注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针的质量检测方法

注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针的质量检测方法

技术领域

本发明属于注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针的质量检测方法。

背景技术

以刺五加根茎入药的刺五加注射液的质量标准是以芦丁作为对照品， 采用分光光度法测定总黄酮含量，而芦丁在刺五加中不是含量最高的黄酮类 化合物，所以测定结果偏差较大；且缺乏单体黄酮化合物的含量测定方法； 而迄今为此，尚没有以刺五加叶中的总黄酮作为制剂并提供相应的质量检测 方法。

发明内容

本发明为定性、定量检测注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针的质量 检测方注。采用薄层谱定性鉴别注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针中 的刺五加叶药材及金丝桃苷，采用分光光度法测定注射用刺五加叶总黄酮提 取物冻干粉针中总黄酮的含量，采用高效液相谱检测注射用刺五加叶总黄 酮提取物冻干粉针中金丝桃苷的含量，从而为确保注射用刺五加叶总黄酮提 取物冻干粉针的质量稳定、安全可靠，提供用于质量控制的更科学和更高效 方法。

实现本发明的步骤和条件如下：

1.注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针的观察与薄层鉴别。

(1)取注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针观察，内容物为黄棕疏 松固体状物；气微，味微苦；

(2)注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针内容物10mg-30mg，置锥形瓶 中，加60％-95％乙醇5ml，超声处理使溶解，作为供试品溶液。另取金丝桃 苷对照品，加60％-95％乙醇制成每1ml含0.25-0.50mg的溶液，作为对照品 溶液。再取刺五加对照药材粉末1g，加入甲醇30ml，回流1小时，滤过， 滤液浓缩至干，残渣加水10ml溶解，在60℃～90℃，用石油醚提取5次， 每次20ml，弃去石油醚液，水层蒸干，残渣加乙醇1ml溶解，作为对照药材 溶液。照中国药典2000年版一部附录VI B的薄层谱法试验，吸取上述三 种溶液各3μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以体积比为3-5∶∶1-3∶2-4∶ 0.5-1的苯—甲醇—丁酮—冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯 化铝试液，置波长为365nm紫外灯下检视。注射用刺五加叶总黄酮提取物冻 干粉针供试品溶液谱中，与金丝桃苷对照品及刺五加叶对照药材谱相应 的位置上，显相同颜的荧光斑点。

2、注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针的含量测定

(1)分光光度法测定总黄酮含量

精密称取金丝桃苷对照品适量，加60％-95％乙醇制成每1ml含金丝桃苷 0.25-0.5mg的溶液，即得金丝桃苷对照品溶液。

精密量取金丝桃苷对照品溶液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml分 别置5ml量瓶中，各加60％-95％乙醇至1ml及5％亚硝酸钠0.2ml，摇匀，放 置6分钟，加入10％硝酸铝溶液0.2ml，摇匀，放置6分钟，加入4％氢氧化钠 溶液1.0ml，再加60％-95％乙醇至5ml，放置15分钟，以相应试剂为空白， 立即照中国药典2000年版一部附录V B的分光光度法，于490nm-510nm-波 长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

取注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针内容物约20mg-40mg，置50ml 量瓶中，加60-95％乙醇溶解并稀释至50ml，摇匀，精密量取该溶液0.5ml， 置5ml量瓶中，加60％-95％乙醇至1ml，加5％亚硝酸钠0.2ml，摇匀，放置6 分钟，加入10％硝酸铝溶液0.2ml，摇匀，放置6分钟，加入4％氢氧化钠溶液 1.0ml，再加60％-95％乙醇至5ml，放置15分钟，以60％-95％乙醇为空白，立 即照中国药典2000年版一部附录V B的分光光度法，于490nm-510nm-波长 处测定吸光度。从标准曲线上读出注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针供 试品溶液中金丝桃苷的重量，计算，即得该中金丝桃苷的含量。冻干粉针每 支含总黄酮以金丝桃苷(C₂₁H₂₀O₁₂)计，不得少于50mg。

(2)高效液相谱法测定金丝桃苷含量

谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲 醇和0.1％-0.5％醋酸溶液为流动相，两者体积比为30-40∶70-60，波长 254-360nm。

