中国朝鲜族H19基因上游差异甲基化区SNP分布

・

３６０・

Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｆｏｒｅｎｓｉｃ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｏｃｔｏｂｅｒ ２０ １ ３，Ｖｏ１．２９，Ｎｏ．５

由 ＿

国朝鲜族Ｈ１９基因上游差异甲基化区ＳＮＰ分布

韦文滔１，２，王鑫 ，王冬梅 ，田璐源 ，王保捷 ，庞灏’，丁梅’

（１．中国医科大学法医学院，辽宁沈阳ｌ１０００１；２．苏州市吴江区公安局，江苏吴江２１５２００：３．苏州市公

安局．江苏苏州２１５０００１

摘 要：目的调查中国朝鲜族群体中Ｈ１９基因上游差异甲基化区（ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａ１１ｖ ｍｅｔｈｙｌａｔｅｄ ｒｅｇｉｏｎ，ＤＭＲ）

ＳＮＰ及单倍型分布，为法医学应用及群体遗传学研究提供基础数据 方法收集中国朝鲜族１０１份无关个

体血样和ｌ４份来自５个亲缘关系已知的两代家系血样，用ＰＣＲ一循环测序、ＭｃｒＢＣ消化ＤＮＡ后ＰＣＲ方法

检测ＨＩ９基因上游ＤＭＲ的ＳＮＰ，并用亲源印记等位基因（ｐａｒｅｎｔａｌｌｙ ｉｍｐｒｉｎｔｅｄ ａｌｌｅｌｅ，ＰＩＡ）分型法进行单

倍型检测，再计算相关遗传学参数。 结果在Ｈ１９基因上游ＤＭＲ １ １７４ｂｐ的目的基因扩增产物中，共检

出１３个ＳＮＰ（ｒｓ１０８４０１６７、ｒｓ２５２５８８３、ｒｓｌ２４１７３７５、ｒｓ４９３０１０１、ｒｓ２５２５８８２、ｒｓ２７３５９７０、ｒｓ２７３５９７１、ｒｓｌ１０４２１７０、

ｒｓ２７３５９７２、ｒｓ１０７３２５１６、ｒｓ２０７１０９４、ｒｓ２１０７４２５、ｒｓ４９３００９８）和５种单倍型．有９个ＳＮＰ属于高鉴别能力的遗

传标记，其单倍型具有较高的个人识别率．单倍型平均基因多样性（ＧＤ）为０．７ｌ４ 应用ＭｃｒＢＣ酶消化基因

组ＤＮＡ的ＰＩＡ分型法确定了家系子代样本的母源单倍型 结论日Ｊ９基因上游ＤＭＲ在中国朝鲜族群体

中具有很高的遗传多态性，母源单倍型的确定进一步提高了印记基因的法医学鉴定效能

关键词：法医遗传学；多态性，单核苷酸；ＤＮＡ甲基化；Ｈ１９基因：朝鲜族

中图分类号：ＤＦ７９５．２ 文献标志码：Ａ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００４—５６１９．２０１３．０５．Ｏｌ ｌ

文章编号：１００４—５６１９（２０１３）０５—０３６０—０５

ＳＮＰ ｉｎ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ Ｍｅｔｈｙｌａｔｅｄ Ｒｅｇｉｏｎ Ｕｐｓｔｒｅａｍ ｏｆ Ｈ１９ Ｇｅｎｅ ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｋｏｒｅ—

ａｎ Ｎａｔｉｏｎａｌｉｔｙ

ＷＥ１ Ｗｅｎ—ｔｏｏｉ，２ ＷＡＮＧ Ｘｉｎｉ一，ＷＡＮＧ Ｄｏｎｇ－ｍｅｉｉ，Ｔ｜ＡＮ Ｌｕ一￣ｕａｎＩ ＷＡＮＧ ＢＯＯ— ｉｅｌ，ＰＡＮＧ Ｈｏｏｆ，ＤＩＮＧ Ｍｅｉｔ

