，其中，４０

阻滞在ｓ期和Ｇ ／Ｍ期，从而抑制Ａ５４９细胞生长。

和６０ Ｉ￣ｍｏｌ・Ｌ ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ａ处理组与对照差异显

ｓａｍｉｎｏｎｅ Ｂ则能导致Ａ５４９细胞中Ｇ。／Ｇ 期的细胞 ｂａｌ

著；ＤＮＡ合成后期（Ｇ ／Ｍ期）的细胞比例也均较对照

ｓ期的细胞比例增加，且这一作用具有明显 比例减少、

有所增加，其中，４０和８０ ｍｏｌ・Ｌ ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ａ处

／Ｍ期细胞则无明显作用，说明 的量效关系，而对Ｇ：

理组与对照差异显著。研究结果表明：ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ａ

作用于Ａ５４９细胞，但无明显的量效关系。

２０、４０、６０和８０ Ｉｘｍｏｌ・Ｌ ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ｂ作用于

Ａ５４９细胞４８ ｈ后，各处理组Ｇ。／Ｇ 期的细胞比例均

较对照减少，其中，６Ｏ和８０ ｐ￣ｍｏｌ・Ｌ ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ｂ

处理组与对照差异显著；Ｓ期的细胞比例均较对照显

著增加；各处理组Ｇ ／Ｍ期的细胞比例与对照差异不

大，但２０、６０和８０ ｐ．ｍｏｌ・Ｌ ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ｂ处理组较

对照小幅增加，而４０ Ｉｘｍｏｔ・Ｌ ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ｂ处理组

较对照小幅减少。研究结果表明：ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ｂ作用

于Ａ５４９细胞的Ｇ。／Ｇ 期和ｓ期，且有明显的量效关

系。

３ 讨 论

恶性肿瘤细胞异常增殖是其生物学特征之一，而

肿瘤的发生是细胞增殖与细胞凋亡相互拮抗的最终

结果，由于细胞凋亡的存在，拮抗了细胞的加速增殖，

维持细胞自身稳定，在临床上常通过各种方法和手段

诱发肿瘤细胞发生凋亡，从而达到治疗肿瘤目的。

本文的研究结果表明：从急性子中分离得到的

ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ａ和ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ｂ对人肺癌Ａ５４９细胞

的生长均具有较为显著的抑制作用，其生长抑制率随

２个化合物浓度的提高而增强，具有明显的量效关系。

但这２个化合物对Ａ５４９细胞生长的抑制作用低于常

用的药物５一氟尿嘧啶，推测其原因与化合物浓度、抑

制作用的机制等多种因素有关，有待进一步的研究证

实。

供试的２个化合物对人肺癌Ａ５４９细胞周期均有

ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ｂ主要是将Ａ５４９细胞的生长周期阻滞在

ｓ期，阻止细胞进入Ｇ：／Ｍ期，从而抑制Ａ５４９细胞的

生长。推测这２个化合物对人肺癌Ａ５４９细胞不同的

作用机制可能与ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ａ结构中包含羟基而

ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ｂ结构中包含葡萄糖苷基有关。

ｂａｌｓａｍｉｎｏｎｅ Ａ和Ｂ对Ａ５４９细胞周期的影响机制可能

是影响细胞周期蛋白的合成，也可能是通过其他途径

影响基因表达，其作用机制还有待进一步研究。

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ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｏｆ ｈｙｄｒｏｘｙａｐａｔｉｔｅ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｂｙ ｄｉｒｅｃｔ ｃｅｌｌ ｃｏｕｎｔｉｎｇ ａｎｄ ＭＴＩ＇

ｔｅｓｔ ｉｎ ｍｕｒｉｎｅ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ＮＩＨ．３Ｔ３ ｃｅｌｌｓ『Ｊ］．Ｂｉｏｍｅｄ Ｐａｐ Ｍｅｄ Ｆａｃ

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（责任编辑：张明霞）