精密称取金丝桃苷对照品适量，加60％-95％乙醇制成每1ml含 0.05-0.15mg金丝桃苷的溶液，即得金丝桃苷对照品溶液。

取注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针内容物约25-40mg，精密称定， 置50ml量瓶中，用60％-95％乙醇溶解并稀释至50ml，摇匀，即得注射用刺 五加叶总黄酮提取物冻干粉针供试品溶液。

分别精密吸取金丝桃苷对照品溶液和注射用刺五加叶总黄酮提取物冻 干粉针供试品溶液各10μl，注入液相谱仪中，测定。冻干粉针每支含金 丝桃苷(C₂₁H₂₀O₁₂)不得少于5.0mg。

上述步骤并不需要按照先后顺序进行。而且同时还可以进行常规检测， 该注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针成品为注射剂，符合中国药典2000 年版一部附录I U的注射剂项下有关的各项规定。经本发明的方法检测， 符合以上条件地注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针成品为合格品。

本发明为定性、定量检测注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针的质量 检测方注。采用薄层谱定性鉴别注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针中 的刺五加叶药材及金丝桃苷，采用分光光度法测定注射用刺五加叶总黄酮提 取物冻干粉针中总黄酮的含量，采用高效液相谱检测注射用刺五加叶总黄 酮提取物冻干粉针中金丝桃苷的含量，从而为确保注射用刺五加叶总黄酮提 取物冻干粉针的质量稳定、安全可靠，提供用于质量控制的更科学和更高效 方法。

具体实施方式

实施例1：一种注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针的成分含量检测 方法，包含如下步骤和条件：

1.注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针的观察与薄层鉴别

(1)取注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针观察，内容物为黄棕疏 松固体状物；气微，味微苦；

(2)注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针内容物10mg，置锥形瓶中， 加95％乙醇5ml，超声处理使溶解，作为供试品溶液。另取金丝桃苷对照品， 加95％乙醇制成每1ml含0.50mg的溶液，作为对照品溶液。再取刺五加叶对 照药材粉末1g，加入甲醇30ml，回流1小时，滤过，滤液浓缩至干，残渣 加水10ml溶解，用石油醚(60℃～90℃)提取5次，每次20ml，弃去石油 醚液，水层蒸干，残渣加乙醇1ml溶解，作为对照药材溶液。照薄层谱法 (中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各3μl，分别 点于同一聚酰胺薄膜上，以苯—甲醇—丁酮—冰醋酸(4∶1∶4∶1，v/v) 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外灯(365nm)下 检视。注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针供试品谱中，与金丝桃苷对 照品及刺五加叶对照药材谱相应的位置上，显相同颜的荧光斑点。

2、注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针的含量测定

(1)分光光度法测定总黄酮含量

精密称取金丝桃苷对照品适量，加95％乙醇制成每1ml含0.5mg金丝桃 苷的溶液，即得金丝桃苷对照品溶液。

精密量取金丝桃苷对照品溶液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml分 别置5ml量瓶中，各加95％乙醇至1ml，加5％亚硝酸钠0.2ml，摇匀，放置6 分钟，加入10％硝酸铝溶液0.2ml，摇匀，放置6分钟，加入4％氢氧化钠溶液 1.0ml，再加95％乙醇至5ml，放置15分钟，以相应试剂为空白，立即照分 光光度法(中国药典2000年版一部附录V B)，于490nm-波长处测定吸光度。 以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

取注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针内容物约20mg，精密称定，置 50ml量瓶中，加95％乙醇溶解并稀释至50ml，摇匀，精密量取0.5ml，置5ml 量瓶中加95％乙醇至1ml，加5％亚硝酸钠0.2ml，摇匀，放置6分钟，加入 10％硝酸铝溶液0.2ml，摇匀，放置6分钟，加入4％氢氧化钠溶液1.0ml，再 加95％乙醇至5ml，放置15分钟，以95％乙醇为空白，立即照分光光度法(中 国药典2000年版一部附录V B)，于490nm-波长处测定吸光度。从标准曲线 上读出注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针供试品溶液中金丝桃苷的重 量，计算，即得该中金丝桃苷的含量。冻干粉针每支含总黄酮以金丝桃苷 (C₂₁H₂₀O₁₂)计，不得少于50mg。

(2)高效液相谱法测定金丝桃苷含量

谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇 -0.5％醋酸溶液(30∶70，v/v)，波长355nm。