（ ．Ｓｃｈｏｏｆ ｏＪ‘Ｆｏｒｅｎｓｉｃ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｃｈｉｎａ Ｍｅｄｉｃ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｅｗａｎｇ，１０００１，Ｃｈｉｎａ，＂２．Ｓｕｚｈｏｕ Ｗｕ ｉａｎｇ

Ｐｕｂｌｉｃ Ｓｅｃｕｒｉｔｙ Ｂｕｒｅａｕ，Ｗ“ ｉａｎｇ ２１５２００，Ｃｈｉｎａ；３．Ｓｕｚｈｏｕ Ｐｕｂｌｉｃ Ｓｅｅｕｒｉｔｙ Ｂｕｒｅａｕ。Ｓｕｚｈｏｕ ２１５０００，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ＳＮＰ ａｎｄ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｈａｐｌｏｔｙｐｅｓ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ｍｅｔｈｙｌａｔｅｄ ｒｅｇｉｏｎ

（ＤＭＲ）ｕｐｓｔｒｅａｍ ｏｆ ９ ｇｅｎｅ ｉｌｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｋｏｒｅａｎ ｎａｔｉｏｎａｌｉｔｙ ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｐｒｏｖｉｄｅ ｂａｓｉｃ ｄａｔａ ｆｏｒ ｆｏｒｅｎｓｉｃ

ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｇｅｎｅｔｉｃｓ ｒｅｓｅａｒｃｈ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ＯＢｅ ｈｕｎｄｒｅｄ ａｎｄ ｏｎｅ ｂｌｏｏｄ ｓａｍｐｌｅｓ ｆｒｏｍ ｕｎｒｅｌａｔ．

ｅｄ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｋｏｒｅａｎ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ ａｎｄ １ ４ ｂｌｏｏｄ ｓａｍｐｌｅｓ ｆｒｏｍ ５ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｋｏｒｅａｎ ｉｎｔｅｒｇｅｎｅｒａｔｉｏｎａｌ ｆａｍｉｌｉｅｓ

ｗｈｉｃｈ ｋｎｏｗｎ ｇｅｎｅｔｉｃ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｗｅｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ．Ｔｈｅ ＳＮＰ ｉｎ ＤＭＲ ｕｐｓｔｒｅａｍ ＯｆⅣ１９ ｇｅｎｅ ｗｅｒｅ ｉｎｖｅｓｔｉ—

ｇａｔｅｄ ｂｙ ＰＣＲ—ｃｙｃｌｅ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ａｎｄ ＭｃｒＢＣ ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ ｆｏｌｌｏｗｅｄ ｂｙ ＰＣＲ．Ｔｈｅ ｈａｐｌｏｔｙｐｅｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ

ｐａｒｅｎｔａｌｌｙ ｉｍｐｒｉｎｔｅｄ ａｌｌｅｌｅ（ＰＩＡ）ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ｒｅｌｅｖａｎｔ ｇｅｎｅｔｉｃ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ｗｅｒｅ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｉｒｔｅｅｎ

ＳＮＰｓ（ｒｓ１０８４０１６７，ｒｓ２５２５８８３，ｒｓ１２４１７３７５，ｒｓ４９３０１０１，ｒｓ２５２５８８２，ｒｓ２７３５９７０ ｒｓ２７３５９７１，ｒｓ１１０４２１７０，

ｒｓ２７３５９７２ ｒｓ １ ０７３２５ １ ６，ｒｓ２０７ ｌ ０９４，ｒｓ２ ｌ ０７４２５ ａｎｄ ｒｓ４９３００９８）ａｎｄ ｆｉｖｅ ｈａｐｌｏｔｙｐｅｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｉｎ １ １ ７４ ｂｐ

ｔａｒｇｅｔ ｐｒｏｄｕｃｔ ｉｎ ＤＭＲ ｕｐｓｔｒｅａｍ ｏｆ Ｈ１ ９ ｇｅｎｅ．ｗｉｔｈ ９ ＳＮＰｓ ｈａｖｉｎｇ ｈｉｇｈ ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｉｏｎ ｐｏｗｅｒ ａｓ ｇｏｏｄ

ｇｅｎｅｔｉｃ ｍａｒｋｅｒｓ．Ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｇｅｎｅ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＧＤ）ｏｆ ｈａｐｌｏｔｙｐｅｓ ｗａｓ ０．７ １ ４．Ｔｈｅ ｍａｔｅｒｎａｌ ｈａｐｌｏｔｙｐｅ ｗａｓ

ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ ｃｏｒｒｅｃｔｌｙ ｂｙ ＰＩＡ ｍｅｔｈｏｄ ｆｒｏｍ ＭｃｒＢＣ．ｄｉｇｅｓｔｅｄ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｏｆ ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｈｉ

ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ ｅｘｉｓｔ ｉｎ ＤＭＲ ｕｐｓｔｒｅａｍ ｏｆ Ｈ１ ９ ｇｅｎｅ ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｋｏｒｅａｎ ｎａｔｉｏｎａｌｉｔｙ．Ａｎｄ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ

ｔｈｅ ｍａｔｅｍａ１ ｈａｐｌｏｔｙｐｅ ｃｏｕｌｄ ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅ ｅｎｈａｎｃｅ ｔｈｅ ｆｏｒｅｎｓｉｃ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｅｆ五ｃｉｅｎｃｙ ｏｆ ｉｍｐｒｉｎｔｅｄ ｇｅｎｅ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｆｏｒｅｎｓｉｃ ｇｅｎｅｔｉｃｓ；ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ．ｓｉｎｇｌｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｃ；ＤＮＡ ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ；Ｈ１ ９ ｇｅｎｅ；ｔｈｅ Ｋｏｒｅａｎ

ｎａｔｉｏｎａｌｉｔｙ

人类体细胞的两条染色体，一条来自父亲，一条

来自母亲，绝大多数基凶座的父源和母源等位基因等 达活性低 这种亲源依赖的差异表达现象称为基因组

量表达，但在某些基冈座＿Ｊ二，只有亲代一方的等位基因 印记（ｇｅｎｏｍｉｅ ｉｍｐｒｉｎｔｉｎｇ）。在基因印记彤成过程中差

作者简介：韦文滔（１９８６一），男，壮族，广西来宾人，硕士研究

有表达活性，而另一方的等位基因无表达活性或者表

异甲基化被认为起着关键作用．即某特定亲本等位基

生，主要从事ＤＮＡ多态性研究：Ｅ—ｍａｉｌ：ｗｅｉｗｅｎｔａｏ０３１１＠１６３．ｔｏｎｉ

通信作者：丁梅，女，教授，博士研究生导师，主要从事法医物

证学鉴定和研究：Ｅ－ｍａｉｌ：ｄｉｎｇｍｅｉ１２０９＠ｇｍａｉｌ．ｃｏｍ

因在含有ＣｐＧ岛的序列 现了甲基化，而另一亲本等

位基因在该序列未出现甲基化，该序列称为差异甲基

化 （ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ｍｅｔｈｙｌａｔｅｄ ｒｅｇｉｏｎ，ＤＭＲ） 印记基冈

法医学杂志 ２０１３年１０月 第２９卷 第５期

的研究在法医个人识别及亲权鉴定方面具有特殊的 来自５个亲缘关系已知的两代家系血样的Ｈ１９基因上

意义。Ｎａｉｔｏ等［ １以特定限制性内切酶处理后的基因组

ＤＮＡ为模板，应用亲源印记等位基因（ｐａｒｅｎｔａｌｌｙ ｉｍ．

ｐｒｉｎｔｅｄ ａｌｌｅｌｅ，ＰＩＡ）分型法选择性扩增父源或母源ＤＮＡ

目的片段．确定了一个可变数目串联重复序列（ｖａｒｉａｂｌｅ

ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｔａｎｄｅｍ ｒｅｐｅａｔｓ，ＶＮＴＲ）位点的亲代来源。

Ｚｈａｏ等［２１通过甲基化特异性ＰＣＲ（ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ—ｓｐｅｃｉｉｆｃ