精密称取金丝桃苷对照品适量，加95％乙醇制成每1ml含0.10mg金丝桃 苷的溶液，即得金丝桃苷对照品溶液。

取注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针内容物约25mg，精密称定，置 50ml量瓶中，用95％乙醇溶解并稀释至50ml，摇匀，即得注射用刺五加叶总 黄酮提取物冻干粉针供试品溶液。

分别精密吸取上述对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相谱仪 中，测定。本冻干粉针每支含金丝桃苷(C₂₁H₂₀O₁₂)不得少于5.0mg。符合以上 条件的注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针成品为合格品。

实施例2

1.注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针的观察与薄层鉴别

(1)取注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针观察，内容物为黄棕疏 松固体状物；气微，味微苦；

(2)注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针内容物20mg，置锥形瓶中，加 60％％乙醇5ml，超声处理使溶解，作为供试品溶液。另取金丝桃苷对照品， 加60％乙醇制成每1ml含0.25mg的溶液，作为对照品溶液。再取刺五加对照 药材粉末1g，以实施例1的制备方法制备对照药材溶液并吸取上述三种溶液 各3μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以苯—甲醇—丁酮—冰醋酸(4.5∶2∶ 3∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外灯(365nm) 下检视。注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针供试品谱中，与金丝桃苷 对照品及刺五加叶对照药材谱相应的位置上，显相同颜的荧光斑点。

2、注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针成品的含量测定

(1)分光光度法测定总黄酮含量

精密称取金丝桃苷对照品适量，加60％乙醇制成每1ml含0.5mg金丝桃 苷的溶液，即得对照品溶液。

利用实施例1中标准曲线的绘制方法在500nm波长下测定吸光度。以吸 光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

取注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针内容物约20mg，精密称定，置 50ml量瓶中，加60％乙醇溶解并稀释至50ml，摇匀，精密量取0.5ml，置5ml 量瓶中，加60％％乙醇至1ml，加5％亚硝酸钠0.2ml，摇匀，放置6分钟，加 入10％硝酸铝溶液0.2ml，摇匀，放置6分钟，加入4％氢氧化钠溶液1.0ml， 再加60％乙醇至5ml，放置15分钟，以60％乙醇为空白，立即照分光光度法(中 国药典2000年版一部附录V B)，于500nm-波长处测定吸光度。从标准曲线 上读出注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针供试品溶液中金丝桃苷的重 量，计算，即得该中金丝桃苷的含量。冻干粉针每支含总黄酮以金丝桃苷 (C₂₁H₂₀O₁₂)计，不得少于50mg。

(2)高效液相谱法测定金丝桃苷含量

谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇 -0.3％醋酸溶液(31∶69)，波长280nm。

精密称取金丝桃苷对照品适量，加60％制成每1ml含金丝桃苷0.05mg 的溶液，即得金丝桃苷对照品溶液。

取注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针内容物约30mg，精密称定，置 50ml量瓶中，用60％乙醇溶解并稀释至50ml，摇匀，即得注射用刺五加叶总 黄酮提取物冻干粉针供试品溶液。

分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μ1，注入液相谱仪中， 测定。本冻干粉针每支含金丝桃苷(C₂₁H₂₀O₁₂)不得少于5.0mg。符合以上条件 的注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针成品为合格品。

实施例3：

1.注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针的观察与薄层鉴别

(1)取注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针观察，内容物为黄棕疏 松固体状物；气微，味微苦；

(2)注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针内容物30mg，置锥形瓶中，加 70％乙醇5ml，超声处理使溶解，作为供试品溶液。另取金丝桃苷对照品，加 70％乙醇制成每1ml含0.30mg的溶液，作为对照品溶液。以实施例1的制备 方法制备对照药材溶液并吸取上述三种溶液各3μl，分别点于同一聚酰胺薄 膜上，以苯—甲醇—丁酮—冰醋酸(3∶3∶3∶1)为展开剂，展开，取出， 晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外灯(365nm)下检视。注射用刺五加叶总 黄酮提取物冻干粉针供试品谱中，与金丝桃苷对照品及刺五加叶对照药材 谱相应的位置上，显相同颜的荧光斑点。

2、注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针的含量测定

(1)分光光度法测定总黄酮含量

精密称取金丝桃苷对照品适量，加70％乙醇制成每1ml含0.3mg金丝桃 苷的溶液，即得金丝桃苷对照品溶液。

利用实施例1中标准曲线的绘制方法在510nm波长下测定吸光度。以吸 光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