ＰＣＲ．ＭＳ—ＰＣＲ）方法来检测印记基因小核核糖核苷酸 分别以Ｈ１９ＳＦ３和Ｈ１９ＣＦ２为测序引物，以Ｈ１９基

蛋白Ｎ（ｓｍａｌｌ ｎｕｃｌｅａｒ ｒｉｂｏｎｕｅｌｅｏｔｉｄｅ ｐｒｏｔｅｉｎ Ｎ，ＳＮＲＰＮ）

上ＳＮＰ的母源等位基因。此外有研究 发现，Ｈ１９基 方法参照ＢｉｇＤｙｅ Ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ ｖ１．１试剂盒（美国ＡＢ公

因上游ＤＭＲ的ＳＮＰ在不同的国家和地区群体中的

分布情况存在着一定的差异，并且非洲、德国、日本等

群体中存在着特有的ＳＮＰ。人类Ｈ１９基因是印记基

因簇中的一个父源印记基因，即父源等位基因高度甲

基化而不表达，母源等位基因非甲基化而表达。

本研究应用ＤＮＡ测序技术调查中国朝鲜族群体

中Ｈ１９基因上游ＤＭＲ的ＳＮＰ分布，并用ＰＩＡ分型法

进行单倍型检测和家系分析。

１材料与方法

１．１样本及ＤＮＡ提取

收集中国朝鲜族１０１份健康无关个体血样和

ｌ４份来自５个亲缘关系已知的两代家系血样，南中

国医科大学法医学院法医血清教研室提供。

１．２引物合成

根据文献『３１合成扩增Ｈ１９基因上游ＤＭＲ的

４条引物（表１，图１）。Ｈ１９Ｒ４和Ｈ１９ＳＦ３扩增产物长

５４８ｂｐ．Ｈ１９ＳＦ３和Ｈ１９Ｒ７扩增产物长１ １７４ｂｐ Ｈ１９Ｒ７

和Ｈ１９ＣＦ２扩增产物长６６４ ｂｐ。引物对Ｈ１９ＳＦ３和

Ｈ１９Ｒ７用于目的基因扩增；引物对Ｈ１９Ｒ４和Ｈ１９ＳＦ３、

Ｈ１９Ｒ７和Ｈ１９ＣＦ２用于单倍型分析。

表１ Ｈ１９基因上游ＤＭＲ扩增引物序列

引物 序列（５ — ３ ）

Ｈ１９Ｒ４ ＧＧＣＴＴＧＧＡＴＧＡＣＣＴＧＧＧＡ

Ｈ１９ＳＦ３

Ｔ邢ＡＣＣＡＣＣＣＧＧＡＴＧＧＴＧ

Ｈ１９Ｒ７ ＧＡＧＣＴＧＴＧＣＴＣＴＧＧＧＡＴＡＧ

Ｈ１９ＣＦ２ ＡＡＡＧＴＴＣＧＣＣＣＧＴＧＧＡＡＡＣＡ

７０９７ ８２７０

（ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ＡＦ１２５１８３）

图１ ４条引物在Ｈ１９基因上游ＤＭＲ的相对位置

１．３ ＳＮＰ检测

１．３．１目的基因扩增

对中国朝鲜族１０１份健康无关个体血样和１４份 等位基因构成的３种基因型。其中分别有两组２个

・

３６１・

游ＤＭＲ进行ＰＣＲ扩增。扩增总体积为１２．５ Ｌ，包括

模板ＤＮＡ ２ Ｌ（１０－４０ｎｇ／ｐ￣Ｌ）、引物对各１ Ｌ、Ｈｏｔｓｔａｒ

Ｔａｑ￣Ｐｌｕｓ Ｍａｓｔｅｒ ｍｉｘｔｕｒｅ ５ ＩｘＬ、去离子水３．５ Ｌ。扩

增条件：９５℃５ｍｉｎ；９５ ｏＣ ３０ Ｓ，５５ ｏｃ ４５ Ｓ，７２ ｏＣ ９０ Ｓ，

共３５个循环：７２℃５ｍｉｎ。

１－３．２扩增产物分析

因上游ＤＭＲ扩增产物为模板进行ＰＣＲ测序反应，具体

司）的ＰＣＲ产物测序标准流程，并用３１３０型ＤＮＡ自动

测序仪（美国ＡＢ公司）测定其扩增产物的ＤＮＡ序列。

１．４ ＰＩＡ分型

１．４．１模板制备

ＤＮＡ测序分析为杂合子的朝鲜族个体及家系分

析中子代个体的基因组ＤＮＡ均用限制性内切酶

ＭｃｒＢＣ消化处理。酶切体系为ＭｃｒＢＣ ５Ｕ，ＢＳＡ １ Ｌ，

ＧＴＰ １ Ｌ，１０ｘ缓冲液１ Ｌ，基因组ＤＮＡ（１０～４０ｎ Ｌ）

２ Ｌ，去离子水补至１０ Ｌ。酶切条件为３７℃水浴消

化３ ｈ，６５℃水浴灭活１０ｍｉｎ。

１．４．２母源等位基因检测

以ＭｃｒＢＣ酶切产物为模板，分别用Ｈ１９Ｒ４和

Ｈ１９ＳＦ３、Ｈ１９Ｒ７和Ｈ１９ＣＦ２两对引物进行ＰＣＲ扩增。

扩增体系组成、扩增条件及扩增产物分析方法同１＿３项。

１．５数据分析

直接计数法统计各ＳＮＰ碱基突变类型例数后．

计算各ＳＮＰ的基因型频率和等位基因频率。用）（ 检

验进行Ｈａｒｄｙ—Ｗｅｉｎｂｅｒｇ平衡检验。通过ＰＩＡ分型法

确定单倍型、单倍型组合并计算单倍型频率。用

Ｈａｐｌｏｖｉｅｗ ４．１软件分析各ＳＮＰ的连锁不平衡，用

ＰｏｗｅｒＳｔａｔｓ ｖ１２软件包计算相关群体遗传学参数。

２结 果

２．１ Ｈ１９基因上游ＤＭＲ的ＳＮＰ分布

朝鲜族１０１份健康无关个体血样Ｈ１９基因上

游ＤＭＲ １ １７４ ｂｐ的目的片段中，共检出１３个ＳＮＰ

（ｒｓ１０８４０１６７、ｒｓ２５２５８８３、ｒｓｌ２４１７３７５、ｒｓ４９３０１０１、

ｒｓ２５２５８８２、ｒｓ２７３５９７０、ｒｓ２７３５９７１、ｒｓｌ １０４２１７０、

ｒｓ２７３５９７２、ｒｓ１０７３２５１６、ｒｓ２０７１０９４、ｒｓ２１０７４２５、

ｒｓ４９３００９８），各ＳＮＰ频率分布及群体遗传学参数见

表２。经吻合度检验，检出的Ｈ１９基因上游ＤＭＲ的

１３个ＳＮＰ的Ｐ值均大于０．０５，均符合Ｈａｒｄｙ—Ｗｅｉｎｂｅｒｇ

平衡定律，证明本研究的数据可信。

１３个ＳＮＰ中，除ｒｓ１２４１７３７５位点外均检出２种

・

３６２・ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｆｏｒｅｎｓｉｃ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｏｃｔｏｂｅｒ ２０１３，Ｖｏ１．２９