取注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针内容物约30mg，精密称定，置 50ml量瓶中，加70％乙醇溶解并稀释至50ml，摇匀，精密量取0.5ml，置5ml 量瓶中，加70％乙醇至1ml，加5％亚硝酸钠0.2ml，摇匀，放置6分钟，加 入10％硝酸铝溶液0.2ml，摇匀，放置6分钟，加入4％氢氧化钠溶液1.0ml， 再加70％乙醇至5ml，放置15分钟，以70％乙醇为空白，立即照分光光度法(中 国药典2000年版一部附录V B)，于510nm-波长处测定吸光度。从标准曲线 上读出注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针供试品溶液中金丝桃苷的重 量，计算，即得该中金丝桃苷的含量。冻干粉针每支含总黄酮以金丝桃苷 (C₂₁H₂₀O₁₂)计，不得少于50mg。

(2)高效液相谱法测定金丝桃苷含量

谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇 —0.1％醋酸溶液(35∶65)，波长254nm。

精密称取金丝桃苷对照品适量，加70％制成每1ml含金丝桃苷0.15mg 的溶液，即得金丝桃苷对照品溶液。

取注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针内容物约35mg，精密称定，置 50ml量瓶中，用70％乙醇溶解并稀释至50ml，摇匀，即得注射用刺五加叶总 黄酮提取物冻干粉针供试品溶液。

分别精密吸取上述对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相谱仪 中，测定。本冻干粉针每支含金丝桃苷(C₂₁H₂₀O₁₂)不得少于5.0mg。符合以上 条件的注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针成品为合格品。

实施例4：

1.注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针的观察与薄层鉴别

(1)取注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针观察，内容物为黄棕疏 松固体状物；气微，味微苦；

(2)注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针内容物25mg，置锥形瓶中，加 80％乙醇8ml，超声处理使溶解，作为供试品溶液。另取金丝桃苷对照品，加 80％乙醇制成每1ml含0.40mg的溶液，作为对照品溶液。以实施例1的制备 方法制备刺五加叶对照药材溶液。照薄层谱法(中国药典2000年版一部附 录V工B)试验，吸取上述三种溶液各3μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以 苯一甲醇一丁酮一冰醋酸(5∶2∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷 以三氯化铝试液，置紫外灯(365nm)下检视。注射用刺五加叶总黄酮提取 物冻干粉针供试品谱中，与金丝桃苷对照品及刺五加叶对照药材谱相应 的位置上，显相同颜的荧光斑点。

2、注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针成品的含量测定

(1)分光光度法测定总黄酮含量

精密称取金丝桃苷对照品适量，加80％乙醇制成每1ml含0.40mg金丝桃 苷的溶液，即得金丝桃苷对照品溶液。

利用实施例1中标准曲线的绘制方法在505nm波长下测定吸光度。以吸 光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

取注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针内容物约25mg，精密称定，置 50ml量瓶中，加80％乙醇溶解并稀释至50ml，摇匀，精密量取0.5ml，置5ml 量瓶中，加80％乙醇至1ml，加5％亚硝酸钠0.2ml，摇匀，放置6分钟，加 入10％硝酸铝溶液0.2ml，摇匀，放置6分钟，加入4％氢氧化钠溶液1.0ml， 再加80％乙醇至5ml，放置15分钟，以80％乙醇为空白，立即照分光光度法(中 国药典2000年版一部附录V B)，于505nm-波长处测定吸光度。从标准曲线 上读出注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针供试品溶液中金丝桃苷的重 量，计算，即得该中金丝桃苷的含量。冻干粉针每支含总黄酮以金丝桃苷 (C₂₁H₂₀O₁₂)计，不得少于50mg。

(2)高效液相谱法测定金丝桃苷含量

谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇 —0.4％醋酸溶液(40∶60)，波长360nm。

精密称取金丝桃苷对照品适量，加80％制成每1ml含金丝桃苷0.12mg 的溶液，即得金丝桃苷对照品溶液。

取注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针内容物约40mg，精密称定，置 50ml量瓶中，用80％乙醇溶解并稀释至50ml，摇匀，即得注射用刺五加叶总 黄酮提取物冻干粉针供试品溶液。

分别精密吸取上述对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相谱仪 中，测定。本冻干粉针每支含金丝桃苷(C₂₁H₂₀O₁₂)不得少于5.0mg。符合以上 条件的注射用刺五加叶总黄酮提取物冻干粉针成品为合格品。