Ｎｏ．５

，

ＳＮＰ位点（ｒｓ２７３５９７０与ｒｓ２１０７４２５，ｒｓ２７３５９７１与

ｒｓ２７３５９７２）和一组６个ＳＮＰ位点（ｒｓ１０８４０１６７、

ｒｓ４９３０１０１ ｒｓ１ １０４２１７０ ｒｓ１０７３２５１６ ｒｓ２０７１０９４

经计算，中国朝鲜族单倍型的平均基因差异度（ＧＤ）

为０．７１４，杂合度（Ｈ）为０．６７３，多态信息含量（ＰＩＣ）为

０．６６０，非父排除率（ＰＥ）为０．３８８

Ｈ１９基因上游ＤＭＲ扩增产物ＤＮＡ测序确定的

ｒｓ４９３００９８）的基因型频率相同，通过Ｈａｐｌｏｖｉｅｗ ４．１软

件分析结果显示，１３个ＳＮＰ处于连锁不平衡（表３）

５个家系１４份样本的单倍型组合见表５．其中家系ｌ

的被控父不能提供作为孩子亲生父亲必须提供的单

倍型而被排除父权。家系２～５的被控父中可检见与孩

２．２ Ｈ１９基因上游ＤＭＲ单倍型分布

１０１份中国朝鲜族健康无关个体血样Ｈ１９基因

上游ＤＭＲ检出的ｌ３个ＳＮＰ位点，构成了１２种单倍

子相同的单倍型，不能排除其父权．但其中家系２孩

子的单倍型Ⅱ，经ＰＩＡ分型确定为母源等位基因构成

的单倍型，据此排除父权

型组合，经ＰＩＡ分型进一步检测共确认了５种单倍型，

根据其频率从高到低依次命名为单倍型Ｉ～Ｖ（表４）。

法医学杂志 ２０１３年 １０月 第２９卷 第５期

二三 ，Ｉ 罩｝ ｚ∽ 害 醐 雹 嵩 圃岳ｎ

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３６３・

・

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・

３６４・

３讨论

３．１ Ｈ１９基因上游ＤＭＲ的ＳＮＰ群体分布

基【大ｊ组印记是指由于表观遗传学水平的修饰特

意地沉默某一亲代来源的等位基因的现象．这种在生

物进化中形成、有规律而又受控的基因失活是机体中

基因表达调节的一种重要方式 Ｈ１９基冈是研究较早

的一个印记基【大Ｊ，它位下人类染色体１ｌｐｌ５．５区域，表

达为一种功能尚不清楚的ＲＮＡ。Ｈ１９基因上游２．５～

７．６ｋｂ的ＤＭＲ是ＳＮＰ位点较多的 域。迄今为止，存

序列号ＡＦ１２５１８３碱基位置７ １４９～８ ２１７，已报道的有

２３个ＳＮＰ位点，但有关中国人Ｈ１９基因上游ＤＭＲ的

ＳＮＰ分布的群体调查研究尚不充分。本研究中围朝鲜

族群体ＨＪ９上游ＤＭＲ目的基因片段内检出的１３个

ＳＮＰ位点中，未发现新的变异点和人群特有的ＳＮＰ位

点。Ｎａｋａｙａｓｈｉｋｉ等ｌ １报道的日本群体的Ｊｐ—ｓｐｌ，加纳群

体的Ａｆ—ｓｐ ｌ、Ａｆ—ｓｐ２、Ａｆ—ｓｐ３、Ａｆ—ｓｐ４、Ａｆ—ｓｐ５、Ａｆ—ｓｐ６

及德同群体的Ｇｅ—ｓｐｌ、Ｇｅ—ｓｐ２等ＳＮＰ位点也未在中

国朝鲜族群体中检Ⅲ 。

本群体 查数据和中国汉族（武汉）群体调查

数据１４ｌ比较．Ｈ１９印记基因ＤＭＲ在中国朝鲜族群

体中具有更高的遗传多态性。Ｈ１９印记基因ＤＭＲ的

７ ３４２～８ ００８ ｂｐ范围内，中国朝鲜族群体检 的８个

ＳＮＰ（ｒｓ２５２５８８２、ｒｓ２７３５９７０、ｒｓ１ｌ０４２１７０、ｒｓ２１０７４２５、

ｒｓ２７３５９７１、ｒｓ２７３５９７２、ｒｓ１０７３２５ １６、ｒｓ２０７１０９４）位点

中．仪有４个位点（ｒｓ２５２５８８２、ｒｓ２７３５９７０、ｒｓｌ１０４２１７０、

ｒｓ２１０７４２５）存中国汉族群体检出多态性，两个群体间

除ｒｓｌ １０４２１７０外，其余３个ＳＮＰ等位基冈频率分布存

存显著性差 ：而中国汉族群体检 的序列ＡＦ１２５１８３

中７ ３５１ ｂｐ碱基突变却未能在中国朝鲜族群体中检

… 南此可 ．Ｈ１９印 基因ＤＭＲ的ＳＮＰ分布存不

同人种、不同地区、不同民族问均存在差异，是人类遗

传学研究的良好遗传标记。

３．２法医学意义

ＳＮＰ作为第■代遗传标记，含量丰富，有较高的

遗传稳定性， 法医物证检验领域有重要的应用价值。

但ＳＮＰ多为■等位基凶．信息量有限，提供更多的ＳＮＰ

检测 ‘能达到较高的个人识别能力。本研究在中国朝

鲜族群体共检｝｝Ｉ了Ｈ１９基因上游ＤＭＲ的１３个ＳＮＰ，

其中９个ＳＮＰ位点的ＤＰ＞０．５，属于高鉴别能力遗传标

记．是个人识别及亲子鉴定较为理想的候选ＳＮＰ位

点．．根据遗传学理论，分布在Ｈ１９基因上游ＤＭＲ仅

ｌ １７４Ｉ）Ｄ片段内检出的１３个ＳＮＰ位点是连锁遗传标

，

通过计算其单倍型频率求得其平均ＧＤ、Ｈ、ＰＩＣ及

ＰＥ分别为０．７１４、０．６７３、０．６６０、０．３８８，说明该遗传标记

系统在法医学鉴定中具有较好的实用价值 本研究实

Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｆｏｒｅｎｓｉｃ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｏｃｔｏｂｅｒ ２０ １ ３，Ｖｏ１．２９，Ｎｏ．５

际检出的单倍型数目远低于理论推测的８ １９２种可

能单倍型数目，其原因在于部分位点呈紧密连锁关系

因此如果通过重新设计能够选择性扩增６个相邻非

连锁位点的引物，可以明显缩短目的基因扩增片段．

以适应降解检材ＤＮＡ分型的需要，同时又可保证与

１ １７４ｂｐ扩增片段ＳＮＰ分型相同的法医学鉴定效能

人类Ｈ１９基因上游ＤＭＲ富含ＣｐＧ岛．ＣｐＧ位

点父源等位基因呈甲基化状态，母源等位基因呈非甲

基化，即Ｈ１９基因在正常组织内为母源等位基因表

达、父源等位基因印记，为单倍型分析及等位基Ｉ犬Ｉ

的亲源鉴定提供了一种新的思路。根据 ７９基因上

游ＤＭＲ的分子生物学特征，Ｙａｍａｄａ等ｌ ５】利用Ｈｐａ Ｈ、

ＭｃｒＢＣ对５一甲基化胞嘧啶和非甲基化胞嘧啶的不同

敏感程度，建立了广泛用于ＤＮＡ甲基化检测的／ｐａ

Ⅱ一ＭｃｒＢＣ ＰＣＲ方法。ＭｃｒＢＣ是一种作用于含有甲基

胞嘧啶ＤＮＡ的特异性核酸内切酶．能够特异性地识

别和切割包含两个（Ｇ／Ａ）ｍＣ间距在４０～２ ０００ ｂｐ的

ＤＮＡ序列 本研究以限制性内切酶ＭｃｒＢＣ消化后的

基因组ＤＮＡ为模板进行ＰＣＲ扩增及ＤＮＡ测序分

析，南于 』９基因上游ＤＭＲ甲基化的父源ＤＮＡ链

被消化，其检测结果只反映母源等位基因及其构成的

母源单倍型。这种ＰＩＡ分型方法，可以鉴别两个个体

具有的相同等位基冈（或单倍型）是否同源，在亲缘关

系鉴定，特别是单亲、同胞（或半同胞）等的亲缘关系

鉴定中，以及个人识别中均具有特殊的意义。

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（收稿日期：２０１２－０５—０９）

（本文编辑：柳燕）